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1、岛津LC-20AD型HPLC操作规程1目的规范岛津LC-20AD型高效液相色谱仪的使用。2范围适用于岛津LC-20AD型高效液相色谱仪的使用。3职责提炼技术精进中心人员对本规程的实施负责。4规程4.1 系统组成：本系统由两台LC-20AD溶剂输送泵（配置高压二元梯度单元及系统控制单元）、SIL-20A自动进样器、SPD-20A紫外线检测器、CTO-10AC恒温柱箱、LCsolution色谱数据工作站和电脑等组成，另外还包括打印机等辅助设备。4.2 准备4.2.1 准备所需的流动相，用合适的0.45m滤膜过滤，置于流动相瓶内。将所有废液排出管路汇集放入废液接收瓶并确保有足够空间接收废液。4.2.
2、2 根据待检样品的需要更换合适的色谱柱。4.2.3 配制样品和标准溶液（也可在平衡系统时配制），装入自动进样器样品瓶前用合适的0.45m滤膜过滤。4.2.4 检查仪器各部件的电源线、数据线和输液管道是否连接正常。4.3 开机：接通电源，依次开启电源、溶剂输送泵B、恒温柱箱、自动进样器、检测器、溶剂输送泵A，注意溶剂输送泵一定要最后开启。启动电脑，点击桌面上快捷键进入LCsolution，在听到电脑与仪器连接成功的提示后，在“仪器参数”窗口中设定系统运行参数，也可以打开设定好的文件，直接调入参数。4.4 参数设定4.4.1 波长设定：设定检测器适合检测样品的波长，记录色谱峰的在该波长的吸收光谱图
3、。注意：一定要选定适合检测样品的波长的色谱图用于分析。4.4.2 流速设定：在电脑的“仪器参数”窗口中，选择“Pump”，进行流速设定与泵运行参数设定。4.4.3 流动相比例设定：在溶剂比例设置窗口进行设置，输入各单元溶剂比例。4.4.4 梯度设定：点击进入“LC time prog.”,可以对溶剂输送泵、恒温柱箱、自动进样器进行时间动作设置。4.5 更换流动相并排气泡4.5.1 将流动相管路的陶瓷吸滤器放入装有准备好的流动相的储液瓶中，注意分清各单元溶剂管路与流动相储液瓶对应；4.5.2 逆时针转动溶剂输送泵的排液阀180，打开排液阀；4.5.3 按溶剂输送泵的purge键，pump指示灯亮
4、，泵大约以9.9ml/min的流速冲洗，3min（可设定）后自动停止；4.5.4 将排液阀顺时针旋转到底，关闭排液阀。4.5.5 如管路中仍有气泡，则重复以上操作直至气泡排尽。4.5.6 如按以上方法不能排尽气泡，从柱入口处拆下连接管，放入废液瓶中，设流速为5ml/min，按pump键，冲洗3min后再按pump键停泵，重新接上柱并将流速重设为规定值。4.6 平衡系统4.6.1 换好流动相并排出气泡后，点击“instrument on/off”按钮，启动系统，进行系统冲洗与平衡，检查各管路连接处是否漏液，如漏液应予以排除。一般最少需6倍柱体积的流动相。可以通过“plot”方式来观察系统平衡情况
5、。4.6.2.观察泵控制屏幕上的压力值，压力波动应不超过1MPa。如超过则可初步判断为柱前管路仍有气泡，按4.5.6操作。4.6.3 运行“Baseline Check”,检测系统是否达到稳定，当测试结果为“Pass”时再进样检测。4.6.4如果采用梯度洗脱方式，则以检验方法规定的梯度初始条件，进行系统平衡。且在进样前运行12次空白梯度。4.7 进样4.7.1将样品装入样品瓶中，放入样品架上，记得样品放置位置，将样品加架推入到位（听到一声碰撞响声）。4.7.2控制面板上“LC”显示“READY”，表示仪器已经准备好，可以进样了。4.7.3进样前按控制面板上“Autozero PDA detec
6、tor”按钮调零。4.7.4在“ACQUISITION”菜单中，选择“SINGLE START”，根据提示输入样品瓶号、所用方法文件名、数据存储文件名等，点击“确认”，即开始进样与分析，分析结束后，数据记录在数据存储文件中，依此生成报告显示得到数据以供分析用。（注：如果选择“BATCHPROCESSING”，则连续进样分析，其设置项目与上述设置类似）。4.8关闭系统4.8.1分析结束后，需要对系统和色谱柱进行清洗，将流动相设定为换成5：95的乙腈-水，以1.0ml/min的流速清洗系统1015分钟，然后将流动相设定为换成95：5的乙腈-水， 以1.0ml/min的流速清洗系统3045分钟分钟即可。如果是使用含有无机盐缓冲液的流动相，则先用50：50的异丙醇-水溶液约10ml冲洗泵头，再用10：90的甲醇-水清洗系统30分钟，再用95：5的乙腈-水清洗30分钟。同时，以30：70的甲醇-水为溶剂清洗自动进样器10分钟。4.8.2系统清洗结束后，从电脑上点击“instrument on/off”按钮，停止系统运行，逐个关闭各部件电源。