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1、唾液淀粉酶最适pH值的测定实验实验目的1掌握设计性实验的基本思路，并完成设计报告。2掌握唾液淀粉酶最适PH的测定原理和方法。3熟悉影响酶促反应速度的因素。实验原理1酶促反应速度受到许多因素的影响，如温度、PH、激动剂和抑制剂等。上述诸因素对唾液淀粉酶催化淀粉水解反应速度的影响，可用定性或定量的反应来观察。利用碘与淀粉机器不同程度纾解产物反应的颜色，来衡量酶促反应的速度的快慢。蓝色紫红色黄色，颜色由蓝变黄，表示酶促反应速度由慢到快。此为定性观察。2.进一步利用郎伯比尔定律来判定溶液的吸光度与溶液的浓度符合一定的比例关系。由于在被水解的程度也不一样。当唾液淀粉酶不能将完全水解时，淀粉遇碘呈蓝色，吸
2、收波长位于660nm处。不同PH环境中唾液淀粉酶与淀粉的反应程度不同，吸光度值也不同。因此，通过测量660nm处的吸光度值，可以了解PH对酶促反应的影响，吸光度最小的溶液其PH即为唾液淀粉酶的最适PH。A660PH最适PH实验器材仪器材料：方盘，试管架，中试管，毛刷，吸耳球，玻璃铅笔，小烧杯，白瓷板，坐标纸，漱口杯。0.1ml、0.5ml、1.0ml、2.0ml、5.0ml、10.0ml刻度吸管，胶头滴管，37 C恒温水浴箱，分光光度计，电磁炉。 试剂药品： 0.02淀粉溶液. 0.2mol/L磷酸二氢钠溶液、0.2mol/L磷酸氢二钠溶液 碘液；称取碘1g,碘酸钾2g，溶于300ml蒸馏水中
3、。实验步骤：1、 缓冲液的配置 pH 0.2mol/L 0.2mol/LNaH2PO4(ml) Na2HPO4(ml)5.7 93.5 6.55.8 92.0 8.05.9 90.0 10.06.0 87.7 12.36.1 85.0 15.0 6.2 81.5 18.56.3 77.5 22.56.4 73.5 26.56.5 68.5 31.56.6 62.5 37.56.7 56.5 43.56.8 51.0 49.06.9 45.0 55.07.0 39.0 61.07.1 33.0 67.07.2 28.0 72.07.3 23.0 67.07.4 19.0 81.07.5 16.0
4、 84.07.6 13.0 87.07.7 10.5 89.5 7.8 8.5 91.57.9 7.0 93.08.0 5.3 94.72、唾液的取法：（1）先给备取者一杯纯净水让其漱口，将漱口液吐掉，再将一块消毒脱脂棉球用镊子放在备取者的舌下，过大约半分钟至一分钟，备取者感觉棉球湿透，用镊子将棉球取出，置于烧杯中，倒入蒸馏水，用玻璃棒充分搅拌，将棉球取出，即制成唾液实验备用液。（2）让备取者下嘴唇抵住干净的杯子口，在备取者眼前放上一些话梅，这时，备取者的唾液会不停地流出来。（3）准备一个干净的杯子，用手扯住嘴角，等待大约2分钟后，就可以获得唾液。实验方案（1）唾液的稀释：取10支试管，分别编
5、上号0009编号 0 1 2 3 4 5 6 7 8 9唾液 0.1 0.1 0.1 0.1 0.1 0.1 0.1 0.1 0.1 0.1蒸馏水 4.9 9.9 14.9 19.9 24.9 29.9 34.9 39.9 44.9 49.9(2)最适唾液稀释倍数的选取取上述稀释的唾液各1ml，分别加入另取的10支试管中，分别编上AJ号的试管里，向10支试管内同时加入1ml的0.02的淀粉溶液，振荡混匀后放入37 C恒温水浴几分钟后取出，滴加12滴碘液，振荡混匀，观察颜色，选取颜色变为淡黄色最快的一支，记录其稀释倍数，作为下面实验的最适唾液稀释倍数。（3）最适PH的测定编号 1 2 3 4 5 6 7 8 9 PH颜色A660A660PH实验结果最适PH=？实验分析思考题1）本实验为什么要寻找较合适的唾液稀释倍数？答：为了跟好的找到唾液淀粉酶的合适浓度，是的最后测定的最适PH精确。2）在研究PH对酶促反应速度的影响是，前提条件是什么？答：温度，底物浓度，酶浓度保持恒定。3）所测吸光度中，吸光度值最小溶液所对应的PH一定是唾液淀粉酶的最适PH吗？答：不一定，最适PH值应当是根据A-PH的图来确定，图的最低点为最适PH，不一定就是所测最小的吸光度值。4）总结本实验的注意事项使用分光光度计时要调零反应时必须是在37的水浴中。参考文献常东胜，潘洪明 医学化学实验 科学出版社