《Angilent 1200 液相色谱仪（单元泵）的使用、维护保养标准操作规程.doc》由会员分享，可在线阅读，更多相关《Angilent 1200 液相色谱仪（单元泵）的使用、维护保养标准操作规程.doc（6页珍藏版）》请在三一文库上搜索。
1、SOP QC-003- Agilent 1200液相色谱仪（单元泵）的使用、维护保养标准操作规程 页号6/6 编号：SOP QC-003-Agilent 1200液相色谱仪（单元泵）的使用、维护保养标准操作规程起草：日期：审核：日期：批准：日期：执行日期：颁发部门：质量部分发数量：2份分发单位及数量：质量部1份、原料化验室1份。Agilent 1200液相色谱仪（单元泵）的使用、维护保养标准操作规程1. 目的建立Agilent 1200液相色谱仪（单元泵）的使用、维护保养标准操作规程，确保检验结果准确、可靠。2. 适用范围本SOP适用于Agilent 1200高效液相色谱仪（单元泵）的使用和维
2、护保养。3. 职责原料化验室化验员对本标准的正确执行负责，原料化验室主任对监督本标准的执行情况负责。4. 内容4.1. 仪器使用的环境要求4.1.1. 环境温度：435，环境湿度：80%。4.1.2. 电源：220v（+5%，-10%），频率：5060HZ。4.1.3. 有良好的通风设施。4.1.4. 避免阳光照射，避免剧烈震动，避免空调风直吹仪器。4.2. 仪器组成Agilent 1200液相色谱仪由单元泵，柱温箱，手动进样器，检测器及系统软件组成。4.3. 仪器操作步骤4.3.1. 开机 打开计算机，进入windowsXP画面。 打开Agilent1200各模块电源。 待各模块自检完成后，
3、双击“Instrument 1 online”图标，进入工作站。 安装好色谱柱。 把流动相放入溶剂瓶中。 点击泵下面的瓶图标,输入溶剂的实际体积和瓶体积，也可输入停泵的体积“OK”。 打开“Purge”阀。 点击“Pump”图标 “Setup pump” ，进入泵编辑画面。 设Flow：1-5ml/min，点击 “OK”。 点击“Pump” 图标“Pump control” ，选中“on” “OK”,则系统开始Purge ，直到管线内（由溶剂瓶到泵入口）无气泡为止。 点击“Pump” 图标 “Pump control” ，选中“off” “OK” ，关闭“Purge”阀。4.3.2. 数据采集
4、方法编辑 调用已有方法：点击“Method”“Load method” ，选择已建立并保存好的分析方法“OK” 。 建立分析方法：点击“Method”“Edit entire method” ，选中除 “Data analysis”外的三项“OK”，按照实验标准要求分别设定仪器各项参数： 方法信息：在“Method Comments”中输入方法的信息“OK”。 泵参数设定：在“Flow”处输入流量，如1.0ml/min，在 “Pressure Limits Max”处输入柱子的最大耐高压“OK”。 柱温箱参数设定：打开柱温箱电源，按“SET”键，设定所需温度。 VWD检测器参数设定：在“Wav
5、elength”处输入检测波长，“Peak width(Response time)”通常设定为默认值： 0.1min（2s）。也可插入一行“Timetable”，根据需要编辑相应的时间程序，点击ok。 在“Run time checklist”中选中 “Data acquisition” “OK”。 点击“Method”“Save method as” 命名“OK”。4.3.3. 样品分析 点击“Online signal”“Windows 1” 点击“Change”按钮，选择所需的谱图信号“OK” 。 点击“Run control” “Sample info” ，输入操作者名字，在“Dat
6、a file”中选择数据文件的取名方式“Manual”或“Prefix” “OK” 。“Manua”每次做样之前必须给出新名字，否则仪器会将上次的数据覆盖掉。“Prefix”在“Prefix”框中输入前缀，在“Counter”框中输入记数器的起始位，仪器会自动命名，如wwd0001,wwd0002。 点击 “Instrument” “System on”，或依次点击图标开启各模块。 待仪器Ready，基线平稳，将手动进样器置于“Load”位置，用微量注射器进样，并搬动手动进样阀至“Inject”位置，启动运行。4.3.4. 数据处理 点击“View” “Data analysis”进入数据分析
7、画面。 点击“File” “Load signal” ，选择所需调出的数据文件名“OK” 。 谱图优化：点击“Graphics” “Signal ptions” ，从“Ranges”中选择“Full”或“Auto scale”及合适的时间轴或选择“Use Ranges”反复调整，直到谱图的显示比例合适为止。点击“OK” 。 积分 点击“Integration” “Integration Events” ，选择合适的“Slope sensitivity”“Peak width”“Area reject”“Height reject”。 点击“Integration” “Integrate” ，则
8、数据被积分。 如积分结果不理想，则修改相应的积分参数，直到满意为止。 点击左边“”图标，将积分参数存入方法。4.3.5. 分析报告的打印 点击“Peport”“Specify report” ，点击“Quantitative Results” 框中“Calculate”右侧的黑三角，选中“Percent” ；点击“Based On” 右侧的黑三角，选中“Area”；在“Report Style”选项中选取所需要的报告模板：性能报告选“Performance”、通常选取“Short”报告，其它选项不变。点击“OK”。 点击“Report” “Print report” ，则报告结果将打印到屏幕上
9、，如想输出到打印机上，则点击“Peport”底部的“Print”按钮。 可选取“Report Layout”窗口，编辑个性化报告。4.3.6. 关机 数据采集完毕后，关闭检测器，用10%20%的甲醇水（或乙腈水）冲洗系统20-30分钟（适用于缓冲盐等流动相），然后用有机溶剂（甲醇或乙腈）冲洗系统约10 分钟，以上方法适于反相色谱柱冲洗（正相色谱柱用适当的溶剂冲洗）。或按色谱柱说明书规定要求的溶剂清洗色谱柱。 用注射器吸取纯水，在“Load”和“Inject”状态之间反复切换位置，对进样阀进行清洗。 停泵，退出化学工作站 ，关闭Agilent1200各模块电源开关。 关闭计算机。4.3.7. 填
10、写仪器使用登记。5.注意事项5.1流动相使用前必须过滤（0.45um），不要使用多日存放的蒸馏水（易长菌）。5.2色谱柱长时间不用，存放时，柱内应充满溶剂，两端封死（乙腈/甲醇适于反相色谱柱，正相色谱柱用相应的有机相）。5.3seal-wash 溶剂为10%异丙醇溶液，以每分钟23 滴的速度虹吸排出，溶剂不能干涸。seal-wash 的流速控制为手动调节：一个开关控制流速（调整好后就不要改变）；一个开关控制开与关，泵运行后打开此开关。5.4不用的通道要充满溶剂或密闭起来。5.5含缓冲盐的流动相或纯水等不宜长期（48小时以上）保存在仪器的管路中，应用有机溶剂替换。5.6必须在仪器各部件及色谱柱允
11、许的使用条件下（酸碱度、溶剂性质等）使用仪器及色谱柱。5.7 操作时应注意仪器上警告标示牌，以防造成事故或仪器埙坏。5.8 仪器应在检定有效期内使用。5.9 仪器有异常情况发生应立即报告技术人员，解决问题前不得使用。5.10 每次使用应注意填写仪器使用记录。6仪器的维护保养6.1 实验所用的流动相应经过 0.45m的膜过滤，以降低色谱柱受污染的程度，延长使用寿命。6.2 实验前先打开稳压电源，待电压稳定后，方可打开仪器开关。6.3 根据需要设定参数。由于每根色谱柱性能，填料各不相同，要依据其特性设定最高保护压力，防止压力过大导至柱内填料空间发生变化，破坏色谱柱或影响分离效果。6.3.1 以十八
12、烷基硅烷键合硅胶为填料的色谱柱一般最高工作压力不能超过 20MPa。6.3.2 以凝胶为填料的色谱柱一般最高工作压力不能超过7.5MPa。6.4 检测器的光源具有一定的使用时间，所以每次在进样品前半小时左右打开，实验结束后，应先关闭检测器电源。6.5 最后一次进样完成后，应用流动相冲洗一段时间，以保证洗脱完全，然后用纯化水冲洗约半小时，以除去流动相中的无机盐类。6.6 根据色谱柱的填料不同，采用不同的溶剂，冲洗色谱柱。6.6.1 极性填料色谱柱：用二氯甲烷冲洗，键合相填料色谱柱用甲醇冲洗，然后用随柱所配的封头螺帽将柱两端密封，以防止柱内溶剂蒸发。6.6.2 阴离子交换色谱柱：用0. 002%洗
13、必泰的缓冲液冲洗，然后用随柱所配的封头螺帽将柱两端密封，以防止柱内溶剂蒸发。6.6.3 阳离子交换色谱柱：用0. 005%硫柳汞缓冲液冲洗，然后用随柱所配的封头螺帽将柱两端密封，以防止柱内溶剂蒸发。6.6.4 凝胶色谱柱：用缓冲液中加0. 02%叠氮化钠或用20%乙醇冲洗，然后用随柱所配的封头螺帽将柱两端密封，以防止柱内溶剂蒸发。6.7柱的安装与拆卸色谱柱属易耗品，需要不断更换。高效液相色谱柱在安装之前一定要仔细清洁密封卡套和接头端面，不能残留固体颗粒。要保证管道端面与柱头端面的良好结合，不能留有死体积。接头等组件不要拧的过紧，适当上紧后开机试验，以恰好不泄漏为宜，防止用力过大而导致管道变形或
14、用力不足而发性泄漏，若用力过大锥形卡套已将管道挤压变形，可将管道前端连同卡套切割掉，再用金钢锉小心磨平端面，洗净锉屑和毛刺后重新连接。目前多数在用高效液相色谱仪柱前流路系统为金属材质，柱接头采用固定板手紧固，在紧固螺母时不要一下用力过猛，防止锥形卡套卡死在阴接头内无法取出。6.8柱污染的处理常见的柱污染有柱头烧结滤板堵塞、柱头内填料污染和柱内有盐结晶析出。柱污染的常见症状是柱压突然升高及出现鬼峰，简单的处理是选择能溶解污染物的流动相，将色谱柱反接后进行冲洗，冲洗时柱出口端与检测器断开以防污染检测器，冲洗液体积约为2030 倍色谱柱容积。对于一些保留强的污染物，如脂类可用四氢呋喃、乙腈或甲醇冲洗
15、；蛋白质类可用乙腈、丙醇和1%三氯乙酸进行梯度洗脱；高疏水性化合物可用乙腈或甲醇洗脱。当确定是柱内盐结晶析出时，可用纯水或低甲醇含量( 5% )的甲醇2水混合液冲洗至基线稳定。6.9柱塌陷的处理色谱柱经一段时间使用后，特别是流动相压力变化过大或酸碱度不当时，会发性柱头塌陷，使峰形异常（分岔） 。其处理方法是打开柱头，拆下烧结滤器，用工具小心刮平柱床端面（可同时除去少量柱头被污染的填料） ，用甲醇与填料混合成均浆液，将均浆液滴在柱头上，靠重力排除甲醇液，直到柱头凹陷处平整，再小心复原柱头。带有柱套的色谱柱柱端烧结滤器是镶嵌在柱端封口塑料塞的内侧，封口塑料塞直接挤压进柱管，在拆卸时，应从侧面用金属
16、薄片插入缝中小心撬开，不可直接用钳子拨出，以防止塑料塞受挤压而变形。不带柱套的色谱柱由螺母直接将分配器和烧结滤片压在柱端，在取下和装上烧结滤片时一定要沿轴向进行，轻轻放入后不可再转动，以免破坏柱床。6.10 柱的贮存与管理色谱柱长期不用时，应进行适当的处理后保存。首先应用适合于柱填料的溶剂充分冲洗柱子，极性填料色谱柱可用二氯甲烷冲洗；键合相填料色谱柱用甲醇冲洗；阴离子交换色谱柱用0. 002%洗必泰的缓冲液冲洗；阳离子交换色谱柱用0. 005%硫柳汞缓冲液冲洗；凝胶色谱柱用缓冲液中加0. 02%叠氮化钠或用20%乙醇冲洗，然后用随柱所配的封头螺帽将柱两端密封，以防止柱内溶剂蒸发。最好一根柱子只
17、用于分析某一类结构相似的物质，如化学组成明确的样品与含有未知组分的样品分开，中药样品与西药样品分开，生物合成样品与人工合成样品分开等，这样可避免样品对色谱柱的交叉污染，延长柱使用寿命。6.11 操作者应细心，了解仪器各部件性能。6.12 每次操作完毕后，应及时清理所用物品，倒掉废瓶中的废液，用柔软的抹布擦拭仪器表面，保持仪器的清洁。6.13 若仪器长时间不用，可定期开启电源，使仪器预热一段时间，以免仪器内部件受潮。6.14 为保证检验数据的可靠，每年应由计量部门负责校验一次，使用的仪器应在检定有效期内使用。6.15操作时应注意仪器上警告标示牌，以防造成事故或仪器埙坏，进样时应小心进样，以免伤到
18、进样针和仪器。每次使用应注意填写仪器使用记录。6.16 仪器有异常情况发生应立即报告技术人员，解决问题前不得使用。6.17每次做样结束，应进行仪器使用记录的登记，记录仪器的使用情况是否正常，记录是否已清洁，以便于观察和了解仪器的运行情况。6.18每月定期检查冲洗阀的PTFE滤芯是否污染（冲洗阀打开时用水以5ml/min的流速冲洗，压力超过10bar为滤芯污染），若污染须更换PTFE滤芯。6.19每半年检查溶剂入口过滤头是否污染，如污染可用35%硝酸浸泡1小时以上，再用纯水清洗（严禁超声）。污染物无法清洗，须更换溶剂入口过滤头。6.20每年检查泵头密封垫的磨损情况，如磨损严重（泄漏）须更换泵头密封垫（成对更换）；每年检查宝石杆表面是否有划痕及沉积物，及时维护、清洗。6.21基线噪音过大时检测灯的能量，能量过低时更换灯。6.22每半年检查流通池的洁净情况，光强度低（0.2）须清洗流通池（参考仪器诊断的流通池的洁净程度测试）。6.23如流路堵塞，采取分段排除的办法进行维修。6.24如压力异常波动。检查流动相是否有盐析，可混合后进样；检查单向阀是否关闭不严，用异丙醇冲洗流路；比例阀是否内漏等（参考仪器诊断的比例阀内漏检查）。6.25如仪器出现严重故障，请拨打安捷仑公司免费咨询电话：80082032787.修订历史 历史版本号执行日期修改内容及原因-新增 重庆莱美药业股份有限公司