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1、XXX医院检验科微生物实验室三糖铁试验标准操作规程编号：MYCH/ 版本：第1版 第0次修改页数：第 3 页 共 3 页三糖铁试验标准操作规程1.目的规范三糖铁试验标准操作规程。2.原理 能发酵葡萄糖和乳糖的细菌产酸产气，使三糖铁的斜面和底层均呈黄色，并有气泡产生；只能发酵葡萄糖，不发酵乳糖的细菌，使斜面呈红色，而底层呈黄色；有些细菌能分解培养基中的含硫氨基酸，生成硫化氢，硫化氢遇铅或铁离子形成黑色的硫化铅或硫化铁黑色沉淀物；分解尿素呈红色。3.试剂3.1 三糖铁琼脂成分上层：乳糖 10g 蔗糖10g 葡萄糖 1g 硫酸亚铁0.2g 蛋白胨20g 琼脂 20 g 硫代硫酸钠0.2 g 氯化钠5
2、g 0.2酚红12.5 ml 蒸馏水 1000ml 下层： 牛肉膏1.8g 酸性磷酸钾1.2g 0.2酚红1.8 ml 蛋白胨6g 琼脂3g 氯化钠3g 尿素12g 蒸馏水600 ml 3.2制备上层制备：成分混合后，加热溶解，校正PH至7.6，分装三角烧瓶内，115摄氏度灭菌15分钟。下层制备：下层成分（除尿素外）混合后，加热溶解。校正PH至7.2，然后加入尿素分装每管约1.5ml，,115摄氏度灭菌15-20分钟。再取葡萄糖0.5g， 0.1酚红10ml 混入已溶解的琼脂中。充分混匀，使其溶解，分装于试管中，每管约1.5ml，至高压灭菌器中，经115摄氏度灭菌10分钟。取出后。待其直立凝固
3、。下层凝固后，用无菌手续，将上层培养基趁热装于下层培养基上面。凝固后将其置于37培养箱中，培养18-24小时，如无杂菌污染，可以存于冰箱中备用。4.质控大肠埃希菌ATCC25922，三糖铁琼脂上、下层均为黄色，福氏志贺菌CMCC51573，三糖铁琼脂上层不变，下层为黄色。5.操作步骤挑取纯菌落接种于三糖铁琼脂上，35孵育18-24小时。6.结果判断出现黑色沉淀物为H2S阳性。7. 注意事项三糖铁琼脂上下层配制时，高压灭菌时掌握好温度和时间，以免培养基中的糖被分解。8. 临床意义三糖铁琼脂用于观察细菌对糖的发酵能力，以及是否产生H2S，可初步鉴定细菌的种属。 参考文献1 周庭银编著,临床微生物学诊断与图解.第二版,上海:上海科学技术出版社,20072 王钦升,周正明,高岐主编,实用医学培养基手册,北京:人民军医出版社.1999编写人签名复审人签名审批人签名生效日期姓 名：XXX编写日期:2011-05姓 名：XXX复审日期：2011-06姓 名：XXX批准日期：2011-062011-07