人类免疫缺陷病毒抗体检测（酶联免疫法）标准操作规程.docx

1、人类免疫缺陷病毒抗体检测(酶联免疫法)标准操作规程(一)*生物L操作方法：(1)将试剂盒平衡至室温，取出所需的条板，剩余的即时封存。(2)用去离子水合蒸储水25倍稀释浓缩洗涤液。(3)将所需数量的条板固定于支架按顺序编号设置样品孔、外部对照孔、阳性对照孔和阴性对照孔每次实验需设外部对照阳性对照2孔、阴性对照1孔。(4)在样品孔中加入100UI待测样品，阴性、阳性对照及外部对照每孔加入100UL轻拍混匀。(5)置37。C温育60分钟。(6)置洗板机用洗涤液充分洗涤5遍，扣干。(7)每孔加入100UI酶标记物，轻拍混匀，置37。C温育30分钟。(8)重复步骤。(9)在所有孔内加显色A、显色B剂各5

2、0ul,轻拍混匀，置37。C避光温育30分钟。(IO)每孔加入50UI终止液终止显色反应，用酶标仪(双波长450nm630n11)测定各孔A值。2.结果判定：(1)临界值CUtOff=O.1+阴性对照的平均A值(阴性对照的平均A值小于0.08按0.08计算，大于0.08按实际值计算），样品的A值与CUtOff值为艾滋病抗体阳性；样品的A值CutOff值为艾滋病抗体阴性。（2）同时满足以下条件的实验是有效的。 NCO.8,抗-艾滋病-2阳性对照OD值0.3 双波长读数，显色剂空白WO.040,单波长读数，显色剂空白三。080. 计算COV：COV=PCxX10%（若PCx2.5按2.5计算）初筛

3、阳性者应重新取样进行双盲复试，复试阳性者应按照“全国艾滋病检测管理规范”送艾滋病确认实验室进行相关确认试验。(二)*生物1 .操作方法：(1)配液:将浓缩洗涤液用蒸镭水或去离子水20倍稀释。(2)编号：将样品对应微孔板按序号编号，每板应设阴性对照3孑L,阳性对照1型，2型各1孑L,空白对照1孔。(用双波长检测，可不设空白对照孔)。(3)加样：分别在相应孔中加入待测样品或阴性，阳性对照100ul.(4)温育:用封板膜封板后，置371。C温育602分钟。(5)洗板：小心揭掉封板膜，用洗板机洗涤5遍，最后一次尽量拧干。(6)加酶：每孔加入酶标试剂100U1,空白孔除外。(7)温育:用封板膜封板后，置

4、371。C温育301分钟。洗板:操作同步骤5.(9)显色：每孔加入显色剂A,B液各50UL轻轻振荡混匀，371。C避光显色301分钟。(IO)测定：每孔加终止液50ul,轻轻振荡混匀，10分钟内测定结果。设定酶标仪波长于45OnnI处(建议用双波长450nm600-650nm),用空白孔凋零后测定各孔A值。2 .结果判读：(1)阴性对照孔A值WO.10,阳性对照孔A值20.80,否则实验无效。若有1孔阴性对照A值大于0.1应舍弃；若两孔或两孔以上阴性对照A值大于0.1,实验无效。(3)阴性判定：样品A值临界值(CUTOFF)者为艾滋病抗体阴性。(4)阳性判定:样品A值2临界值(CUTFF)者为艾滋病抗体阳性(注意：初试阳性应重新取样双孔复试。复试阳性者按全国艾滋病检测技术规范送艾滋病确证实验室进行确证实验。)