《儿科学(神经病学)专业毕业论文[精品论文]内质网应激在惊厥持续状态幼年大鼠海马神经元损伤中的作用及依达拉奉对其的影响.doc》由会员分享，可在线阅读，更多相关《儿科学(神经病学)专业毕业论文[精品论文]内质网应激在惊厥持续状态幼年大鼠海马神经元损伤中的作用及依达拉奉对其的影响.doc（52页珍藏版）》请在三一文库上搜索。
1、儿科学(神经病学)专业毕业论文 精品论文 内质网应激在惊厥持续状态幼年大鼠海马神经元损伤中的作用及依达拉奉对其的影响关键词：惊厥持续状态 内质网应激 细胞凋亡 依达拉奉摘要：目的： 1.观察惊厥持续状态(SC)大鼠海马内质网应激相关分子XBP1、GRF78、TRAF2及Caspase-12的动态表达隋况。 2.探讨XBP1/GRF78介导UPR通路及TRAF2/Caspase-12介导的内质网应激反应性凋亡途径在SC后海马损伤中的可能作用以及依达拉奉对其的影响。 方法： 清洁级1921天龄雄性Sprague-Dawley(SD)大鼠195只，体重5070g，随机分为生理盐水对照组(NS)、惊厥
2、持续状态组(SC)和依达拉奉预处理组(ED)，各组再按惊厥后处死时间分4h、12h、24h、48h和72h五个亚组，每亚组13只。采用氯化锂-匹罗卡品法制作幼年大鼠SC模型，观察大鼠行为学变化，记录各组大鼠附京厥潜伏期、惊厥级别、惊止时间及死亡情况；选择惊厥发作达及以上，持续时间达30min以上，解除惊厥后状态良好的大鼠为合格SC模型。SC组按照SC模型制作；NS组以生理盐水代替氯化锂及匹罗卡品，其他处理同SC组。ED组大鼠在惊厥前3天，予腹腔注射ED5mg/kgd，每天一次，连续3d，第3d腹腔注射ED后30min开始sS造模；各组于相应时间点处死。光镜和电镜下观察大鼠海马病理学改变情况；R
3、T-PCR检测各时间点海马GRP78、TRAF2 mRNA的表达；Realtime-PCR检测XBP1、Caspase-12 mRNA的表达。免疫组织化学法检测海马CA1区TRAF2和Caspase-12蛋白的表达；TUNEL法检测海马CA1区凋亡细胞数的变化。 结果： 1.动物试验结果：动物经腹腔注射氯化锂后其行为活动无改变：予以匹罗卡品后，SC组于(16.65.4)min后、ED组于(21.26.3)min后出现SC，其差异有统计学意义(P<0.05)；注射匹罗卡品后有9只(9/130)大鼠未成功诱发SC，20只(20/130)出现发作，其余101只(101/130)均诱导出
4、级京厥发作。造模后大鼠死亡10只，其中2只(2/130)于惊厥后4h死亡；2只(2/130)于惊厥后12h死亡；1只(1/130)于惊厥后24h内死亡；3只(3/130)于48h死亡；2只(2/130)死于惊厥后72h；总死亡率为7.69(10/130)，最后造模成功率；85.4(111/130)。 2.HE染色：NS组各时间点大鼠海马CA1、CA3区及颞叶皮层锥体细胞层次清楚，排列整齐，神经元轮廓清晰，胞核大而圆；SC组惊厥后4h海马即见部分神经元肿胀，随后逐步出现胞核固缩，胞浆空泡化，部分神经元核仁消失，48h多量细胞呈现空泡状或三角形、不规则形，最终形成红色神经元，72h有好转，各时间点
5、均以CA1区为著；ED组大鼠各时间点也可见不同程度的神经元变性、丢失，均较SC组减轻，但仍重于NS组。 3.电镜：(1)NS组大鼠：细胞体积大，核大而圆，核内染色质分布均匀，线粒体大小正常，嵴清晰，胞浆富含粗面内质网及核糖体。(2)SC组大鼠：SC后4h即可观察到细胞核改变，核变小，核膜模糊、有的部位不连续；细胞质浓缩，个别线粒体有空泡化现象，SC后48h可见核明显固缩，染色质凝结成块、边集；胞质浓缩，线粒体空泡化明显，内质网扩张；细胞膜模糊不清，不连续。SC后72h，线粒体高度空泡化，内质网、核糖体减少。(3)ED组大鼠：SC后12h，核固缩，染色质呈颗粒状聚集，核膜尚清晰(有的部位不连续)
6、，核膜增厚，模糊，胞质浓缩，线粒体、内质网结构清晰。SC后48h，核膜增厚、模糊，核变得不规则如波浪状，染色质凝结成块，内质网明显扩张。SC后72h，核固缩明显，核膜明显增厚、模糊，染色质呈颗粒状聚集，线粒体肿胀，嵴减少，呈部分空泡样变性。 4.TUNEL检测凋亡情况：NS组各时间点海马CA1区可见少量TUNEL阳性细胞表达，SC组惊厥后12h阳性细胞表达开始增高，于48h达高峰，72h轻度下降，在惊厥后12h72h海马CA1区TUNEL阳性细胞数均显著高于NS组(P<0.05)；ED组变化趋势同SC组，ED12h48h各亚组TUNEL阳性细胞数均较sC组显著下降(P&l
7、t;0.01或0.05)。 5.RT-PCR检测结果： (1)GRP78 mRNA表达结果：SC组惊厥后12h海马GRP78mRNA表达显著升高，于24h达峰，48h开始下降，72h回复基线水平；SC组12h后各时间点表达均较NC组显著升高；ED组动态表达同SC组，其在24h、48h明显高于SC组(P<0.05或P<0.01)。 (2)TRAF2 mRNA表达结果：SC组4h开始显著升高，12小时即达高峰，2472小时逐步下降，但仍高于Ns组(P均<0.01)；ED组4小时开始升高，24小时达高峰，至72小时恢复至正常水平。ED组各时间点表达均显著低于
8、SC组(P<0.05或P<0.01)。 6.Real-time PCR检测结果 (1)XBP1 mRNA表达结果：SC组各时间点XBP1mRNA含量较NS组对应时间点表达明显升高(P<0.01)，SC组XBP1mRNA在4h即有升高，24h达高峰，48h开始下降；ED组各时间点XBP1mRNA含量显著高于SC组(P<0.01或0.05)，其表达动态变化同SC组。 (2)Caspase-12 mRNA表达结果：SC组海马Caspase-12 mRNA表达在惊厥后12h开始升高，24h达锋，72h迅速降至基线水平；ED Caspase-12m
9、RNA表达的时间变化也与SC组相似，但在24h、48h高峰期较SC组显著降低(P<0.05)。 7.免疫组化检测结果： (1)TRAF2蛋白检测结果：SC组惊厥后4h海马CA1区TRAF2蛋白表达即显著升高，于24h边峰，48h开始下降，各时间点表达均高于NS相应组；ED组TRAF2蛋白表达于4h即升高，在48h达高峰，72h下降，但仍高于NS组；ED组TRAF2蛋白在24h、48h表达较SC组显著减少(P<0.05)。 (2)Caspase-12蛋白检测结果：SC组海马CA1区Caspase-12蛋白表达在惊厥后12h显著增加，于24h达高峰，72h明显下降，均较
10、相应时间点NS组高(P<0.05)；ED组Caspase-12蛋白表达12h显著增加，于24h达高峰，72h降至正常水平。ED组在24h高峰期较SC组有明显降低(P<0.01)。 8.湘关性分析：大鼠海马XBP1 mRNA与GRP78 mRNA显著正相关(r=0.629，P<0.01)，与Tunnel细胞凋亡数表达负相关(r=-0.335，P<0.01)；海马TRAF2mRNA及蛋白与Caspase-12 mRNA及蛋白显著正相关(r=0.444、0.474、0.413、0.679，P<0.01)；海马Caspase-12
11、mRNA及蛋白与Tunnel细胞凋亡数正相关(r=0.283、0.514，P<0.05)。 结论： 1.SC能诱导幼年大鼠海马神经元内质网应激反应(ERS)； 2.XBP1/GRF78介导的UPR信号通路和TRAF2/Caspase-12介导的ERS相关凋亡信号转导通路可能参与了SC后幼年大鼠海马神经元的损伤机制； 3.依达拉奉可能通过调节SC诱导的ERS信号通路关键效应分子的表达，增强XBP1/GRP78介导UPR的保护功能，抑制TRAF2/Caspase-12介导的ERS反应性凋亡信号通路的激活，从而减轻惊厥后幼年大鼠海马病理损伤程度。正文内容 目的： 1.观察惊厥持续状态(
12、SC)大鼠海马内质网应激相关分子XBP1、GRF78、TRAF2及Caspase-12的动态表达隋况。 2.探讨XBP1/GRF78介导UPR通路及TRAF2/Caspase-12介导的内质网应激反应性凋亡途径在SC后海马损伤中的可能作用以及依达拉奉对其的影响。 方法： 清洁级1921天龄雄性Sprague-Dawley(SD)大鼠195只，体重5070g，随机分为生理盐水对照组(NS)、惊厥持续状态组(SC)和依达拉奉预处理组(ED)，各组再按惊厥后处死时间分4h、12h、24h、48h和72h五个亚组，每亚组13只。采用氯化锂-匹罗卡品法制作幼年大鼠SC模型，观察大鼠行为学变化，记录各组大
13、鼠附京厥潜伏期、惊厥级别、惊止时间及死亡情况；选择惊厥发作达及以上，持续时间达30min以上，解除惊厥后状态良好的大鼠为合格SC模型。SC组按照SC模型制作；NS组以生理盐水代替氯化锂及匹罗卡品，其他处理同SC组。ED组大鼠在惊厥前3天，予腹腔注射ED5mg/kgd，每天一次，连续3d，第3d腹腔注射ED后30min开始sS造模；各组于相应时间点处死。光镜和电镜下观察大鼠海马病理学改变情况；RT-PCR检测各时间点海马GRP78、TRAF2 mRNA的表达；Realtime-PCR检测XBP1、Caspase-12 mRNA的表达。免疫组织化学法检测海马CA1区TRAF2和Caspase-12
14、蛋白的表达；TUNEL法检测海马CA1区凋亡细胞数的变化。 结果： 1.动物试验结果：动物经腹腔注射氯化锂后其行为活动无改变：予以匹罗卡品后，SC组于(16.65.4)min后、ED组于(21.26.3)min后出现SC，其差异有统计学意义(P<0.05)；注射匹罗卡品后有9只(9/130)大鼠未成功诱发SC，20只(20/130)出现发作，其余101只(101/130)均诱导出级京厥发作。造模后大鼠死亡10只，其中2只(2/130)于惊厥后4h死亡；2只(2/130)于惊厥后12h死亡；1只(1/130)于惊厥后24h内死亡；3只(3/130)于48h死亡；2只(2/130)死
15、于惊厥后72h；总死亡率为7.69(10/130)，最后造模成功率；85.4(111/130)。 2.HE染色：NS组各时间点大鼠海马CA1、CA3区及颞叶皮层锥体细胞层次清楚，排列整齐，神经元轮廓清晰，胞核大而圆；SC组惊厥后4h海马即见部分神经元肿胀，随后逐步出现胞核固缩，胞浆空泡化，部分神经元核仁消失，48h多量细胞呈现空泡状或三角形、不规则形，最终形成红色神经元，72h有好转，各时间点均以CA1区为著；ED组大鼠各时间点也可见不同程度的神经元变性、丢失，均较SC组减轻，但仍重于NS组。 3.电镜：(1)NS组大鼠：细胞体积大，核大而圆，核内染色质分布均匀，线粒体大小正常，嵴清晰，胞浆富
16、含粗面内质网及核糖体。(2)SC组大鼠：SC后4h即可观察到细胞核改变，核变小，核膜模糊、有的部位不连续；细胞质浓缩，个别线粒体有空泡化现象，SC后48h可见核明显固缩，染色质凝结成块、边集；胞质浓缩，线粒体空泡化明显，内质网扩张；细胞膜模糊不清，不连续。SC后72h，线粒体高度空泡化，内质网、核糖体减少。(3)ED组大鼠：SC后12h，核固缩，染色质呈颗粒状聚集，核膜尚清晰(有的部位不连续)，核膜增厚，模糊，胞质浓缩，线粒体、内质网结构清晰。SC后48h，核膜增厚、模糊，核变得不规则如波浪状，染色质凝结成块，内质网明显扩张。SC后72h，核固缩明显，核膜明显增厚、模糊，染色质呈颗粒状聚集，线
17、粒体肿胀，嵴减少，呈部分空泡样变性。 4.TUNEL检测凋亡情况：NS组各时间点海马CA1区可见少量TUNEL阳性细胞表达，SC组惊厥后12h阳性细胞表达开始增高，于48h达高峰，72h轻度下降，在惊厥后12h72h海马CA1区TUNEL阳性细胞数均显著高于NS组(P<0.05)；ED组变化趋势同SC组，ED12h48h各亚组TUNEL阳性细胞数均较sC组显著下降(P<0.01或0.05)。 5.RT-PCR检测结果： (1)GRP78 mRNA表达结果：SC组惊厥后12h海马GRP78mRNA表达显著升高，于24h达峰，48h开始下降，72h回复基线水平；SC组1
18、2h后各时间点表达均较NC组显著升高；ED组动态表达同SC组，其在24h、48h明显高于SC组(P<0.05或P<0.01)。 (2)TRAF2 mRNA表达结果：SC组4h开始显著升高，12小时即达高峰，2472小时逐步下降，但仍高于Ns组(P均<0.01)；ED组4小时开始升高，24小时达高峰，至72小时恢复至正常水平。ED组各时间点表达均显著低于SC组(P<0.05或P<0.01)。 6.Real-time PCR检测结果 (1)XBP1 mRNA表达结果：SC组各时间点XBP1mRNA含量较NS组对应时间点表达明显升
19、高(P<0.01)，SC组XBP1mRNA在4h即有升高，24h达高峰，48h开始下降；ED组各时间点XBP1mRNA含量显著高于SC组(P<0.01或0.05)，其表达动态变化同SC组。 (2)Caspase-12 mRNA表达结果：SC组海马Caspase-12 mRNA表达在惊厥后12h开始升高，24h达锋，72h迅速降至基线水平；ED Caspase-12mRNA表达的时间变化也与SC组相似，但在24h、48h高峰期较SC组显著降低(P<0.05)。 7.免疫组化检测结果： (1)TRAF2蛋白检测结果：SC组惊厥后4h海马CA1区TRAF2蛋
20、白表达即显著升高，于24h边峰，48h开始下降，各时间点表达均高于NS相应组；ED组TRAF2蛋白表达于4h即升高，在48h达高峰，72h下降，但仍高于NS组；ED组TRAF2蛋白在24h、48h表达较SC组显著减少(P<0.05)。 (2)Caspase-12蛋白检测结果：SC组海马CA1区Caspase-12蛋白表达在惊厥后12h显著增加，于24h达高峰，72h明显下降，均较相应时间点NS组高(P<0.05)；ED组Caspase-12蛋白表达12h显著增加，于24h达高峰，72h降至正常水平。ED组在24h高峰期较SC组有明显降低(P<0.01)
21、。 8.湘关性分析：大鼠海马XBP1 mRNA与GRP78 mRNA显著正相关(r=0.629，P<0.01)，与Tunnel细胞凋亡数表达负相关(r=-0.335，P<0.01)；海马TRAF2mRNA及蛋白与Caspase-12 mRNA及蛋白显著正相关(r=0.444、0.474、0.413、0.679，P<0.01)；海马Caspase-12 mRNA及蛋白与Tunnel细胞凋亡数正相关(r=0.283、0.514，P<0.05)。 结论： 1.SC能诱导幼年大鼠海马神经元内质网应激反应(ERS)； 2.XBP1/GRF78介导的
22、UPR信号通路和TRAF2/Caspase-12介导的ERS相关凋亡信号转导通路可能参与了SC后幼年大鼠海马神经元的损伤机制； 3.依达拉奉可能通过调节SC诱导的ERS信号通路关键效应分子的表达，增强XBP1/GRP78介导UPR的保护功能，抑制TRAF2/Caspase-12介导的ERS反应性凋亡信号通路的激活，从而减轻惊厥后幼年大鼠海马病理损伤程度。目的： 1.观察惊厥持续状态(SC)大鼠海马内质网应激相关分子XBP1、GRF78、TRAF2及Caspase-12的动态表达隋况。 2.探讨XBP1/GRF78介导UPR通路及TRAF2/Caspase-12介导的内质网应激反应性凋亡途径在S
23、C后海马损伤中的可能作用以及依达拉奉对其的影响。 方法： 清洁级1921天龄雄性Sprague-Dawley(SD)大鼠195只，体重5070g，随机分为生理盐水对照组(NS)、惊厥持续状态组(SC)和依达拉奉预处理组(ED)，各组再按惊厥后处死时间分4h、12h、24h、48h和72h五个亚组，每亚组13只。采用氯化锂-匹罗卡品法制作幼年大鼠SC模型，观察大鼠行为学变化，记录各组大鼠附京厥潜伏期、惊厥级别、惊止时间及死亡情况；选择惊厥发作达及以上，持续时间达30min以上，解除惊厥后状态良好的大鼠为合格SC模型。SC组按照SC模型制作；NS组以生理盐水代替氯化锂及匹罗卡品，其他处理同SC组。
24、ED组大鼠在惊厥前3天，予腹腔注射ED5mg/kgd，每天一次，连续3d，第3d腹腔注射ED后30min开始sS造模；各组于相应时间点处死。光镜和电镜下观察大鼠海马病理学改变情况；RT-PCR检测各时间点海马GRP78、TRAF2 mRNA的表达；Realtime-PCR检测XBP1、Caspase-12 mRNA的表达。免疫组织化学法检测海马CA1区TRAF2和Caspase-12蛋白的表达；TUNEL法检测海马CA1区凋亡细胞数的变化。 结果： 1.动物试验结果：动物经腹腔注射氯化锂后其行为活动无改变：予以匹罗卡品后，SC组于(16.65.4)min后、ED组于(21.26.3)min后出
25、现SC，其差异有统计学意义(P<0.05)；注射匹罗卡品后有9只(9/130)大鼠未成功诱发SC，20只(20/130)出现发作，其余101只(101/130)均诱导出级京厥发作。造模后大鼠死亡10只，其中2只(2/130)于惊厥后4h死亡；2只(2/130)于惊厥后12h死亡；1只(1/130)于惊厥后24h内死亡；3只(3/130)于48h死亡；2只(2/130)死于惊厥后72h；总死亡率为7.69(10/130)，最后造模成功率；85.4(111/130)。 2.HE染色：NS组各时间点大鼠海马CA1、CA3区及颞叶皮层锥体细胞层次清楚，排列整齐，神经元轮廓清晰，胞核大而圆
26、；SC组惊厥后4h海马即见部分神经元肿胀，随后逐步出现胞核固缩，胞浆空泡化，部分神经元核仁消失，48h多量细胞呈现空泡状或三角形、不规则形，最终形成红色神经元，72h有好转，各时间点均以CA1区为著；ED组大鼠各时间点也可见不同程度的神经元变性、丢失，均较SC组减轻，但仍重于NS组。 3.电镜：(1)NS组大鼠：细胞体积大，核大而圆，核内染色质分布均匀，线粒体大小正常，嵴清晰，胞浆富含粗面内质网及核糖体。(2)SC组大鼠：SC后4h即可观察到细胞核改变，核变小，核膜模糊、有的部位不连续；细胞质浓缩，个别线粒体有空泡化现象，SC后48h可见核明显固缩，染色质凝结成块、边集；胞质浓缩，线粒体空泡化
27、明显，内质网扩张；细胞膜模糊不清，不连续。SC后72h，线粒体高度空泡化，内质网、核糖体减少。(3)ED组大鼠：SC后12h，核固缩，染色质呈颗粒状聚集，核膜尚清晰(有的部位不连续)，核膜增厚，模糊，胞质浓缩，线粒体、内质网结构清晰。SC后48h，核膜增厚、模糊，核变得不规则如波浪状，染色质凝结成块，内质网明显扩张。SC后72h，核固缩明显，核膜明显增厚、模糊，染色质呈颗粒状聚集，线粒体肿胀，嵴减少，呈部分空泡样变性。 4.TUNEL检测凋亡情况：NS组各时间点海马CA1区可见少量TUNEL阳性细胞表达，SC组惊厥后12h阳性细胞表达开始增高，于48h达高峰，72h轻度下降，在惊厥后12h72
28、h海马CA1区TUNEL阳性细胞数均显著高于NS组(P<0.05)；ED组变化趋势同SC组，ED12h48h各亚组TUNEL阳性细胞数均较sC组显著下降(P<0.01或0.05)。 5.RT-PCR检测结果： (1)GRP78 mRNA表达结果：SC组惊厥后12h海马GRP78mRNA表达显著升高，于24h达峰，48h开始下降，72h回复基线水平；SC组12h后各时间点表达均较NC组显著升高；ED组动态表达同SC组，其在24h、48h明显高于SC组(P<0.05或P<0.01)。 (2)TRAF2 mRNA表达结果：SC组4h开始显著升高
29、，12小时即达高峰，2472小时逐步下降，但仍高于Ns组(P均<0.01)；ED组4小时开始升高，24小时达高峰，至72小时恢复至正常水平。ED组各时间点表达均显著低于SC组(P<0.05或P<0.01)。 6.Real-time PCR检测结果 (1)XBP1 mRNA表达结果：SC组各时间点XBP1mRNA含量较NS组对应时间点表达明显升高(P<0.01)，SC组XBP1mRNA在4h即有升高，24h达高峰，48h开始下降；ED组各时间点XBP1mRNA含量显著高于SC组(P<0.01或0.05)，其表达动态变化同SC组
30、。 (2)Caspase-12 mRNA表达结果：SC组海马Caspase-12 mRNA表达在惊厥后12h开始升高，24h达锋，72h迅速降至基线水平；ED Caspase-12mRNA表达的时间变化也与SC组相似，但在24h、48h高峰期较SC组显著降低(P<0.05)。 7.免疫组化检测结果： (1)TRAF2蛋白检测结果：SC组惊厥后4h海马CA1区TRAF2蛋白表达即显著升高，于24h边峰，48h开始下降，各时间点表达均高于NS相应组；ED组TRAF2蛋白表达于4h即升高，在48h达高峰，72h下降，但仍高于NS组；ED组TRAF2蛋白在24h、48h表达较SC组显著减
31、少(P<0.05)。 (2)Caspase-12蛋白检测结果：SC组海马CA1区Caspase-12蛋白表达在惊厥后12h显著增加，于24h达高峰，72h明显下降，均较相应时间点NS组高(P<0.05)；ED组Caspase-12蛋白表达12h显著增加，于24h达高峰，72h降至正常水平。ED组在24h高峰期较SC组有明显降低(P<0.01)。 8.湘关性分析：大鼠海马XBP1 mRNA与GRP78 mRNA显著正相关(r=0.629，P<0.01)，与Tunnel细胞凋亡数表达负相关(r=-0.335，P<0.01)；海马
32、TRAF2mRNA及蛋白与Caspase-12 mRNA及蛋白显著正相关(r=0.444、0.474、0.413、0.679，P<0.01)；海马Caspase-12 mRNA及蛋白与Tunnel细胞凋亡数正相关(r=0.283、0.514，P<0.05)。 结论： 1.SC能诱导幼年大鼠海马神经元内质网应激反应(ERS)； 2.XBP1/GRF78介导的UPR信号通路和TRAF2/Caspase-12介导的ERS相关凋亡信号转导通路可能参与了SC后幼年大鼠海马神经元的损伤机制； 3.依达拉奉可能通过调节SC诱导的ERS信号通路关键效应分子的表达，增强XBP1/GR
33、P78介导UPR的保护功能，抑制TRAF2/Caspase-12介导的ERS反应性凋亡信号通路的激活，从而减轻惊厥后幼年大鼠海马病理损伤程度。目的： 1.观察惊厥持续状态(SC)大鼠海马内质网应激相关分子XBP1、GRF78、TRAF2及Caspase-12的动态表达隋况。 2.探讨XBP1/GRF78介导UPR通路及TRAF2/Caspase-12介导的内质网应激反应性凋亡途径在SC后海马损伤中的可能作用以及依达拉奉对其的影响。 方法： 清洁级1921天龄雄性Sprague-Dawley(SD)大鼠195只，体重5070g，随机分为生理盐水对照组(NS)、惊厥持续状态组(SC)和依达拉奉预处
34、理组(ED)，各组再按惊厥后处死时间分4h、12h、24h、48h和72h五个亚组，每亚组13只。采用氯化锂-匹罗卡品法制作幼年大鼠SC模型，观察大鼠行为学变化，记录各组大鼠附京厥潜伏期、惊厥级别、惊止时间及死亡情况；选择惊厥发作达及以上，持续时间达30min以上，解除惊厥后状态良好的大鼠为合格SC模型。SC组按照SC模型制作；NS组以生理盐水代替氯化锂及匹罗卡品，其他处理同SC组。ED组大鼠在惊厥前3天，予腹腔注射ED5mg/kgd，每天一次，连续3d，第3d腹腔注射ED后30min开始sS造模；各组于相应时间点处死。光镜和电镜下观察大鼠海马病理学改变情况；RT-PCR检测各时间点海马GRP
35、78、TRAF2 mRNA的表达；Realtime-PCR检测XBP1、Caspase-12 mRNA的表达。免疫组织化学法检测海马CA1区TRAF2和Caspase-12蛋白的表达；TUNEL法检测海马CA1区凋亡细胞数的变化。 结果： 1.动物试验结果：动物经腹腔注射氯化锂后其行为活动无改变：予以匹罗卡品后，SC组于(16.65.4)min后、ED组于(21.26.3)min后出现SC，其差异有统计学意义(P<0.05)；注射匹罗卡品后有9只(9/130)大鼠未成功诱发SC，20只(20/130)出现发作，其余101只(101/130)均诱导出级京厥发作。造模后大鼠死亡10只
36、，其中2只(2/130)于惊厥后4h死亡；2只(2/130)于惊厥后12h死亡；1只(1/130)于惊厥后24h内死亡；3只(3/130)于48h死亡；2只(2/130)死于惊厥后72h；总死亡率为7.69(10/130)，最后造模成功率；85.4(111/130)。 2.HE染色：NS组各时间点大鼠海马CA1、CA3区及颞叶皮层锥体细胞层次清楚，排列整齐，神经元轮廓清晰，胞核大而圆；SC组惊厥后4h海马即见部分神经元肿胀，随后逐步出现胞核固缩，胞浆空泡化，部分神经元核仁消失，48h多量细胞呈现空泡状或三角形、不规则形，最终形成红色神经元，72h有好转，各时间点均以CA1区为著；ED组大鼠各时
37、间点也可见不同程度的神经元变性、丢失，均较SC组减轻，但仍重于NS组。 3.电镜：(1)NS组大鼠：细胞体积大，核大而圆，核内染色质分布均匀，线粒体大小正常，嵴清晰，胞浆富含粗面内质网及核糖体。(2)SC组大鼠：SC后4h即可观察到细胞核改变，核变小，核膜模糊、有的部位不连续；细胞质浓缩，个别线粒体有空泡化现象，SC后48h可见核明显固缩，染色质凝结成块、边集；胞质浓缩，线粒体空泡化明显，内质网扩张；细胞膜模糊不清，不连续。SC后72h，线粒体高度空泡化，内质网、核糖体减少。(3)ED组大鼠：SC后12h，核固缩，染色质呈颗粒状聚集，核膜尚清晰(有的部位不连续)，核膜增厚，模糊，胞质浓缩，线粒
38、体、内质网结构清晰。SC后48h，核膜增厚、模糊，核变得不规则如波浪状，染色质凝结成块，内质网明显扩张。SC后72h，核固缩明显，核膜明显增厚、模糊，染色质呈颗粒状聚集，线粒体肿胀，嵴减少，呈部分空泡样变性。 4.TUNEL检测凋亡情况：NS组各时间点海马CA1区可见少量TUNEL阳性细胞表达，SC组惊厥后12h阳性细胞表达开始增高，于48h达高峰，72h轻度下降，在惊厥后12h72h海马CA1区TUNEL阳性细胞数均显著高于NS组(P<0.05)；ED组变化趋势同SC组，ED12h48h各亚组TUNEL阳性细胞数均较sC组显著下降(P<0.01或0.05)。 5.
39、RT-PCR检测结果： (1)GRP78 mRNA表达结果：SC组惊厥后12h海马GRP78mRNA表达显著升高，于24h达峰，48h开始下降，72h回复基线水平；SC组12h后各时间点表达均较NC组显著升高；ED组动态表达同SC组，其在24h、48h明显高于SC组(P<0.05或P<0.01)。 (2)TRAF2 mRNA表达结果：SC组4h开始显著升高，12小时即达高峰，2472小时逐步下降，但仍高于Ns组(P均<0.01)；ED组4小时开始升高，24小时达高峰，至72小时恢复至正常水平。ED组各时间点表达均显著低于SC组(P<0.0
40、5或P<0.01)。 6.Real-time PCR检测结果 (1)XBP1 mRNA表达结果：SC组各时间点XBP1mRNA含量较NS组对应时间点表达明显升高(P<0.01)，SC组XBP1mRNA在4h即有升高，24h达高峰，48h开始下降；ED组各时间点XBP1mRNA含量显著高于SC组(P<0.01或0.05)，其表达动态变化同SC组。 (2)Caspase-12 mRNA表达结果：SC组海马Caspase-12 mRNA表达在惊厥后12h开始升高，24h达锋，72h迅速降至基线水平；ED Caspase-12mRNA表达的时间变化也与SC组相
41、似，但在24h、48h高峰期较SC组显著降低(P<0.05)。 7.免疫组化检测结果： (1)TRAF2蛋白检测结果：SC组惊厥后4h海马CA1区TRAF2蛋白表达即显著升高，于24h边峰，48h开始下降，各时间点表达均高于NS相应组；ED组TRAF2蛋白表达于4h即升高，在48h达高峰，72h下降，但仍高于NS组；ED组TRAF2蛋白在24h、48h表达较SC组显著减少(P<0.05)。 (2)Caspase-12蛋白检测结果：SC组海马CA1区Caspase-12蛋白表达在惊厥后12h显著增加，于24h达高峰，72h明显下降，均较相应时间点NS组高(P&
42、lt;0.05)；ED组Caspase-12蛋白表达12h显著增加，于24h达高峰，72h降至正常水平。ED组在24h高峰期较SC组有明显降低(P<0.01)。 8.湘关性分析：大鼠海马XBP1 mRNA与GRP78 mRNA显著正相关(r=0.629，P<0.01)，与Tunnel细胞凋亡数表达负相关(r=-0.335，P<0.01)；海马TRAF2mRNA及蛋白与Caspase-12 mRNA及蛋白显著正相关(r=0.444、0.474、0.413、0.679，P<0.01)；海马Caspase-12 mRNA及蛋白与Tunnel细胞
43、凋亡数正相关(r=0.283、0.514，P<0.05)。 结论： 1.SC能诱导幼年大鼠海马神经元内质网应激反应(ERS)； 2.XBP1/GRF78介导的UPR信号通路和TRAF2/Caspase-12介导的ERS相关凋亡信号转导通路可能参与了SC后幼年大鼠海马神经元的损伤机制； 3.依达拉奉可能通过调节SC诱导的ERS信号通路关键效应分子的表达，增强XBP1/GRP78介导UPR的保护功能，抑制TRAF2/Caspase-12介导的ERS反应性凋亡信号通路的激活，从而减轻惊厥后幼年大鼠海马病理损伤程度。目的： 1.观察惊厥持续状态(SC)大鼠海马内质网应激相关分子XBP1、
44、GRF78、TRAF2及Caspase-12的动态表达隋况。 2.探讨XBP1/GRF78介导UPR通路及TRAF2/Caspase-12介导的内质网应激反应性凋亡途径在SC后海马损伤中的可能作用以及依达拉奉对其的影响。 方法： 清洁级1921天龄雄性Sprague-Dawley(SD)大鼠195只，体重5070g，随机分为生理盐水对照组(NS)、惊厥持续状态组(SC)和依达拉奉预处理组(ED)，各组再按惊厥后处死时间分4h、12h、24h、48h和72h五个亚组，每亚组13只。采用氯化锂-匹罗卡品法制作幼年大鼠SC模型，观察大鼠行为学变化，记录各组大鼠附京厥潜伏期、惊厥级别、惊止时间及死亡情
45、况；选择惊厥发作达及以上，持续时间达30min以上，解除惊厥后状态良好的大鼠为合格SC模型。SC组按照SC模型制作；NS组以生理盐水代替氯化锂及匹罗卡品，其他处理同SC组。ED组大鼠在惊厥前3天，予腹腔注射ED5mg/kgd，每天一次，连续3d，第3d腹腔注射ED后30min开始sS造模；各组于相应时间点处死。光镜和电镜下观察大鼠海马病理学改变情况；RT-PCR检测各时间点海马GRP78、TRAF2 mRNA的表达；Realtime-PCR检测XBP1、Caspase-12 mRNA的表达。免疫组织化学法检测海马CA1区TRAF2和Caspase-12蛋白的表达；TUNEL法检测海马CA1区凋
46、亡细胞数的变化。 结果： 1.动物试验结果：动物经腹腔注射氯化锂后其行为活动无改变：予以匹罗卡品后，SC组于(16.65.4)min后、ED组于(21.26.3)min后出现SC，其差异有统计学意义(P<0.05)；注射匹罗卡品后有9只(9/130)大鼠未成功诱发SC，20只(20/130)出现发作，其余101只(101/130)均诱导出级京厥发作。造模后大鼠死亡10只，其中2只(2/130)于惊厥后4h死亡；2只(2/130)于惊厥后12h死亡；1只(1/130)于惊厥后24h内死亡；3只(3/130)于48h死亡；2只(2/130)死于惊厥后72h；总死亡率为7.69(10/
47、130)，最后造模成功率；85.4(111/130)。 2.HE染色：NS组各时间点大鼠海马CA1、CA3区及颞叶皮层锥体细胞层次清楚，排列整齐，神经元轮廓清晰，胞核大而圆；SC组惊厥后4h海马即见部分神经元肿胀，随后逐步出现胞核固缩，胞浆空泡化，部分神经元核仁消失，48h多量细胞呈现空泡状或三角形、不规则形，最终形成红色神经元，72h有好转，各时间点均以CA1区为著；ED组大鼠各时间点也可见不同程度的神经元变性、丢失，均较SC组减轻，但仍重于NS组。 3.电镜：(1)NS组大鼠：细胞体积大，核大而圆，核内染色质分布均匀，线粒体大小正常，嵴清晰，胞浆富含粗面内质网及核糖体。(2)SC组大鼠：S
48、C后4h即可观察到细胞核改变，核变小，核膜模糊、有的部位不连续；细胞质浓缩，个别线粒体有空泡化现象，SC后48h可见核明显固缩，染色质凝结成块、边集；胞质浓缩，线粒体空泡化明显，内质网扩张；细胞膜模糊不清，不连续。SC后72h，线粒体高度空泡化，内质网、核糖体减少。(3)ED组大鼠：SC后12h，核固缩，染色质呈颗粒状聚集，核膜尚清晰(有的部位不连续)，核膜增厚，模糊，胞质浓缩，线粒体、内质网结构清晰。SC后48h，核膜增厚、模糊，核变得不规则如波浪状，染色质凝结成块，内质网明显扩张。SC后72h，核固缩明显，核膜明显增厚、模糊，染色质呈颗粒状聚集，线粒体肿胀，嵴减少，呈部分空泡样变性。 4.
49、TUNEL检测凋亡情况：NS组各时间点海马CA1区可见少量TUNEL阳性细胞表达，SC组惊厥后12h阳性细胞表达开始增高，于48h达高峰，72h轻度下降，在惊厥后12h72h海马CA1区TUNEL阳性细胞数均显著高于NS组(P<0.05)；ED组变化趋势同SC组，ED12h48h各亚组TUNEL阳性细胞数均较sC组显著下降(P<0.01或0.05)。 5.RT-PCR检测结果： (1)GRP78 mRNA表达结果：SC组惊厥后12h海马GRP78mRNA表达显著升高，于24h达峰，48h开始下降，72h回复基线水平；SC组12h后各时间点表达均较NC组显著升高；ED组动