实验用培养基适用性检查标准操作规程.docx

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1、起草人Prepared by:起草日期Date:QC审核人审核日期Reviewed by:Date:QC审核人审核日期Reviewed by:Date:QA批准人批准日期Approved by:Date:质量部QD颁发部门Issued byQC执行日期Effective Date替换文件SOP-QC-562-0窠验用培养基适用性检复审日期Replaced For查标准操作规程Review Date分发部门：Distributed toQA,QC分发号Distribution No.:目的 Purpose为保障 微生 物检 验的 准确 性及 相关工 作特 制定 本规 定。范围 Scope本程序

2、适用 于微 生物 限度 测定培养基 的适 用性 检查 及相 关工 作。职责 Responsibility分析员：严格按照本操作规程执行。及时完成各类相关记录。在主管的指导下进行任何可能的OOS及偏差调查。主管：监督本操作规程的执行。对检验员进行必要的培训。指导任何可能的OOS和偏差调查。内容 procedure1 检验员应根据培养基配制 程序 或培养 基各 自的 说明 书配 制培 养基。2 试验用菌种及培养基2.1 菌种 :2.1.1 培养基灵敏度测试所 用的 菌株 传代次 数不 得超 过 5代， 从国家药检 所或 菌种 保藏 中心 购买 。2.1.2 枯草芽抱杆菌(Bacillus subt

3、ilis)ATCC 66332.1.3 大肠埃希菌(Escherichia coli) ATCC 87392.1.4 金黄色葡萄球菌(Staphylococcusaureus) ATCC 65382.1.5 白色念珠菌(Candida albicans) ATCC 102312.1.6 黑曲霉(Aspergillus niger)ATCC 164042.1.7 伤寒沙门菌(Salmonella) ATCC 140282.1.8 铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa) ATCC 90272.2 培养基2.2.1 按照培养基说明书进 行配 制灭 菌。2.2.2 大豆酪蛋白消化

4、肉汤 Soybean-Casein Digest Broth2.2.3 大豆酪蛋白消化琼脂 Soybean-Casein Digest Agar2.2.4 沙氏葡萄糖琼脂Sabouraud Dextrose Agar2.2.5 肠道菌增菌肉汤Enterobacteria Enrichment Broth Mossel2.2.6 紫红色胆汁葡萄糖琼 脂 Violet Red Bile Glucose Agar2.2.7 麦康凯 肉汤 MacConkey Broth2.2.8 麦康凯琼脂 MacConkey Agar2.2.9 RV 沙门氏菌富集肉汤 Rappaport Vassiliadis S

5、almonella Enrichment Broth2.2.10 木糖赖氨酸脱氧胆盐琼脂 Xylose Lysine Deoxycholate Agar2.2.11 甘露醇氯化钠琼脂培养基 Mannitol Salt Agar2.3 微生物计数培养基的适用性检查2.3.1 微生物计数用的成品培养基、由脱水培养基或按处方配制的培养基均应进行培养基适用性检查。2.3.2菌悬液的制备名称金黄色葡萄球菌ATCC 6538铜绿假单胞菌ATCC 9027菌株制备大豆酪蛋白消化肉汤或大豆酪蛋白消化琼脂30 G35 C, 18-24、时大豆酪蛋白消化肉汤或大豆酪蛋白消化琼脂30 G35 C, 18-24、时名

6、称枯草芽抱杆菌ATCC 6633白色念珠菌ATCC 10231菌株制备大豆酪蛋白消化肉汤或大豆酪蛋白消化琼脂30 G35 C, 18-24、时沙氏葡萄糖琼脂20 G25 C, 2-3天名称黑曲霉ATCC 16404菌株制备沙氏葡萄糖琼脂20 a5 C, 5-7天 或者苜至J 形成良好的抱子状态J2.3.3 上述培养物用0.9碗菌氯化钠溶液或pH7.2磷酸盐缓冲液制成每1ml含菌数不大于100cfU勺菌悬液， 制备黑曲霉抱子悬浮液时,添加3-5ml含0.05%ml/ml）聚山梨酯80的0.9碗菌氯化钠溶液或pH7.2 磷酸盐缓冲液，将抱子洗脱。然后，用适宜方法吸出抱子悬液至无菌试管内，用含0.0

7、5%（ml/ml） 聚山梨酯80的0.9碗氯化钠溶液或pH7.2磷酸盐缓冲液制成每1ml含抱子数不大于100cfUl勺抱子 悬液。菌悬液在室温下放置应在2小时内使用，若保存在28c可在24小时内使用。黑曲霉抱子悬 液可保存在23C,在验证过的贮存期内使用。2.4 大豆酪蛋白消化肉汤促生长试验2.4.1 取以上前3种菌悬液各0.1m心大于100cfu）分别注入灭过菌的含有10ml大豆酪蛋白消化肉汤的试 管中，于30 G35 C惭不超过3天。同时用相应的上一批通过促生长试验的培养基替代被检培养基 进行上述试验。培养结束后进行观察，如果肉眼能清晰看到的微生物的生长与上一批通过促生长试 验的培养基的生

8、长情形基本一致，则判定此培养基通过促生长试验。反之则判定此培养基不符合规 定，未通过促生长试验。2.5 大豆酪蛋白消化琼脂和沙氏葡萄糖琼脂促生长试验2.5.1 取以上5种菌悬液各1ml （不大于于100cfU ,分别注入无菌平皿中，立即倾注大豆酪蛋白消化琼脂, 每株试验菌平行制备2个平皿，混匀、凝固，置30 G35寄养不超过3天，计数，后2种菌悬液不 超过5天，计数。再取后2种菌悬液各少于100cfu分别注入无菌平皿中，立即倾注沙氏葡萄糖琼 脂，每株试验菌平行制备2个平皿，混匀、凝固，置20 G25 c培养不超过5天，计数。同时用相应 的上一批通过促生长试验的培养基替代被检培养基进行上述试验。

9、进行促生长试验的培养基平皿上,微生物生长情况必须与已通过促生长试验的培养基平皿上的微生物生长情况一致或者更好，同时将 待测定的培养基上的菌落数与已通过促生长试验的培养基上的菌落数对比，两者之间的比值应处于 70%-200脸间,则判定此培养基通过促生长试验；反之则判定该培养基不符合规定，未通过促生长试 验。2.6 控制菌测试所用培养基的适用性检查2.6.1 控制菌检查用的成品培养基、由脱水培养基或按处方配制的培养基均应进行培养基适用性检查。2.6.2菌悬液的制备序号试验菌种菌株培养1金黄色葡萄球菌ATCC 6538大豆酪蛋白消化肉汤或大豆酪蛋白消化琼脂30G35C, 18-24、时2铜绿假单胞菌

10、 ATCC 9027大豆酪蛋白消化肉汤或大豆酪蛋白消化琼脂30 G35 C , 18-24、时3枯草芽抱杆菌 ATCC 6633大豆酪蛋白消化肉汤或大豆酪蛋白消化琼脂30 G35 C , 18-24、时4大肠埃希菌ATCC 8739大豆酪蛋白消化肉汤或大豆酪蛋白消化琼脂30 G35 C , 18-24、时5鼠伤寒沙门菌 ATCC 14028大豆酪蛋白消化肉汤或大豆酪蛋白消化琼脂30 G35 C , 18-24、时2.6.3 上述培养物用0.9碗菌氯化钠溶液或pH7.2磷酸盐缓冲液制成适宜浓度的菌悬液。菌悬液在室温下 放置应在2小时内使用，若保存在28c可在24小时内使用。2.6.4 控制菌检查

11、用培养基的适用性检查项目包括培养基的促生长能力、抑制能力及指示能力的检查。各 培养基的检查测试项目及所用菌株见下表控制菌检查/口加小特性试验菌株胆汁耐受革兰氏 阴性菌的检测肠道菌增菌,肉汤培养基促生长能力大肠埃布国 铜绿假单胞菌抑制能力金更色葡萄球国紫红色胆汁葡萄糖琼脂促生长能力+指示能力大肠埃布国 铜绿假单胞菌大肠杆菌的检测麦康凯肉汤促生长能力大肠埃布国抑制能力金更色葡萄球国攵康矶琼月日拈 加生促生长能力+指示能力大肠埃布国沙门氏菌的检测RV沙门氏菌富集肉汤促生长能力鼠伤寒沙门菌抑制能力金更色葡萄球国木糖赖氨酸脱氧胆盐琼脂培养基促生长能力+指示能力鼠伤寒沙门菌铜绿假单胞菌的 检测澳化十六烷三

12、甲基俊琼脂促生长能力铜绿假单胞菌抑制能力大肠埃布国金黄色葡萄球菌 的检测甘露醇氯化钠琼脂培养基促生长能力+指示能力金更色葡萄球国抑制能力大肠埃布国2.7 液体培养基促生长能力检查取试验菌各0.1m 1（含菌数不大于100cfU （见上表）于被检培养基和上一批检验并通过的培养基中，在相 应控制菌检查规定的培养温度及最短培养时间下培养。两者比较，被检培养基与上一批检验并通过的培养 基比较，微生物生长良好并且相当。2.8 固体培养基促生长能力检查取试验菌各0.1m 1 （含菌数不大于100cfU （见上表）分别涂布于被检培养基和上一批检验并通过的培养基 中，在相应控制菌检查规定的培养温度及最短培养时

13、间下培养。两者比较，被检培养基与上一批检验并通 过的培养基比较，微生物生长良好并且相当。2.9 液体培养基和固体培养基的抑制能力检查取试验菌各0.1m 1（含菌数不小于100cfU （见上表）于被检培养基中，在相应控制菌检查规定的培养温度 及最长时间下培养，试验菌应不得生长。2.10 培养基指示能力检查取试验菌各0.1m 1 （含菌数不大于100cfU （见上表）分别涂布于被检培养基和上一批检验并通过的培养基 中，在相应控制菌检查规定的培养温度及时间范围内培养。被检培养基中生长的菌落在外观和指示反应上 与从此前已检测并批准的培养基批次所获得的菌落是相当的。3 参考文件Current USP B

14、P、EP附件及相关文优ttachment and related documentsR01微生物计数固体培养基适用性检查记录R02微生物计数液体培养基适用性检查记录R03微生物控制菌培养基适用性检查记录历史 History修订号生效日期修订内容001培养基促生长、抑制能力等规定了试验菌的取样量。附件编号Attachment No.:R01微生物计数固体培养基适用性检查记录Growth promotion test of solid media for Microbial enumeration test培乔基名称厂家/批号配制后批号后效期至检验日期培养温度培养箱编号后效期至对照批号后效期至检验

15、员1 操作步骤1.1 使用0.9%无菌氯化钠溶液或磷酸盐缓冲液制备测试菌悬液，制备黑曲霉抱子悬浮液时，可以添加0.05%的聚山梨脂80到缓冲液中。测试菌悬液应在两小时内使用，或者在2-8C的条件下24小时内使用。1.2 取金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽抱杆菌、白色念珠菌、黑曲霉5种菌悬液各少于100cfu,分别注入无菌平皿中，立即倾注大豆酪蛋白消化琼脂，每株试验菌平行制备 2个平皿，混匀、凝固，置 30C-35c培养不超过3天，计数；后2种菌悬液不超过5天，计数。再取后2种菌悬液各少于100cfu,分别 注入无菌平皿中，立即倾注沙氏葡萄糖琼脂，每株试验菌平行制备2个平皿，混匀、凝固，置

16、20 C-25 c培养不超过5天，计数。取铜绿假单胞菌、枯草芽抱杆菌2种菌悬液各少于100cfu,分别注入无菌平皿中，立即倾注R2A,每株试验菌平行制备 2个平皿，混匀、凝固，置 30C-35c培养不超过3天。同时用相应的上一批通过促生长测试的培养基替代被检培养基进行上述试验。1.3 进行促生长试验的培养基平皿上,微生物生长情况必须与已通过促生长测试的培养基平皿上的微生物生长情况一致或者更好，同时将待测定的培养基上的菌 落数与已通过促生长测试的培养基上的菌落数对比，两者之间的比值应处于70%-200%之间则判定此培养基通过促生长测试；反之则判定该培养基不符合规定，未通过促生长测试。2 记录：菌

17、种菌液批号开始培养时间/温 度结束培养时间/温 度测试培养基菌落数对照培养基菌落数对比生长情况（基下 本一致或更好）子者比值（70%-200 之间）%观察员结果判定平皿1平皿2平均平皿1平皿2平均附件编号 Attachment No.:R02微生物计数液体培养基适用性检查记录Growth promotion test of liquid media for Microbial enumeration test培乔基名称厂 家批号配制后批号功效期至培养箱编号功效期至对照批号功效期至检验员检验日期1操作步骤1.1 使用0.9%已菌氯化钠溶液或PH7.2磷酸盐缓冲液制备测试菌悬液。测试菌悬液应在两小

18、时内使用，或者在2-8C的条件下 24小时内使用。1.2 取金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽抱杆菌3种菌悬液各少于100cfu分别注入灭过菌的含有10ml大豆酪蛋白消化 肉汤的试管中，于30c-35C培养不超过3天。同时用相应的上一批通过促生长测试的培养基替代被检培养基进行上述试 验。培养结束后进行观察。1.3 如果肉眼能清晰看到的微生物的生长与上一批通过灵敏度测试的培养基的生长情形相同的话，则判定此培养基通过促生长 测试。反之则判定此培养基不符合规定，未通过促生长测试。2 记录：开始培养时间/温度结束培养时间/温度菌种菌液批号测试培养基 生长情况对照培养基 生长情况对比生长情况（基 本一

19、致或更好）观察员结果判定符合口不符合符合口不符合符合口不符合附件编号Attachment No.:R03微生物控制菌培养基适用性检查记录Growth promotion test of media for Specified Microorganisms tests培乔基名称厂家/批号配制后批号后效期至检验日期培养温度培养箱编号后效期至对照批号后效期至检验员1操作步骤1.1 使用0.9%无菌氯化钠溶液或 PH7.2磷酸盐缓冲液制备菌悬液，菌悬液在室温下放置应在2小时内使用，若保存在 28c可在24小时内使用。1.2 液体培养基促生长能力检查：分别接种不大于100cfu的试验菌于被检培养基和上一

20、批检验并通过的培养基中，在相应控制菌检查规定的培养温度及最短培养时间下培养。两者比较，被检培养基与上一批检验并通过适用性检查的培养基比较，微生物生长良好并且相当。1.3 固体培养基促生长能力检查：取试验菌各0.1ml （含菌数不大于100cfu）分别涂布于被检培养基和上一批检验并通过的培养基中，在相应控制菌检查规定的培养温度及最短培养时间下培养。两者比较，被检培养基与上一批检验并通过适用性检查的培养基比较，被检培养基与对照培养基上生长的菌落大小、形态特 征应一致。1.4 液体培养基和固体培养基的抑制能力检查：接种不少于100cfu的试验菌于被检培养基中，在相应控制菌检查规定的培养温度及最长时间卜培养，试验菌应不得生长。1.5 培养基指示能力检查：取试验菌各0.1ml （含菌数不大于100cfu）分别涂布于被检培养基和上一批检验并通过适用性检查的培养基中，在相应控制菌检查规定的培养温度及时间范围内培养。被检培养基中生长的菌落大小、形态特征、指示剂反应上与对照培养基一致。2 记录控制菌检查检查项目菌种菌液批号培养温度开始培养时间结束培养时间生长情况描述观察员结果判定口促生长能力符合口不符合口指示能力符合口不符合口抑制能力符合口不符合