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1、实验八、蛋黄卵磷脂的制备,专业综合实验2,化学与环境工程学院,主讲：孟江平,一、实验目的,1、了解并掌握鸡蛋黄卵磷脂的制备工艺原理和方法。,教学重点：,1、鸡蛋黄卵磷脂的制备工艺原理和方法。,教学方法：讲授、实际指导。 教学时数：8学时。 教学过程:,三、实验原理,卵磷脂最早发早发现于1844年，由法国学者葛布利（Gobley）从蛋黄中分离出来，故而得名。卵磷脂是构成生物体细胞膜的重要成分之一，广泛存在于动植物体内。虽然许多食物中都含有一定的卵磷脂，其中大豆、卵黄和动物肝脏中的卵磷脂含量较高。卵磷脂既是一种重要且安全的食品乳化剂，有事一种保健食品。此外还广泛应用于临床上心脑血管及肝、肿瘤等疾病
2、的治疗，及作为药物载体。,卵磷脂为两性分子，既具有脂溶性，又具有亲水性。其等电点约为ph6.7。卵磷脂外观为浅黄色至浅棕色粉末或半透明黏稠状液态物质，有清淡柔和的风味和香味。卵磷脂可溶于乙醇、甲醇、氯仿等有机溶剂中，也能溶于水成为胶体状态，但不溶于丙酮，且不同的磷脂在有机溶剂中溶解度不同，故可用有机溶剂来提取分离卵磷脂。但单纯用溶剂萃取制备卵磷脂是所得产品纯度不高，如果在萃取过程中加入酸、碱或盐类物质，利用金属离子或酸、碱对卵磷脂分子的选择性，可以获得较高纯度的卵磷脂。 本实验使用有机溶剂从鸡蛋卵黄中提取卵磷脂、利用金属盐沉淀纯化卵磷脂，并对卵磷脂的质量进行分析。,二、实验材料、试剂与仪器,1
3、、材料： 新鲜鸡蛋、卵磷脂对照品。 2、试剂： 乙醇（95%）、无水乙醇、丙酮、石油醚、氯化锌、氯仿、甲醇、碘，均为分析纯。 3、仪器： 紫外可见分光光度计、旋转蒸发仪、真空干燥箱、恒温磁力搅拌器、离心机、GF250硅胶板（10cm20cm）、薄层色谱展开缸、玻璃毛细管（内径0.91.1mm，壁厚0.100.15mm，管长100mm）等。,三、实验实验方法与步骤,1、蛋黄的收集 采用放置于冰箱保存的新鲜鸡蛋。打蛋是要注意保证蛋黄的完整性，分离蛋黄，备用。 2、卵磷脂的提取 取100g鸡蛋卵黄于烧杯中，加入200ml95%乙醇，置磁力搅拌器室温下搅拌1h，3000r/min离心分离10min，将
4、沉淀物再加入95%乙醇，重复以上步骤3次。收集上清液，45下减压蒸馏至近干，用少量石油醚溶解，得石油醚溶液，于石油醚溶液中加入适量丙酮，分离出沉淀物，置搪瓷盘中摊平，厚度不易超过1.5cm，40左右减压真空干燥24h，得淡黄色的卵磷脂粗品，准确称量，记录。 3、卵磷脂的纯化,将2.5g粗卵磷脂溶于25ml无水乙醇中，加入相当于卵磷脂质量10%的Zncl2的水溶液3ml，室温下搅拌0.5h，得金属盐卵磷脂络合物沉淀，过滤，收集沉淀物。加入冰冷丙酮50ml洗涤沉淀物，搅拌1h，过滤，收集沉淀物，置搪瓷盘中摊平，厚度不易超过1.5cm，40左右减压真空干燥24h，可得淡黄色蜡状的精制卵磷脂，准确称量，记录。 4、卵磷脂的检测 （1）薄层层析分析 将卵磷脂样品与对照品分别配成2%的氯仿溶液，用GF250硅胶板进行层析，展开剂为氯仿：甲醇：水（65：25：4），层析完毕后，取出薄板，干燥，用碘蒸汽显色，观察并拍照。,（2）紫外分光光度法测定 将自制的卵磷脂样品溶于无水乙醇中，浓度为0.1%，用紫外分光光度计扫描其在190400nm的吸收光谱，卵磷脂的紫外最大吸收峰应在215nm左右的波长处。,