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1、XXX医院检验科微生物实验室耐甲氧西林葡萄球菌纸片扩散法筛选试验标准操作规程编号：MYCH/ 版本：第1版 第0次修改页数：第 3 页 共 3 页耐甲氧西林葡萄球菌纸片扩散法筛选试验标准操作规程1目的规范耐甲氧西林葡萄球菌细菌纸片扩散法筛选试验操作规程，确保结果的准确可靠。2适用范围本操作规程适用于葡萄球菌属的细菌。 ，3选药原则根据CLSI的要求，用30ug头孢西丁纸片取代1ug苯唑西林纸片，因为头孢西丁能最有效地检测出葡萄球菌mecA基因介导的对内酰胺类的交叉耐药性。4质控纸片药敏试验应使用金黄色葡萄球菌ATCC 25923作为阴性对照，金黄色葡萄球菌ATCC29213作为阳性对照。5试验
2、材料和仪器M -H培养基，无菌生理盐水，药敏纸片，无菌棉签，35孵育箱，测量尺。6操作步骤根据CLSI M2 - A10和M100-S19制定本操作步骤。6.1 菌液制备 从孵育了1824小时的非选择性培养基（如血琼脂）平板上，挑取单个菌落直接用无菌生理盐水制成菌悬液，将浊度调整至0.5麦氏标准。6.2 在菌悬液制备后15分钟内接种完M-H琼脂平板。用无菌棉拭蘸取菌液，在管内壁液面上方旋转紧压，将多余菌液挤去，然后在琼脂表面均匀涂布接种3次，每次旋转平板60。以确保接种菌的均匀分布，最后沿平板内缘涂抹一周。6.3 接种好的平板可敞开盖子在室温下干燥35分钟（不要超过15分钟），然后用纸片分配器
3、将纸片放人琼脂表面并轻压，使纸片与琼脂表面完全接触。各纸片中心相距应大于24 mm，通常150 mm平板至多放置12个纸片，90100 mm平板至多放置6个纸片。由于某些药物在纸片放人琼脂平板后几乎立即扩散，所以一旦纸片放人后就不能再移动，若要重新放置，可用一个新的纸片放在平板的另一位置。6.4 应在纸片贴好后15分钟内将平板倒置放入35孵箱，若超过15分钟将使纸片中的抗菌药物提早扩散。7判断标准见CLSI标准。8注意事项纸片扩散法检测耐苯唑西林的葡萄球菌要严格遵守以下的基本步骤。8.1 使用直接接种物制备菌液，接种M-H琼脂平板。 8.2 推荐用30ug头孢西丁纸片取代1ug苯唑西林纸片，因
4、为头孢西丁能最有效地检测出葡萄球菌mecA基因介导的对内酰胺类的交叉耐药性。8.3 在3335、空气中孵育，孵育时间为金黄色葡萄球菌和路邓葡萄球菌18小时，凝固酶阴性葡萄球菌24小时（如18小时出现耐药结果可以报告）。8.4检查并判断敏感圈直径（用反射光），如出现明显的圈内菌落或圈内生长的菌膜应判断为耐药。抑菌圈直径的判断采用CLSI的最新标准(CLSI Ml00 - S19，2009)。9结果解释见CLSI标准。参考文献1 CLSI. Performance Standards for Antimicrobial Susceptibility Testing；Nineteenth Informational Supplement.CLSI document M100 S20. Wayne,PA:Clinical and Laboratory Standards Institute, 20092 叶应妩，王毓三，申子瑜主编全国临床检验操作规程第三版南京：东南大学出版社，2006编写人签名复审人签名审批人签名生效日期姓 名：XXX编写日期:2011-05姓 名：XXX复审日期：2011-06姓 名：XXX批准日期：2011-062011-07