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1、1.生物产品的分离包括 Removal of insolubles，Isolation，Purification 和 Polishing。 2.发酵液常用的固液分离方法有 离心 和 过滤 等。3. 离心设备从形式上可分为 管式，套筒式，碟片式 等型式。4. 膜分离过程中所使用的膜，依据其膜特性（孔径）不同可分为 微滤膜，超滤 膜，纳滤膜 和 反渗透膜；5. 多糖基离子交换剂包括 葡聚糖离子交换剂 和 离子交换纤维素 两大类。6. 工业上常用的超滤装置有 板式，管式，螺旋卷式 和 中空纤维式7. 影响吸附的主要因素有 吸附剂的性质，吸附质的性质，温度，溶液 pH 值， 盐浓度 ，吸附物浓度 和
2、吸附剂用量8. 离子交换树脂由 载体，活性基团 和 可交换离子 组成。9. 电泳用凝胶制备时，过硫酸铵的作用是 引发剂；甲叉双丙烯酰胺的作用是 交 联剂；TEMED 的作用是 增速剂；10. 影响盐析的因素有 溶质种类，溶质浓度，pH 值 和 温度；11. 在结晶操作中，工业上常用的起晶方法有 自然起晶法 ， 刺激起晶法 和 晶 种起晶法；12. 简单地说，离子交换过程实际上只有 外部扩散 ，内部扩散 和 化学交换反 应 三个步骤；13. 在生物制品进行吸附或离子交换分离时，通常遵循 Langmuir 吸附方程，其 形式为 Qq C/(k+C)014.反相高效液相色谱的固定相是 非极性 的，而
3、流动相是 极性 的；常用的固定相有 C 和 C ；常用的流动相有 甲醇 和 乙睛；18 815. 超临界流体的特点是与气体有相似的 粘度（扩散系数） ，与液体有相似的 密度；16. 离子交换树脂的合成方法有 共聚（加聚） 和 均聚（缩聚）两大类；17. 常用的化学细胞破碎方法有 渗透压冲击，增溶法，脂溶法，酶消化法 和 碱 处理法；18. 等电聚焦电泳法分离不同蛋白质的原理是依据其等 电点（pI）的不同；19. 离子交换分离操作中，常用的洗脱方法有 pH 梯度 和 离子强度（盐）梯度； 20.晶体质量主要指 晶体大小，晶体性状 和 晶体纯度 三个方面；4. 亲和吸附原理包括 吸附介质的制备，吸
4、附 和 洗脱 三步。11. 根据分离机理的不同，色谱法可分为 吸附色谱，分配色谱，离子交换色谱 和 凝胶色谱。12. 盐析实验中用于关联溶质溶解度与盐浓度的 Cohn 方程为 lgSKsI；当 保持体系温度、pH 值不变，仅改变溶液离子强度进行的盐析操作 称为 K 盐析s法；当 保持离子强度不变，改变温度、pH 值进行的盐析操作 称为盐析法。 13.过饱和溶液的形成方式有： 热饱和溶液冷却，蒸发溶剂，真空蒸发冷却，化 学反应结晶 和 盐析。14. 蛋白质分离常用的色谱法有 金属螯合色谱 ， 共价色谱 ， 离子交换色谱 和 疏水作用色谱。17. SDS PAGE 电泳制胶时，加入十二烷基磺酸钠（
5、 SDS）的目的是消除各种待 分离蛋白的 电荷 和 分子形状 差异，而将 分子量 作为分离的依据。19. 高效液相色谱分离方法中，液-液色谱是以 液体 作为流动相；以 固定在固 相载体表面的液体 作为固定相。19. 常用的蛋白质沉析方法有 盐析，等电点沉析 和 有机溶剂沉析。1、 请结合图示简述凝胶排阻色谱（分子筛）的分离原理答：凝胶排阻色谱的分离介质（填料）具有均匀的网格结构，其分离原理是具有不同分子量的溶质分子，在流经柱床是，由于大分子难以进入凝胶内部，而从凝胶颗粒之间流出，保留时间短；而小分子溶质可以进入凝胶内部，由于凝胶多孔结构的阻滞作用，流经体积变大，保留时间延长。这样，分子量不同的
6、溶质分子得以分离。2、 绘制结晶过程中饱和曲线和过饱和曲线图，并简述其意义答：S-S 曲线为饱和温度曲线，在其下方为稳定区，在该区域溶液为不饱和溶液，不会自发结晶；T-T 曲线为过饱和温度曲线，在其上方为不稳定区，能够自发形成结晶；S-S 曲线和 T-T 曲线之间为亚稳定区，在该区域，溶液为过饱和溶液，但若无晶种存在，也不能自发形成晶体；3、何谓亲和吸附，有何特点？简述亲和免疫层析介质的制备过程答：亲和吸附是吸附单元操作的一种，它是利用亲和吸附剂与目标物之间的特殊的化学 作用实现的高效分离手段。亲和吸附剂的组成包括：惰性载体、手臂链、特异性亲和配 基。亲和吸附的特点是高效、简便、适用范围广、分
7、离速度快、条件温和，但载体制备难度 大，通用性差，成本较高。层析介质的制备过程包括：抗体的制备、抗体提取、载体活化，手臂链的连接、抗体的 连接等步骤。4、简述结晶过程中晶体形成的条件答：结晶过程包括过饱和溶液的形成、晶核的形成及晶体的生长三个过程，其中溶液达 到过饱和状态是结晶的前提，过饱和度是结晶的推动力。5、比较常规聚丙稀酰胺凝胶电泳与 SDS PAGE 的分离原理答：常规聚丙烯酰胺凝胶电泳和 SDS-PAGE 均为凝胶电泳的一种。聚丙烯酰胺凝胶电泳分离蛋白质是依据其电荷（性质、荷电量）、分子形状和分子大小 （分子量）差异实现分离的；SDS-PAGE 由于加入了 SDS 和强还原剂（DTT
8、 等），破坏了蛋白质分子的高级（二级、 三级、四级）结构，并与蛋白质形成荷大量负电荷的聚合物，消除了不同蛋白质分子电 荷及分子形状差异，而仅将分子量差异作为分离依据，常用于测定未知蛋白质的亚基分 子量。1、 何谓超临界流体萃取，并简述其分离原理答：超临界流体萃取是利用超临界流体具有的类似气体的扩散系数，以及类似液体的密 度（溶解能力强）的特点，利用超临界流体为萃取剂进行的萃取单元操作。其特点是安 全、无毒、产品分离简单，但设备投资较大。2、 简述 SDS PAGE 电泳测定未知蛋白分子量的方法333n +1n +1330333229答：SDS-PAGE 是凝胶电泳的一种，其分离原理是基于不同分
9、子量的蛋白质（亚基）在 电场中的迁移率不同，因此利用该技术测定未知蛋白质（亚基）的分子量是十分方便的， 具体的方法是利用标准分子量 MARK，与样品一同电泳，染色后根据标准分子 MARK 中已知分子量蛋白质的迁移率与其分子量的对数值作图，可得一标准曲线并拟合方程， 再结合未知蛋白质的迁移率即可计算得到大致的分子量。3、 何谓等电点沉析法答：蛋白质再等电点下的溶解度最低，根据这一性质，再溶液中加入一定比例的有机溶 剂，破坏蛋白质表面的水化层和双电层，降低分子间斥力，加强了蛋白质分子间的疏水 相互作用，使得蛋白质分子得以聚集成团沉淀下来。1、用醋酸戊酯从发酵液中萃取青霉素，已知发酵液中青霉素浓度为
10、 0.2Kg/m ， 萃取平衡常数为 K=40，处理能力为 H=0.5m /h，萃取溶剂流量为 L=0.03m /h， 若要产品收率达 96%，试计算理论上所需萃取级数？解：萃取系数E =kL 400.03= =2.4H 0.5根据P =E -EE -1=96%，得 n42、应用离子交换树脂作为吸附剂分离抗菌素，饱和吸附量为 0.06 Kg（抗菌素） /Kg（干树脂）；当抗菌素浓度为 0.02Kg/m 时，吸附量为 0.04Kg/Kg；假定此吸 附属于 Langmuir 等温吸附，求料液含抗菌素 0.2Kg/m 时的吸附量解：根据 Langmuir 吸附等温式q =q C 0.060.02=
11、=0.04, k =0.01 K +C k +0.02则当料液含抗菌素 0.2Kg/m 时的吸附量q =0.06 0.20.01 +0.2= 0.057 kg / kg3、一种耐盐细胞其能积累细胞内低分子量卤化物，适应高渗透压，能在含有 0.32mol/LNaCl, 0.02mol/LMgCl , 0.015mol/LCaCl , 0.01mol/LFeCl 的培养基2 2 3这培养，当其从含盐量高的培养基中转移至清水中，在数分钟内能将胞内产物 释放出来，试估计细胞膜所受渗透压的大小。（设操作温度为 25）解：细胞所受渗透压P -P -RT 8.314 298 (0.32 2 0.02 3 0.015 3 out in Ci0.014)101.94106Pa1. 用管式离心机从发酵液中分离大肠杆菌细胞，已知离心管的内径为 0.15m， 高 0.8m，转速为 18,000 r/min，生产能力为 Q=0.3m /h。求细胞的离心沉降速 度 V。解：vg=Qg2plRw2=(0.3 / 3600 ) 9.812p0.8 0.15 (18000 2p / 60)22.03810 m/s