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1、 选修 1课时 14 血红蛋白的提取和分离班级:_姓名:_设计人_日期_课前预习 预习案学习目标1自主梳理11蛋白质的分离原理：根据蛋白质各种特性的差异分离不同种类的蛋白质，如分子的_、所带电荷的_、溶解度、吸附性质和对其他分子的亲和力等。2凝胶色谱法：(2)(3)分离原理：通道速度3缓冲溶液：中小学最新教育资料 (3)_(即样品的加入和洗脱)：_。(4)纯度鉴定：_。6凝胶色谱操作：(1)凝胶色谱柱的制作。端。材料：本实验使用的是_。方法：凝胶用_充分溶胀后，配成凝胶悬浮液，一次性缓慢倒入色谱柱内。注意事项。a.商品凝胶使用前需直接_；b.装填时可_，使凝胶装填均匀；c.不能有气泡存在，防止
2、其_，降低分离效果；d.不能发生_的现象。中小学最新教育资料 检验：如果红色区带均匀一致地移动，说明色谱柱制作成功。(3)样品的加入与洗脱。调整缓冲液面：与凝胶面平齐滴加透析样品：用吸管将(1)mL透析后的样品加到色谱柱的_样品渗入凝胶床：打开下端出口 ，使_洗脱：打开下端出口 ，用_洗脱收集：待_接近色谱柱底端时，用试管收集流出液，每5 mL收集一管，连续收集预习小测1慢。知识拓展 探究案探究 1凝胶色谱法与电泳法1凝胶色谱法的概念：13缓冲溶液的作用：中小学最新教育资料 在一定范围内，缓冲溶液能抵制外界的酸和碱对溶液_的影响，维持 pH 基本不变。4缓冲溶液的配制7常用的电泳方法：_和_。
3、8凝胶色谱法(见下表)白质的分离 根据需要被分离的蛋白质相对分子质原理量的大小，利用具有网状结构的凝胶的分子筛作用，来进行分离质大小直径较小无规则扩散较慢分方向子速度运路径较短较长动情况后流出9电泳法(见下表)原理电泳利用了待分离样品中各种分子带电性质的差异以及分子本身的大小、形状的不同，使带电分子产生不同的迁移速度， 从而实现样品中各种分子的分离的带电性质差异、分子大小和形状不同而不同，从而得以分离中小学最新教育资料 1下列关于电泳的叙述中，正确的是D.聚丙烯酰胺凝胶电泳中，溶液中加人十二烷基硫酸钠(SDS)，电泳的迁移率主要取决于分子所带电荷的多少和相对分子质量的大小变式训练1A.具有相同
4、的相对分子质量B.相对分子质量不同，但都是相对分子质量较大的分子C.相对分子质量不同，但都是相对分子质量较小的分子D.具有不同的相对分子质量探究 2血红蛋白的提取和分离实验操作1(2)凝胶色谱操作样品的加入和洗脱。11蛋白质的提取和分离：中小学最新教育资料 (1)红细胞的洗涤目的：除去杂蛋白，以利于后续步骤的分离纯化。注意事项：离心时转速要低，离心时间要短，一般为500 r/min，离心 2 min，否则白细胞一同沉淀，达不到分离效果。洗涤三次后如上清液仍有黄色，可增加洗涤次数，否则血浆蛋白无法除净。(2)血红蛋白的释放过程(见下图)：第 2层(中上层)：脂溶性物质沉淀层(白色薄层固体)12蛋
5、白质的粗分离透析(3)目的除去样品中相对分子质量较小的杂质。 13蛋白质的纯化凝胶色谱操作(1)凝胶色谱柱的制作取长40cm，内径为1.6cm的玻璃管，两端需用砂纸磨平。柱底部制作：打孔挖出凹穴安装移液管头部覆盖尼龙网，再用100目尼龙纱将橡皮塞上部包好。柱顶部制作：打孔安装玻璃管。组装:将上述三部分按相应位置组装成一个整体。(2)凝胶色谱柱装填计算：根据色谱柱的内体积计算所需凝胶量凝胶溶胀：凝胶用蒸馏水充分溶胀后，配成凝胶悬浮液固定:将色谱柱垂直固定在支架上密(3)样品的加人和洗脱调整缓冲液面：打开色谱柱下端流出口，调整缓冲液与凝胶面平齐滴加透析样品:关闭下端出口，用吸管小心将1 mL样品
6、加到色谱柱顶端洗脱:打开下端出口，用磷酸缓冲液洗脱收集14蛋白质的纯度鉴定SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳判断纯化的蛋白质是否达到要求，需要进行蛋白质纯度的鉴定。鉴定的方法中，使用最多的是SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳。中小学最新教育资料 1凝胶色谱柱长为 40 cm,内径为 1. 6 cm，下列有关叙述中，不正确的是A.凝胶色谱柱直径的大小不影响分离的效果，但直径过大造成洗脱液体积增大，样品的稀释度过大B.凝胶色谱柱过高超过 1 m，不影响分离的效果，但耗用洗脱液过多，样品的稀释度过大变式训练1下列关于样品的加入和洗脱的操作中，不正确的是A.加样前，打开色谱柱下端的流出口，使柱内凝胶面上的缓冲液缓慢下降到
7、凝胶面的下面B.加样后，打开下端出口 ，使样品渗入凝胶床内11凝胶色谱法分离蛋白质的原理依据是A.根据蛋白质分子与凝胶的亲和力的大小B.根据蛋白质相对分子质量的大小C.根据蛋白所带电荷的多少B.溶解度髙的D.所带电荷多的3关于电泳的说法不正确的是A.加样前，打开色谱柱下端的流出口，使柱内凝胶面上的缓冲液缓慢下降到凝胶面的下面B.加样后，打开下端出口，使样品渗入凝胶床内中小学最新教育资料 C.等样品完全进入凝胶层后，关闭下端出口A.使酶的活性最高B.使蛋白质的活性最高D.使蛋白质带上电荷C.维持蛋白质所带电荷6下面是凝胶色谱法分离血红蛋白时样品加入(图 I)和洗脱(图)示意图。请据图回答下列问题
8、：(1)在加样品示意图中，正确的顺序是_。1项目分析分层明显样品处理完成 柱的装填查凝胶是否装填得均匀加入大分子有色物质如蓝色葡聚糖一 2000 或红色葡聚糖，若色带均匀、狭窄、平整装填成功中小学最新教育资料 选修 1课时 14 血红蛋白的提取和分离详细答案课前预习 预习案【自主梳理】1形状和大小、性质和多少2(1)分配色谱法 相对分子质量的大小(2)多孔球体(3)较短3(1)缓冲剂4(1)带电粒子 迁移(2)溶液 pH层大分子(4)SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳样品渗人凝胶床内磷酸缓冲液1234567知识拓展 探究案中小学最新教育资料 【探究 1凝胶色谱法与电泳法】1相对分子质量蛋白质2多孔不同较
9、小较长较慢较大凝胶外部3pH4使用比例5带电粒子6可解离正电迁移相反带电性质大小形状7琼脂糖凝胶电泳 聚丙烯酰胺凝胶电泳【典例精析】B【备注】SDS电泳成功的关键之一是电泳过程中，特别是样品制备过程中蛋白质与SDS的结合程度。由于制备凝胶的丙烯酰胺和N，N亚甲基双丙烯酰胺具有很强的神经毒性，并且容易被皮肤吸收，因此操作必须在通风橱内或通风处进行。TEMED和过硫酸胺对黏膜和上呼吸道、眼睛、皮肤等有很大的破坏作用，吞服可致命。因此在进行电泳操作时一定按照实验要求和步骤，在老师的指导下完成。操作时要戴好一次性手套。CB中小学最新教育资料 【变式训练】A【随堂自测】1B2A3C4A(3)完全进入凝胶层红色的蛋白质5中小学最新教育资料