梅毒血清学检测策略.pdf

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1、梅毒血清学检测策略梅毒血清学检测策略 广东省皮肤性病防治中心 广东省皮肤病医院 郑和平 广东省皮肤性病防治中心 广东省皮肤病医院 郑和平 一，梅毒血清学试验： 1）非梅毒螺旋体血清学试验 2）梅毒螺旋体血清学试验 二，梅毒筛查策略 一，梅毒血清学试验： 1）非梅毒螺旋体血清学试验 2）梅毒螺旋体血清学试验 二，梅毒筛查策略 内 容内 容 1. 非梅毒螺旋体抗原血清学试验：1. 非梅毒螺旋体抗原血清学试验： 原理：梅毒螺旋体破坏宿主细胞释放以及其螺旋体细胞表面释 放的类脂物质，刺激机体产生抗类脂抗体（反应素）。在体外 该抗体与心磷脂、卵磷脂和胆固醇组成的抗原反应，形成凝集 反应。 原理：梅毒螺旋

2、体破坏宿主细胞释放以及其螺旋体细胞表面释 放的类脂物质，刺激机体产生抗类脂抗体（反应素）。在体外 该抗体与心磷脂、卵磷脂和胆固醇组成的抗原反应，形成凝集 反应。 方法：VDRL 方法：VDRL (venereal disease research laboratory test)(venereal disease research laboratory test) USR ( USR (unheated serum reagin testunheated serum reagin test) RPR ) RPR (rapid plasma reagin circle card test) (r

3、apid plasma reagin circle card test) TRUST ( TRUST (tolulized red unheated serum test)tolulized red unheated serum test) 特点：非特异性反应， 特点：非特异性反应， 一、梅毒血清试验一、梅毒血清试验 非特异性抗体非特异性抗体 产生于感染后5-7W产生于感染后5-7W 治疗后消失（血清治愈）治疗后消失（血清治愈） 治疗后保持低滴度（30%血清固定）治疗后保持低滴度（30%血清固定） 与活动度有关，疗效判断与活动度有关，疗效判断 与IgM作为复发和具有传染性指标与IgM作为复发和

4、具有传染性指标 生物学假阳性率较高生物学假阳性率较高 2、梅毒螺旋体抗原血清试验2、梅毒螺旋体抗原血清试验 原理：原理：基于TP特异性抗原，检测TP抗体基于TP特异性抗原，检测TP抗体 方法：方法： 1.凝集法：TPHA， TPPA 2.FTAABS 3.ELISA 4.化学发光 5.TP-RT（胶体金法） 6.19sIgM 1.凝集法：TPHA， TPPA 2.FTAABS 3.ELISA 4.化学发光 5.TP-RT（胶体金法） 6.19sIgM TP 血清学试验不能鉴别梅毒螺旋体与其它非病螺旋 体， TP 血清学试验不能鉴别梅毒螺旋体与其它非病螺旋 体，如如(yaws: T. palli

5、dum subsp pertenue; bejel - endemic syphilis: T. pallidum subsp endemicum and pinta: T. carateum). 1）TPPA/TPHA1）TPPA/TPHA 原理：原理： 超声裂解TP抗原，致敏明胶颗粒/家禽RBC，与 血清中抗TP抗体结合，发生凝集反应。 超声裂解TP抗原，致敏明胶颗粒/家禽RBC，与 血清中抗TP抗体结合，发生凝集反应。 临床：梅毒确证临床：梅毒确证 注意注意 存在交叉（1：80）存在交叉（1：80） 低滴定时候，FTA-ABS确证低滴定时候，FTA-ABS确证 TPPA TPPATPPA

6、 2）FTA-ABS(fluoresent treponemal antibody absorption test) 原理：原理：血清经吸收剂（Reiter)去非特异 性抗体，与TP反应，形成Ab+Ag复合物；再加 TITC标记的抗人IgG/IgM抗体，形成荧光复合 物，荧光镜下，TP呈苹果绿色荧光。 血清经吸收剂（Reiter)去非特异 性抗体，与TP反应，形成Ab+Ag复合物；再加 TITC标记的抗人IgG/IgM抗体，形成荧光复合 物，荧光镜下，TP呈苹果绿色荧光。 临床：最可靠确证试验临床：最可靠确证试验 特点：高度特异，特点：高度特异， 阴性 弱阳性 阳性 3）ELISA：3）ELI

7、SA： 原理：TP特异性抗原包备酶标板，与血 清中TP抗体结合，加入酶标抗体，底物 显色。（见图） 原理：TP特异性抗原包备酶标板，与血 清中TP抗体结合，加入酶标抗体，底物 显色。（见图） 临床：用于梅毒筛查临床：用于梅毒筛查 注意： 高敏感性，特异较？ 注意： 高敏感性，特异较？ 图18-1 TP抗体酶联免疫法试验 双抗原夹心一步法原理 图18-2 TP抗体酶联免疫法试验 双抗原夹心二步法原理 4）化学发光法）化学发光法 化学发光酶免疫分析化学发光酶免疫分析 ( chemiluminescenct enzyme immunoassay，CLEIA ) 微粒子化学发光免疫分析微粒子化学发光免

8、疫分析 （microparticle chemicluminescence immunoassay， MCIA） 电化学发光免疫分析电化学发光免疫分析 (electro chemicluminescence immunoassay，ECLIA) 化学发光酶免疫分析 原理 微粒子化学发光免疫分析微粒子化学发光免疫分析 电化学发光电化学发光(ECLIA)免疫检测原理免疫检测原理 亲和素亲和素 临床：用于梅毒筛查临床：用于梅毒筛查 注意： 高敏感性，特异较？ 注意： 高敏感性，特异较？ 5）TP-RT胶体金法5）TP-RT胶体金法： 原理（见图）原理（见图） 临床：筛查临床：筛查 注意： 敏感性？

9、特异较？ 注意： 敏感性？ 特异较？ 中国中国CDC评估结果评估结果 原理：WB原理：WB 临床：早期梅毒临床：早期梅毒 先天梅毒 先天梅毒 4) 19sIgM-WB4) 19sIgM-WB 特异性抗体特异性抗体 IgM 2WIgM 2W IgG 4WIgG 4W 治疗后Ig滴度可下降，但可能终身存 在 治疗后Ig滴度可下降，但可能终身存 在 IgM是体内有活的螺旋体存在刺激机 体产生，是有传染性和可能复发的指 针 IgM是体内有活的螺旋体存在刺激机 体产生，是有传染性和可能复发的指 针 特异性总抗体特异性总抗体 特异性特异性IgG抗体抗体 特异性特异性IgM抗体抗体 抗体浓度抗体浓度 窗口期

10、窗口期I 期期II 期期 2周周 IgM 4周周 IgG 非特异性抗体非特异性抗体非特异性抗体非特异性抗体 特异性总抗体特异性总抗体 特异性特异性IgG抗体抗体 特异性特异性IgM抗体抗体 非特异性抗体非特异性抗体非特异性抗体非特异性抗体非特异性抗体非特异性抗体非特异性抗体非特异性抗体 特异性总抗体特异性总抗体 特异性特异性IgG抗体抗体 特异性特异性IgM抗体抗体 非特异性抗体非特异性抗体 5-7周 反应素周 反应素 III 期期 隐性梅毒（早、晚）隐性梅毒（早、晚）隐性梅毒（早、晚）隐性梅毒（早、晚） 治疗后治疗后 抗体变化规律抗体变化规律 二、梅毒血清学检测策略 1. 美国CDC推荐策略

11、： 2006年美国CDC梅毒筛查策略示意图 The traditional algorithm 敏感性低、特异性低敏感性低、特异性低 有漏检，阳性需要特异性抗体试验确证。有漏检，阳性需要特异性抗体试验确证。 与疾病的活动性高度相关与疾病的活动性高度相关 监控患者对治疗的反应监控患者对治疗的反应 适合于小样本量的实验室适合于小样本量的实验室 便宜便宜 Comparison of three syphilis serodiagnosis algorithms and clinical diagnosis 665 RPR-/TPPA+ patients were excluded from posi

12、tive serodiagnosis due to a missed diagnosis rate of 24.2% (665/2,749). Man-Li Tong, et al. Analysis of three algorithms for syphilis serodiagnosis and implications for clinical management. Clinical Infectious Diseases 2014;58:1115-1124. The traditional algorithm CDC. Syphilis testing algorithms usi

13、ng treponemal tests for initial screening-four laboratories， New York City，2005-2006. MMWR. Morbidity and mortality weekly report，2008，57(32): 872. 1 lab 有结果解释，3 labs没有结果解释 比传统方法多检出+3,664 (3%) of 116,822 EIA/CIA RPR Lab1 + - TPPA/ FTA- ABS Lab2 + - Lab3 + +/- Lab4 + +/- No One lab： 98%EIA +/PRP+ TP-

14、PA+ The clinical interpretation complicated the lack of standardized testing algorithms the lack of an evidence to judge the merits of each algorithm. Consequently, Reversed testing might result in high FBR overdiagnosis and overtreatment。 CDC. Discordant results from reverse sequence syphilis scree

15、ning- five laboratories，United States，2006-2010. MMWR. Morbidity and mortality weekly report，2011，60(5): 133. That the percentage of patients with nonreactive screening treponemal tests in the low-prevalence population was 2.9 times that of the high-prevalence population suggests that these EIA/CIAs

16、 were false-positive results. Prevalence Group EIA/CIA % EIA/CIA+ RPR- EIA/CIA+RPR- TPPA认证 High14.5%60.6%14.1% Low2.3%60.6%40.8%(2.9times） 图21-4 2011年美国CDC推荐的梅毒逆向筛查策略流程图 比传统方法敏感性高比传统方法敏感性高 TP抗体筛查阳性抗体筛查阳性+RPR+TP抗体抗体 100% specificity 可自动化操作可自动化操作 高通量检测高通量检测 The reverse algorithm 2.欧洲推荐策略欧洲推荐策略 1) 非非TP

17、血清试验（血清试验（RPR等）传统策略等）传统策略 2) TP血清试验血清试验(TPHA，MHA-TP，TPPA， ELISA，CIA)筛查策略筛查策略 3) TP血清试验和非血清试验和非TP血清试验联合检测策略血清试验联合检测策略 -Janier M，2014 European guideline on the management of syphilis. Journal of the European Academy of Dermatology and Venereology， 2014， 28(12):1581-1593. 1) 非非TP血清试验（血清试验（RPR等）传统策略等）传统

18、策略 特点：仅检测活动性梅毒。 与TP血清试验相比，可能会漏检一些早期和晚期梅 毒患者。 2) TP血清试验筛查策略血清试验筛查策略 EIA/CIA或TPPA/TPHAEIA/CIA或TPPA/TPHA + + TPPA/TPHATPPA/TPHA + 或 + 或 CLIA/EIACLIA/EIA+ + TP-IgMTP-IgM RPR and TiterRPR and Titer 确诊梅毒确诊梅毒 - - + + 早期梅毒早期梅毒 + + 特点：可早期发现感染者。然而，在梅毒发病率较低的人群，由于阳性结特点：可早期发现感染者。然而，在梅毒发病率较低的人群，由于阳性结 果预测值较低，可导致假阳

19、性结果。果预测值较低，可导致假阳性结果。 3) 联合血清试验筛查策略联合血清试验筛查策略 3）加拿大梅毒筛查策略3）加拿大梅毒筛查策略 传统筛查策略 Levett PN， Fonseca K， Tsang RSW，et al. Canadian Public Health Laboratory Network laboratory guidelines for the use of serological tests (excluding point-of-care tests) for the diagnosis of syphilis in Canada. Can J Infect Dis

20、 Med Microbiol, 2015, 26(Suppl A):6A-12A 逆向筛查策略 4）中国梅毒筛查策略）中国梅毒筛查策略 以非以非TP血清试验筛查血清试验筛查 尹跃平.性病防治培训手册-实验室检测(学员用书).北京：人民卫生出 版社，2015. 采用梅毒螺旋体抗原血清试验进行初筛的流程图采用梅毒螺旋体抗原血清试验进行初筛的流程图 Analysis of three algorithms for syphilis serodiagnosis and implications for clinical management. Man-Li Tong,et al. Clinical I

21、nfectious Diseases 2014;58:1115-1124. 目前研究策略存在的不足目前研究策略存在的不足 美国进行了数据分析，但存在不足：美国进行了数据分析，但存在不足： 第一次分析，第一次分析，4个实验室没有区别高流行率人群与低 流行人群； 第二次分析， 个实验室没有区别高流行率人群与低 流行人群； 第二次分析，5个实验室使用的检测方法不同。个实验室使用的检测方法不同。 国内个别医院仅仅使用单个医院的数据，也没有 区别高流行率人群与低流行人群； 国内个别医院仅仅使用单个医院的数据，也没有 区别高流行率人群与低流行人群； 除美国外，欧洲、加拿大、中国的策略来源于文 献复习。 除

22、美国外，欧洲、加拿大、中国的策略来源于文 献复习。 正确的筛查策略应考虑正确的筛查策略应考虑 目的：临床初筛？临床确诊？血库筛查？ 流行病学调查？ 目的：临床初筛？临床确诊？血库筛查？ 流行病学调查？ EIAs, CIAs, TPPA , FTA-ABS等试验性 能？ 等试验性 能？ TP与非与非TP抗体检测不符合，抗体检测不符合，TP2分析确 认？ 分析确 认？ IgM在早期梅毒检测中的应用？在早期梅毒检测中的应用？ 不同梅毒流行率人群的检测结果？不同梅毒流行率人群的检测结果？ “预示值”对临床检验结果影响 预示值对一个有预示值对一个有95%敏感性和敏感性和95%特异性的 试剂检测结果的影响

23、（ 特异性的 试剂检测结果的影响（100,000人）人） 结结 果果 50%感染率感染率 10%感染率感染率 1%感染率感染率 0.5%感染率感染率 检出 (+) 未检出 () 检出 (+)未检出 () 检出(+)未检出() 检出(+)未检出() +47,5002,500 9,500 500 950 50 475 25 2,50047,500 4,500 85,500 4,950 94,050 4975 94,525 敏感性 (TP/TP+FN) 95% 95% 95% 95% 特异性 (TN/TN+FP) 95% 95% 95% 95% 阳性预示值 TP/TP+FP 47500/47500+

24、250 0=95.0% 9500/9500+4500= 67.9% 950/950+4950=16%475/475+4975=8.7 % 阴性预示值 TN/TN+FN 47500/47500+250 0=95.0% 85500/85500+500 =99.4% 94050/94050+50=99. 9% 94525/94525+25=9 9.97% 小结 梅毒血清学试验包括两类。梅毒血清学试验包括两类。 梅毒血清学检测策略有：梅毒血清学检测策略有： 1.非非TP血清学筛查方法血清学筛查方法-传统方法。传统方法。 2. TP血清学筛查方法血清学筛查方法-逆向方法。逆向方法。 3. 联合筛查方法联合筛查方法 逆向或联合筛查方法中结果不一致时，应 进一步确证 逆向或联合筛查方法中结果不一致时，应 进一步确证。 谢谢!