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1、1,血小板的止血作用,王 学 锋,2,3,The Normal In - Situ Process,FIG 1: Normal blood vessel,Intima/media with endothelial cell basal membrane smooth muscle cells collagen fibers,erythrocyte thrombocyte lumen leukocyte,Hemostasis,4,FIG 2 Injured blood vessel Exposure of collagen Adhesion of platelets mediated by vW
2、F Activation and de-granulation of platelets Aggregation of platelets,erythrocyte non-activatedthrombocyte lumen endothelial cell basal membrane activated collagen-bound thrombocyte collagen fibers smooth muscle cells,Hemostasis,The Normal In - Situ Process,5,FIG 3 Platelet plug stabilization by fib
3、rin,lumen endothelial cell basal membrane erythrocytes activatedthrombocytes plug sealing and stabilization by fibrin formation,The Normal In - Situ Process,Hemostasis,6,7,8,9,10,11,12,FIG 4a Cellular organiza-tion of a platelet, side cross-view,outer membrane surface connectedcanalicular system act
4、in microtubuli dense (d-) granules alpha (a-) granules lysosomes mitochondria,FIG 4b Equatorial cross-view,Primary Hemostasis,The Platelet,13,14,血小板的结构与生化组成,表面结构 骨架 细胞器 特殊的膜系统 （幻灯）,15,表面结构,细胞外衣 糖蛋白的糖链（血小板膜受 体的所在位置） 细胞膜 蛋白质与脂质 开放管道系统的开口,16,17,生化组成,磷脂酰胆碱（PC） 磷脂酰乙醇胺（PE） 膜磷脂 鞘磷脂 甘油磷脂 磷脂酰丝氨酸（PS） 磷脂酰肌醇（PI
5、） 溶血卵磷脂 胆固醇 糖脂,膜脂质,75%80%,20%25%,2%5%,18,血小板膜蛋白,GPIa : 胶原受体 GPIb-IX ：vWF的受体 缺乏巨血小板综合征 黏附 GPIIb-IIIa: Fg受体 缺乏血小板无力症 聚集、黏附 GPIV ：TSP受体 GPV：凝血酶受体 缺乏巨血小板综合征,19,d-granule,a -granule,GPIb-IX receptor-complex,von Willebrand - Factor,fibrinogen,GPIIb-IIIa receptor-complex,Release of glycoproteins vWF fibrin
6、ogen coagulation factors,Release of ADP serotonin calcium etc,platelet,Primary Hemostasis,Normal Platelet Function,20,d-granule,a-granule,Glanzmann Thrombastenia,Bernard-Soulier Syndrome,platelet,No release from granules: Gray syndrome (no a-granules) Storage Pool Disease (no d-granules) Secretion d
7、efects (granules are present but secretion is inhibited),Primary Hemostasis,Congenital Platelet Dysfunctions,21,Von Willebrand Disease Mechanism,Primary Hemostasis,d-granule,a-granule,GPIb/Ix receptor-complex,von Willebrand - Jrgens Syndrome,platelet,22,骨架系统和收缩蛋白,微管 维持血小板形态 微丝 肌动蛋白细丝及肌球蛋白粗丝 参与血小板收缩活
8、动，伪足形成和释放 膜下细丝,23,FIG 4a Cellular organiza-tion of a platelet, side cross-view,outer membrane surface connectedcanalicular system actin microtubuli dense (d-) granules alpha (a-) granules lysosomes mitochondria,FIG 4b Equatorial cross-view,Primary Hemostasis,The Platelet,24,细胞器和内容物,25,特殊的膜系统和生化组成,开放
9、管道系统（幻灯） 致密管道系统 Ca2+的储存部位（钙泵）。,26,FIG 4a Cellular organiza-tion of a platelet, side cross-view,outer membrane surface connectedcanalicular system actin microtubuli dense (d-) granules alpha (a-) granules lysosomes mitochondria,FIG 4b Equatorial cross-view,Primary Hemostasis,The Platelet,27,血小板的代谢,能量
10、代谢 有氧氧化 无氧酵解（幻灯） 膜磷脂代谢 花生四烯酸代谢（幻灯） 血小板活化因子 血小板第3因子,28,29,30,31,血小板的止血功能（幻灯）,黏附功能 聚集功能释放反应 促凝活性 血块收缩 维持内皮细胞的完整性,32,黏附功能,定义 三个基本要素 内皮下成分或异物表面（胶原、基底膜、微纤维），GPIb-IX，vWF:Ag 其他血小板膜成分 GPIIb/IIIa,GPIa-IIa, GPIc-Iia 图6 （幻灯）,33,d-granule,a -granule,GPIb-IX receptor-complex,von Willebrand - Factor,fibrinogen,GP
11、IIb-IIIa receptor-complex,Release of glycoproteins vWF fibrinogen coagulation factors,Release of ADP serotonin calcium etc,platelet,Primary Hemostasis,Normal Platelet Function,34,Von Willebrand Disease Mechanism,Primary Hemostasis,d-granule,a-granule,GPIb/Ix receptor-complex,von Willebrand - Jrgens
12、Syndrome,platelet,35,血小板聚集功能,定义 三个要素 GPIIb/IIIa ,Fg,Ca2+ 诱导剂的作用 高切变率的条件下,vWF与Fn也参与血小板聚集 图7 （幻灯）,36,37,Trombogenese,Simons ML, Decker JW. Br Heart J 1995;74:337; Katzung BG. Basic & Clinical Pharmacology, Appleton & Lange, 2001,38,Dense Granule,Platelet Aggregation,39,血小板的释放反应,定义 诱导剂（强、中、弱） 完整的骨架系统 C
13、a2+,40,41,42,血小板的促凝活性,PF3的促凝活性 （参与两个复合物形成） 接触产物生成活性（CPFA）：胶原、ADP 胶原诱导的凝血活性（CICA）：胶原 颗粒中的凝血因子释放（FV、Fg、FXI）,43,血块收缩功能,图8,44,维护血管内皮细胞的完整性,填充空隙，参与修复、再生过程 血小板止血功能可归纳于 图9,45,46,血 小 板 检 验,47,血小板生存时间测定（MDA法）,原理 MDA是血小板环氧化酶代谢的主要产物，阿司匹林不可逆抑制环氧化酶，使MDA的合成受抑，故血小板MDA含量降低。 新生成的血小板未受阿司匹林的抑制，MDA含量正常。 口服阿司匹林后，MDA含量由降
14、低逐渐升高，并恢复到服药前水平时，可以反映血小板的平均生存时间。,48,49,Arachidonic acid,Cyclo-oxygenase,Endoperoxidases,Thromboxane synthetase,TxA2,Effects of Aspirin,Inhibition,50,血小板生存时间测定,缩短 血小板破坏、消耗增多 ITP、药物免疫性血小板减少性紫癜、输血后紫癜、脾功能亢进、SLE、DIC、TTP、HUS 血栓性疾病 心肌梗死、DVT、糖尿病血管病变,51,血小板相关免疫球蛋白检测,原理 双抗体夹心法、竞争法 临床意义 增高 见于ITP、同种免疫性血小板减少性紫癜、
15、药物免疫性血小板减少性紫癜、恶性淋巴瘤、Evan综合征、SLE、慢性活动性肝炎等。,52,血小板黏附试验（玻株柱法）,原理 血液通过一定长度的玻璃珠柱后，由于血小板粘着在在玻璃珠上，以及形成的血小板聚集体被滞留在玻璃珠柱内，故通过玻璃珠柱后的血液中的血小板数量减低。比较通过玻璃柱前后血液中的血小板之差，即可以计算出血小板的黏附百分率。（幻灯）,53,54,55,血小板黏附试验（玻株柱法）,血小板黏附率（%）= 柱前血小板数柱后血小板数 100% 柱前血小板数,56,血小板黏附试验,临床意义 增高 高凝状态与血栓性疾病 降低 vWD 、巨血小板综合征、血小板无力症、尿毒症、肝硬化、MDS、服用血
16、小板抑制药物。,57,血小板聚集试验 （幻灯）,原理（透射比浊法） 平行光透过待测样品照射到与光源呈180角的光电管后变成电信号。读取PRP的透过率，待数值稳定后加入血小板聚集诱导剂，随着反应管中血小板聚集成块，PRP的透光度逐渐增高，当血小板完全聚集后，吸光度趋于恒定。光探测器接收这一光的连续变化，将其转化为电电信号。经过放大再被传送到监测器或计算机上进行处理，在记录仪中予以描记。仪器描绘这种连续变化的曲线，反映血小板聚集全过程，以此可提供反映血小板聚集速度、程度以及血小板解聚等方面的参数。,58,透射比浊法测定原理,诱导剂,59,透射比浊法测定原理,60,61,62,63,64,65,66
17、,血小板聚集试验,原理（散射比浊法） 散射比浊法检测通道由一个与660nm的光源呈90直角的光探测器组成，当向PRP中加入ADP等聚集诱导剂后，血小板发生聚集，PRP样品在变得澄清的同时，样品的散射光强度逐渐增加。仪器把这种光学变化描绘成聚集曲线。散射比浊法可以分别测定2100个血小板形成的小凝集块以及100个以上的血小板形成的大凝集块。,67,散射比浊法测定原理,诱导剂,68,散射光测定,69,血小板聚集试验（阻抗法）,原理 可用全血或PRP进行检测。检测杯中有一对铂电极，血小板在致聚剂的诱导下发生聚集时，可覆盖在铂电极表面，导致电阻抗的改变，后者的变化程度与聚集程度有关。此信号经过放大传送
18、到监测器或计算机上进行处理，将电阻抗的改变转换为聚集曲线从而计算出血小板的聚集率。,70,71,阻抗法的优点,直接使用全血 全血中的其他血细胞同时存在，从而真正模拟了体内的生理环境 保存全部血小板，避免部分血小板因体积太大而在制备PRP时丢失 对于脂血标本的检测，可以克服光学法检测时因过于浑浊而影响结果 全血电阻聚集仪与光学法相比，检测高凝状态时的血小板功能更为敏感,72,血小板聚集试验,临床意义 增高 反映血小板聚集功能增强。见于血栓前状态和血栓性疾病。 降低 反映血小板聚集功能减弱。见于血小板无力症、巨血小板综合征、储存池病、尿毒症、肝硬化、MDS等,73,血浆 -TG、PF4测定,原理
19、双抗体夹心法 临床意义 增高 反映血小板被激活及其释放反应亢进。 降低 见于先天或获得性储存池病。,74,血小板第3因子有效性测定,原理 PF3是血小板活化过程中形成的一种膜表面磷脂（PS），当PF3缺乏时，血浆复钙时间延长。本试验将正常人和病人PRP和PPP交叉配合，以白陶土作为激活剂，促使PF3形成，测定各组标本的复钙时间比较各组时差，从而得知PF3是否有缺陷。,75,血小板第3因子有效性测定,组别 患者血浆（ml） 正常血浆（ml） PRP PPP PRP PPP 一 0.1 0.1 二 0.1 0.1 三 0.1 0.1 四 0.1 0.1,76,血小板第3因子有效性测定,临床意义 降
20、低 见于先天性血小板第3因子缺乏症、血小板无力症、巨血小板综合征、肝硬化、MDS、尿毒症、DIC、AL、再生障碍性贫血以及某些药物的影响等。,77,血块收缩试验,原理 在PRP中加入Ca2+或凝血酶，使血浆凝固形成血浆凝块。血小板收缩蛋白使血小板伸出伪足抛于纤维蛋白索上，当血小板向心性收缩时，使纤维蛋白网眼缩小、血清析出。测量析出的血清体积可以反映血小板血块收缩的能力。,78,血浆血栓烷B2（TXB2）测定,原理 竞争法 临床意义 增高 血栓前状态与血栓性疾病 降低 见于环氧化酶或TX合成酶缺乏症、服用抑制环氧化酶或TX合成酶的药物等。,79,血小板膜糖蛋白检测,原理 放射免疫分析、流式细胞术
21、 临床意义 GPIb缺乏 见于巨血小板综合征 GPIIb/IIIa缺乏 见于血小板无力症,80,PFA-100 血小板功能测定仪,溶液贮藏器,按钮,屏幕,打印机,圆盘传送带,暗盒,测试暗盒,81,In Vivo Haemostasis,PFA-100,capillary 200m,aperture 150m,epinephrine or ADP,platelet,vWF,erythrocyte,FLOW,- 40 mbar,collagen,membrane,PFA-100 Test Principle,lumen,fibrinogen,platelet,collagen fibrils,er
22、ythrocyte,endothelial cell,vWF,82,Test Cartridge before and after a test,before,after,aperture 150 M ,cup,platelet,aggregate,Filter + epinephrine or ADP,flash membrane,800 l blood,capillary 200 M,collagen,PFA-100 Test Principle,83,PFA-100 Test Principle,Occlusion Process,84,PFA-100 REV. 2.00S/N: 00370 14/07/9714:01 ID#:23456.17 Test Type: Collagen/EPI SAMPLE A:110 SEC,Final Result and Print-out,Closure time in seconds indi- cating “Primary-Hemostasis- Capacity (PHC)”,PFA-100 Test Principle,85,Method Simplicity,PFA-100 Test Advantages and Benefit,