《外科学(烧伤与整形外科)专业毕业论文[精品论文]以人脐带间充质干细胞为种子细胞构建组织工程脂肪的实验研究.doc》由会员分享，可在线阅读，更多相关《外科学(烧伤与整形外科)专业毕业论文[精品论文]以人脐带间充质干细胞为种子细胞构建组织工程脂肪的实验研究.doc（41页珍藏版）》请在三一文库上搜索。
1、外科学(烧伤与整形外科)专业毕业论文 精品论文 以人脐带间充质干细胞为种子细胞构建组织工程脂肪的实验研究关键词：人脐带间充质干细胞 蚕丝素多孔支架 组织工程 脂肪摘要：目的：1.探讨人脐带间充质干细胞(human Umhilical Cord Mesenchvmal Stem Cells hUCMSCs)的体外分离、纯化及培养条件，并对其生物学特性进行研究；2.观察hUCMSCs冻存复苏后向脂肪细胞定向分化的能力；3.观察蚕丝素多孔支架对hUCMSCs吸附作用及支架对hUCMSCs形态、功能及活性的影响，探讨蚕丝素多孔支架与hUCMSCs构建组织工程脂肪的可行性。 方法：1.将剔除动静脉的新鲜
2、人脐带组织切成小块培养，得到贴壁细胞，倒置显微镜观察细胞形态，细胞计数绘制细胞生长曲线；流式细胞仪测定细胞表面标记；化学染色及RT-PCR检测其体外诱导成脂和成骨分化的能力；RT-PCR检测干细胞特异性标志基因OCT-4；2.将第1代的hUCMSCs采用梯度冷冻技术冻存5个月，复苏后培养至第12代时，加入成脂诱导剂培养。当诱导至21天时行油红O染色，7天及14天时用RT-PCR技术分别检测成脂转化基因过氧化物酶增殖剂受体(PPAR-2)和脂蛋白酯酶(LPL)；3.将hUCMSCs制成细胞悬液接种于蚕丝素多孔支架，荧光倒置相差显微镜、扫描电镜和四甲基偶氮唑蓝(MTT)法观察其在支架上的吸附和生长
3、情况，将细胞-支架复合物成脂诱导6周后移植于大鼠体内，观察细胞在支架上成脂情况。 结果：1.体外培养4-6天后，有细胞从组织块中游出；细胞传代培养至第10代，无明显的形态和增殖能力改变；细胞阳性表达CD13、CD44，而CD14、CD34、HLA-DR表达呈阴性。体外诱导实验证实，该细胞具有成脂肪和成骨分化的能力。RT-PCR显示其表达干细胞特异性因子OCT-4；2.hUCMSCs冻存复苏后，活细胞约为86，流式细胞仪分析这些细胞表达CD13、CD44和CD71等MSCs标志物，不表达CD14、CD34和HLA-DR表面抗原。复苏细胞在成脂诱导剂的作用下，细胞中有脂滴产生，通过油红O染色显示细
4、胞核周围有脂滴聚集，通过RT-PCR检测有LPL及PPAR-2 mRNA的表达。3.细胞与支架复合培养1-2天后可见hUCMSCs与蚕丝素多孔支架充分附着，培养5-7天细胞生长增殖十分活跃，10天左右时，蚕丝支架孔中hUCMSCs成片状融合。荧光倒置相差显微镜和扫描电镜见细胞与支架黏附良好并有大量基质分泌，且活性指标与正常培养的hUCMSCs比较无统计学意义(P>0.05)，细胞-支架复合物成脂诱导4周时，已有成脂样细胞生成，并与蚕丝素蛋白多孔支架牢固粘附，成脂诱导6周，见大量成脂样细胞生成；将成脂诱导6周的细胞-支架复合物植入大鼠体内植入4周后，可见有脂肪形成，8周后支架材料继
5、续降解，脂肪组织形成明显，对照组支架材料逐渐降解，未见脂肪组织形成。 结论：1. hUCMSCs能在体外培养、扩增并且具有和骨髓间充质干细胞相似的生物学特性；2.将hUCMSCs冻存复苏后培养至第12代，仍具有向脂肪细胞分化的潜能，可作为脂肪组织工程的种子细胞来源；3.蚕丝素多孔支架对hUCMSCs具有良好的吸附作用，并能维持其正常形态、功能及活性，蚕丝素多孔支架是hUCMSCs三维立体培养时良好的天然支架，该支架是一种理想的生物可降解支架，hUCMSCs接种于蚕丝素多孔支架可构建出组织工程脂肪。正文内容 目的：1.探讨人脐带间充质干细胞(human Umhilical Cord Mesenc
6、hvmal Stem Cells hUCMSCs)的体外分离、纯化及培养条件，并对其生物学特性进行研究；2.观察hUCMSCs冻存复苏后向脂肪细胞定向分化的能力；3.观察蚕丝素多孔支架对hUCMSCs吸附作用及支架对hUCMSCs形态、功能及活性的影响，探讨蚕丝素多孔支架与hUCMSCs构建组织工程脂肪的可行性。 方法：1.将剔除动静脉的新鲜人脐带组织切成小块培养，得到贴壁细胞，倒置显微镜观察细胞形态，细胞计数绘制细胞生长曲线；流式细胞仪测定细胞表面标记；化学染色及RT-PCR检测其体外诱导成脂和成骨分化的能力；RT-PCR检测干细胞特异性标志基因OCT-4；2.将第1代的hUCMSCs采用梯
7、度冷冻技术冻存5个月，复苏后培养至第12代时，加入成脂诱导剂培养。当诱导至21天时行油红O染色，7天及14天时用RT-PCR技术分别检测成脂转化基因过氧化物酶增殖剂受体(PPAR-2)和脂蛋白酯酶(LPL)；3.将hUCMSCs制成细胞悬液接种于蚕丝素多孔支架，荧光倒置相差显微镜、扫描电镜和四甲基偶氮唑蓝(MTT)法观察其在支架上的吸附和生长情况，将细胞-支架复合物成脂诱导6周后移植于大鼠体内，观察细胞在支架上成脂情况。 结果：1.体外培养4-6天后，有细胞从组织块中游出；细胞传代培养至第10代，无明显的形态和增殖能力改变；细胞阳性表达CD13、CD44，而CD14、CD34、HLA-DR表达
8、呈阴性。体外诱导实验证实，该细胞具有成脂肪和成骨分化的能力。RT-PCR显示其表达干细胞特异性因子OCT-4；2.hUCMSCs冻存复苏后，活细胞约为86，流式细胞仪分析这些细胞表达CD13、CD44和CD71等MSCs标志物，不表达CD14、CD34和HLA-DR表面抗原。复苏细胞在成脂诱导剂的作用下，细胞中有脂滴产生，通过油红O染色显示细胞核周围有脂滴聚集，通过RT-PCR检测有LPL及PPAR-2 mRNA的表达。3.细胞与支架复合培养1-2天后可见hUCMSCs与蚕丝素多孔支架充分附着，培养5-7天细胞生长增殖十分活跃，10天左右时，蚕丝支架孔中hUCMSCs成片状融合。荧光倒置相差显
9、微镜和扫描电镜见细胞与支架黏附良好并有大量基质分泌，且活性指标与正常培养的hUCMSCs比较无统计学意义(P>0.05)，细胞-支架复合物成脂诱导4周时，已有成脂样细胞生成，并与蚕丝素蛋白多孔支架牢固粘附，成脂诱导6周，见大量成脂样细胞生成；将成脂诱导6周的细胞-支架复合物植入大鼠体内植入4周后，可见有脂肪形成，8周后支架材料继续降解，脂肪组织形成明显，对照组支架材料逐渐降解，未见脂肪组织形成。 结论：1. hUCMSCs能在体外培养、扩增并且具有和骨髓间充质干细胞相似的生物学特性；2.将hUCMSCs冻存复苏后培养至第12代，仍具有向脂肪细胞分化的潜能，可作为脂肪组织工程的种子
10、细胞来源；3.蚕丝素多孔支架对hUCMSCs具有良好的吸附作用，并能维持其正常形态、功能及活性，蚕丝素多孔支架是hUCMSCs三维立体培养时良好的天然支架，该支架是一种理想的生物可降解支架，hUCMSCs接种于蚕丝素多孔支架可构建出组织工程脂肪。目的：1.探讨人脐带间充质干细胞(human Umhilical Cord Mesenchvmal Stem Cells hUCMSCs)的体外分离、纯化及培养条件，并对其生物学特性进行研究；2.观察hUCMSCs冻存复苏后向脂肪细胞定向分化的能力；3.观察蚕丝素多孔支架对hUCMSCs吸附作用及支架对hUCMSCs形态、功能及活性的影响，探讨蚕丝素多
11、孔支架与hUCMSCs构建组织工程脂肪的可行性。 方法：1.将剔除动静脉的新鲜人脐带组织切成小块培养，得到贴壁细胞，倒置显微镜观察细胞形态，细胞计数绘制细胞生长曲线；流式细胞仪测定细胞表面标记；化学染色及RT-PCR检测其体外诱导成脂和成骨分化的能力；RT-PCR检测干细胞特异性标志基因OCT-4；2.将第1代的hUCMSCs采用梯度冷冻技术冻存5个月，复苏后培养至第12代时，加入成脂诱导剂培养。当诱导至21天时行油红O染色，7天及14天时用RT-PCR技术分别检测成脂转化基因过氧化物酶增殖剂受体(PPAR-2)和脂蛋白酯酶(LPL)；3.将hUCMSCs制成细胞悬液接种于蚕丝素多孔支架，荧光
12、倒置相差显微镜、扫描电镜和四甲基偶氮唑蓝(MTT)法观察其在支架上的吸附和生长情况，将细胞-支架复合物成脂诱导6周后移植于大鼠体内，观察细胞在支架上成脂情况。 结果：1.体外培养4-6天后，有细胞从组织块中游出；细胞传代培养至第10代，无明显的形态和增殖能力改变；细胞阳性表达CD13、CD44，而CD14、CD34、HLA-DR表达呈阴性。体外诱导实验证实，该细胞具有成脂肪和成骨分化的能力。RT-PCR显示其表达干细胞特异性因子OCT-4；2.hUCMSCs冻存复苏后，活细胞约为86，流式细胞仪分析这些细胞表达CD13、CD44和CD71等MSCs标志物，不表达CD14、CD34和HLA-DR
13、表面抗原。复苏细胞在成脂诱导剂的作用下，细胞中有脂滴产生，通过油红O染色显示细胞核周围有脂滴聚集，通过RT-PCR检测有LPL及PPAR-2 mRNA的表达。3.细胞与支架复合培养1-2天后可见hUCMSCs与蚕丝素多孔支架充分附着，培养5-7天细胞生长增殖十分活跃，10天左右时，蚕丝支架孔中hUCMSCs成片状融合。荧光倒置相差显微镜和扫描电镜见细胞与支架黏附良好并有大量基质分泌，且活性指标与正常培养的hUCMSCs比较无统计学意义(P>0.05)，细胞-支架复合物成脂诱导4周时，已有成脂样细胞生成，并与蚕丝素蛋白多孔支架牢固粘附，成脂诱导6周，见大量成脂样细胞生成；将成脂诱导
14、6周的细胞-支架复合物植入大鼠体内植入4周后，可见有脂肪形成，8周后支架材料继续降解，脂肪组织形成明显，对照组支架材料逐渐降解，未见脂肪组织形成。 结论：1. hUCMSCs能在体外培养、扩增并且具有和骨髓间充质干细胞相似的生物学特性；2.将hUCMSCs冻存复苏后培养至第12代，仍具有向脂肪细胞分化的潜能，可作为脂肪组织工程的种子细胞来源；3.蚕丝素多孔支架对hUCMSCs具有良好的吸附作用，并能维持其正常形态、功能及活性，蚕丝素多孔支架是hUCMSCs三维立体培养时良好的天然支架，该支架是一种理想的生物可降解支架，hUCMSCs接种于蚕丝素多孔支架可构建出组织工程脂肪。目的：1.探讨人脐带
15、间充质干细胞(human Umhilical Cord Mesenchvmal Stem Cells hUCMSCs)的体外分离、纯化及培养条件，并对其生物学特性进行研究；2.观察hUCMSCs冻存复苏后向脂肪细胞定向分化的能力；3.观察蚕丝素多孔支架对hUCMSCs吸附作用及支架对hUCMSCs形态、功能及活性的影响，探讨蚕丝素多孔支架与hUCMSCs构建组织工程脂肪的可行性。 方法：1.将剔除动静脉的新鲜人脐带组织切成小块培养，得到贴壁细胞，倒置显微镜观察细胞形态，细胞计数绘制细胞生长曲线；流式细胞仪测定细胞表面标记；化学染色及RT-PCR检测其体外诱导成脂和成骨分化的能力；RT-PCR检
16、测干细胞特异性标志基因OCT-4；2.将第1代的hUCMSCs采用梯度冷冻技术冻存5个月，复苏后培养至第12代时，加入成脂诱导剂培养。当诱导至21天时行油红O染色，7天及14天时用RT-PCR技术分别检测成脂转化基因过氧化物酶增殖剂受体(PPAR-2)和脂蛋白酯酶(LPL)；3.将hUCMSCs制成细胞悬液接种于蚕丝素多孔支架，荧光倒置相差显微镜、扫描电镜和四甲基偶氮唑蓝(MTT)法观察其在支架上的吸附和生长情况，将细胞-支架复合物成脂诱导6周后移植于大鼠体内，观察细胞在支架上成脂情况。 结果：1.体外培养4-6天后，有细胞从组织块中游出；细胞传代培养至第10代，无明显的形态和增殖能力改变；细
17、胞阳性表达CD13、CD44，而CD14、CD34、HLA-DR表达呈阴性。体外诱导实验证实，该细胞具有成脂肪和成骨分化的能力。RT-PCR显示其表达干细胞特异性因子OCT-4；2.hUCMSCs冻存复苏后，活细胞约为86，流式细胞仪分析这些细胞表达CD13、CD44和CD71等MSCs标志物，不表达CD14、CD34和HLA-DR表面抗原。复苏细胞在成脂诱导剂的作用下，细胞中有脂滴产生，通过油红O染色显示细胞核周围有脂滴聚集，通过RT-PCR检测有LPL及PPAR-2 mRNA的表达。3.细胞与支架复合培养1-2天后可见hUCMSCs与蚕丝素多孔支架充分附着，培养5-7天细胞生长增殖十分活跃
18、，10天左右时，蚕丝支架孔中hUCMSCs成片状融合。荧光倒置相差显微镜和扫描电镜见细胞与支架黏附良好并有大量基质分泌，且活性指标与正常培养的hUCMSCs比较无统计学意义(P>0.05)，细胞-支架复合物成脂诱导4周时，已有成脂样细胞生成，并与蚕丝素蛋白多孔支架牢固粘附，成脂诱导6周，见大量成脂样细胞生成；将成脂诱导6周的细胞-支架复合物植入大鼠体内植入4周后，可见有脂肪形成，8周后支架材料继续降解，脂肪组织形成明显，对照组支架材料逐渐降解，未见脂肪组织形成。 结论：1. hUCMSCs能在体外培养、扩增并且具有和骨髓间充质干细胞相似的生物学特性；2.将hUCMSCs冻存复苏后
19、培养至第12代，仍具有向脂肪细胞分化的潜能，可作为脂肪组织工程的种子细胞来源；3.蚕丝素多孔支架对hUCMSCs具有良好的吸附作用，并能维持其正常形态、功能及活性，蚕丝素多孔支架是hUCMSCs三维立体培养时良好的天然支架，该支架是一种理想的生物可降解支架，hUCMSCs接种于蚕丝素多孔支架可构建出组织工程脂肪。目的：1.探讨人脐带间充质干细胞(human Umhilical Cord Mesenchvmal Stem Cells hUCMSCs)的体外分离、纯化及培养条件，并对其生物学特性进行研究；2.观察hUCMSCs冻存复苏后向脂肪细胞定向分化的能力；3.观察蚕丝素多孔支架对hUCMSC
20、s吸附作用及支架对hUCMSCs形态、功能及活性的影响，探讨蚕丝素多孔支架与hUCMSCs构建组织工程脂肪的可行性。 方法：1.将剔除动静脉的新鲜人脐带组织切成小块培养，得到贴壁细胞，倒置显微镜观察细胞形态，细胞计数绘制细胞生长曲线；流式细胞仪测定细胞表面标记；化学染色及RT-PCR检测其体外诱导成脂和成骨分化的能力；RT-PCR检测干细胞特异性标志基因OCT-4；2.将第1代的hUCMSCs采用梯度冷冻技术冻存5个月，复苏后培养至第12代时，加入成脂诱导剂培养。当诱导至21天时行油红O染色，7天及14天时用RT-PCR技术分别检测成脂转化基因过氧化物酶增殖剂受体(PPAR-2)和脂蛋白酯酶(
21、LPL)；3.将hUCMSCs制成细胞悬液接种于蚕丝素多孔支架，荧光倒置相差显微镜、扫描电镜和四甲基偶氮唑蓝(MTT)法观察其在支架上的吸附和生长情况，将细胞-支架复合物成脂诱导6周后移植于大鼠体内，观察细胞在支架上成脂情况。 结果：1.体外培养4-6天后，有细胞从组织块中游出；细胞传代培养至第10代，无明显的形态和增殖能力改变；细胞阳性表达CD13、CD44，而CD14、CD34、HLA-DR表达呈阴性。体外诱导实验证实，该细胞具有成脂肪和成骨分化的能力。RT-PCR显示其表达干细胞特异性因子OCT-4；2.hUCMSCs冻存复苏后，活细胞约为86，流式细胞仪分析这些细胞表达CD13、CD4
22、4和CD71等MSCs标志物，不表达CD14、CD34和HLA-DR表面抗原。复苏细胞在成脂诱导剂的作用下，细胞中有脂滴产生，通过油红O染色显示细胞核周围有脂滴聚集，通过RT-PCR检测有LPL及PPAR-2 mRNA的表达。3.细胞与支架复合培养1-2天后可见hUCMSCs与蚕丝素多孔支架充分附着，培养5-7天细胞生长增殖十分活跃，10天左右时，蚕丝支架孔中hUCMSCs成片状融合。荧光倒置相差显微镜和扫描电镜见细胞与支架黏附良好并有大量基质分泌，且活性指标与正常培养的hUCMSCs比较无统计学意义(P>0.05)，细胞-支架复合物成脂诱导4周时，已有成脂样细胞生成，并与蚕丝素
23、蛋白多孔支架牢固粘附，成脂诱导6周，见大量成脂样细胞生成；将成脂诱导6周的细胞-支架复合物植入大鼠体内植入4周后，可见有脂肪形成，8周后支架材料继续降解，脂肪组织形成明显，对照组支架材料逐渐降解，未见脂肪组织形成。 结论：1. hUCMSCs能在体外培养、扩增并且具有和骨髓间充质干细胞相似的生物学特性；2.将hUCMSCs冻存复苏后培养至第12代，仍具有向脂肪细胞分化的潜能，可作为脂肪组织工程的种子细胞来源；3.蚕丝素多孔支架对hUCMSCs具有良好的吸附作用，并能维持其正常形态、功能及活性，蚕丝素多孔支架是hUCMSCs三维立体培养时良好的天然支架，该支架是一种理想的生物可降解支架，hUCM
24、SCs接种于蚕丝素多孔支架可构建出组织工程脂肪。目的：1.探讨人脐带间充质干细胞(human Umhilical Cord Mesenchvmal Stem Cells hUCMSCs)的体外分离、纯化及培养条件，并对其生物学特性进行研究；2.观察hUCMSCs冻存复苏后向脂肪细胞定向分化的能力；3.观察蚕丝素多孔支架对hUCMSCs吸附作用及支架对hUCMSCs形态、功能及活性的影响，探讨蚕丝素多孔支架与hUCMSCs构建组织工程脂肪的可行性。 方法：1.将剔除动静脉的新鲜人脐带组织切成小块培养，得到贴壁细胞，倒置显微镜观察细胞形态，细胞计数绘制细胞生长曲线；流式细胞仪测定细胞表面标记；化学
25、染色及RT-PCR检测其体外诱导成脂和成骨分化的能力；RT-PCR检测干细胞特异性标志基因OCT-4；2.将第1代的hUCMSCs采用梯度冷冻技术冻存5个月，复苏后培养至第12代时，加入成脂诱导剂培养。当诱导至21天时行油红O染色，7天及14天时用RT-PCR技术分别检测成脂转化基因过氧化物酶增殖剂受体(PPAR-2)和脂蛋白酯酶(LPL)；3.将hUCMSCs制成细胞悬液接种于蚕丝素多孔支架，荧光倒置相差显微镜、扫描电镜和四甲基偶氮唑蓝(MTT)法观察其在支架上的吸附和生长情况，将细胞-支架复合物成脂诱导6周后移植于大鼠体内，观察细胞在支架上成脂情况。 结果：1.体外培养4-6天后，有细胞从
26、组织块中游出；细胞传代培养至第10代，无明显的形态和增殖能力改变；细胞阳性表达CD13、CD44，而CD14、CD34、HLA-DR表达呈阴性。体外诱导实验证实，该细胞具有成脂肪和成骨分化的能力。RT-PCR显示其表达干细胞特异性因子OCT-4；2.hUCMSCs冻存复苏后，活细胞约为86，流式细胞仪分析这些细胞表达CD13、CD44和CD71等MSCs标志物，不表达CD14、CD34和HLA-DR表面抗原。复苏细胞在成脂诱导剂的作用下，细胞中有脂滴产生，通过油红O染色显示细胞核周围有脂滴聚集，通过RT-PCR检测有LPL及PPAR-2 mRNA的表达。3.细胞与支架复合培养1-2天后可见hU
27、CMSCs与蚕丝素多孔支架充分附着，培养5-7天细胞生长增殖十分活跃，10天左右时，蚕丝支架孔中hUCMSCs成片状融合。荧光倒置相差显微镜和扫描电镜见细胞与支架黏附良好并有大量基质分泌，且活性指标与正常培养的hUCMSCs比较无统计学意义(P>0.05)，细胞-支架复合物成脂诱导4周时，已有成脂样细胞生成，并与蚕丝素蛋白多孔支架牢固粘附，成脂诱导6周，见大量成脂样细胞生成；将成脂诱导6周的细胞-支架复合物植入大鼠体内植入4周后，可见有脂肪形成，8周后支架材料继续降解，脂肪组织形成明显，对照组支架材料逐渐降解，未见脂肪组织形成。 结论：1. hUCMSCs能在体外培养、扩增并且具
28、有和骨髓间充质干细胞相似的生物学特性；2.将hUCMSCs冻存复苏后培养至第12代，仍具有向脂肪细胞分化的潜能，可作为脂肪组织工程的种子细胞来源；3.蚕丝素多孔支架对hUCMSCs具有良好的吸附作用，并能维持其正常形态、功能及活性，蚕丝素多孔支架是hUCMSCs三维立体培养时良好的天然支架，该支架是一种理想的生物可降解支架，hUCMSCs接种于蚕丝素多孔支架可构建出组织工程脂肪。目的：1.探讨人脐带间充质干细胞(human Umhilical Cord Mesenchvmal Stem Cells hUCMSCs)的体外分离、纯化及培养条件，并对其生物学特性进行研究；2.观察hUCMSCs冻存
29、复苏后向脂肪细胞定向分化的能力；3.观察蚕丝素多孔支架对hUCMSCs吸附作用及支架对hUCMSCs形态、功能及活性的影响，探讨蚕丝素多孔支架与hUCMSCs构建组织工程脂肪的可行性。 方法：1.将剔除动静脉的新鲜人脐带组织切成小块培养，得到贴壁细胞，倒置显微镜观察细胞形态，细胞计数绘制细胞生长曲线；流式细胞仪测定细胞表面标记；化学染色及RT-PCR检测其体外诱导成脂和成骨分化的能力；RT-PCR检测干细胞特异性标志基因OCT-4；2.将第1代的hUCMSCs采用梯度冷冻技术冻存5个月，复苏后培养至第12代时，加入成脂诱导剂培养。当诱导至21天时行油红O染色，7天及14天时用RT-PCR技术分
30、别检测成脂转化基因过氧化物酶增殖剂受体(PPAR-2)和脂蛋白酯酶(LPL)；3.将hUCMSCs制成细胞悬液接种于蚕丝素多孔支架，荧光倒置相差显微镜、扫描电镜和四甲基偶氮唑蓝(MTT)法观察其在支架上的吸附和生长情况，将细胞-支架复合物成脂诱导6周后移植于大鼠体内，观察细胞在支架上成脂情况。 结果：1.体外培养4-6天后，有细胞从组织块中游出；细胞传代培养至第10代，无明显的形态和增殖能力改变；细胞阳性表达CD13、CD44，而CD14、CD34、HLA-DR表达呈阴性。体外诱导实验证实，该细胞具有成脂肪和成骨分化的能力。RT-PCR显示其表达干细胞特异性因子OCT-4；2.hUCMSCs冻
31、存复苏后，活细胞约为86，流式细胞仪分析这些细胞表达CD13、CD44和CD71等MSCs标志物，不表达CD14、CD34和HLA-DR表面抗原。复苏细胞在成脂诱导剂的作用下，细胞中有脂滴产生，通过油红O染色显示细胞核周围有脂滴聚集，通过RT-PCR检测有LPL及PPAR-2 mRNA的表达。3.细胞与支架复合培养1-2天后可见hUCMSCs与蚕丝素多孔支架充分附着，培养5-7天细胞生长增殖十分活跃，10天左右时，蚕丝支架孔中hUCMSCs成片状融合。荧光倒置相差显微镜和扫描电镜见细胞与支架黏附良好并有大量基质分泌，且活性指标与正常培养的hUCMSCs比较无统计学意义(P>0.0
32、5)，细胞-支架复合物成脂诱导4周时，已有成脂样细胞生成，并与蚕丝素蛋白多孔支架牢固粘附，成脂诱导6周，见大量成脂样细胞生成；将成脂诱导6周的细胞-支架复合物植入大鼠体内植入4周后，可见有脂肪形成，8周后支架材料继续降解，脂肪组织形成明显，对照组支架材料逐渐降解，未见脂肪组织形成。 结论：1. hUCMSCs能在体外培养、扩增并且具有和骨髓间充质干细胞相似的生物学特性；2.将hUCMSCs冻存复苏后培养至第12代，仍具有向脂肪细胞分化的潜能，可作为脂肪组织工程的种子细胞来源；3.蚕丝素多孔支架对hUCMSCs具有良好的吸附作用，并能维持其正常形态、功能及活性，蚕丝素多孔支架是hUCMSCs三维
33、立体培养时良好的天然支架，该支架是一种理想的生物可降解支架，hUCMSCs接种于蚕丝素多孔支架可构建出组织工程脂肪。目的：1.探讨人脐带间充质干细胞(human Umhilical Cord Mesenchvmal Stem Cells hUCMSCs)的体外分离、纯化及培养条件，并对其生物学特性进行研究；2.观察hUCMSCs冻存复苏后向脂肪细胞定向分化的能力；3.观察蚕丝素多孔支架对hUCMSCs吸附作用及支架对hUCMSCs形态、功能及活性的影响，探讨蚕丝素多孔支架与hUCMSCs构建组织工程脂肪的可行性。 方法：1.将剔除动静脉的新鲜人脐带组织切成小块培养，得到贴壁细胞，倒置显微镜观察
34、细胞形态，细胞计数绘制细胞生长曲线；流式细胞仪测定细胞表面标记；化学染色及RT-PCR检测其体外诱导成脂和成骨分化的能力；RT-PCR检测干细胞特异性标志基因OCT-4；2.将第1代的hUCMSCs采用梯度冷冻技术冻存5个月，复苏后培养至第12代时，加入成脂诱导剂培养。当诱导至21天时行油红O染色，7天及14天时用RT-PCR技术分别检测成脂转化基因过氧化物酶增殖剂受体(PPAR-2)和脂蛋白酯酶(LPL)；3.将hUCMSCs制成细胞悬液接种于蚕丝素多孔支架，荧光倒置相差显微镜、扫描电镜和四甲基偶氮唑蓝(MTT)法观察其在支架上的吸附和生长情况，将细胞-支架复合物成脂诱导6周后移植于大鼠体内
35、，观察细胞在支架上成脂情况。 结果：1.体外培养4-6天后，有细胞从组织块中游出；细胞传代培养至第10代，无明显的形态和增殖能力改变；细胞阳性表达CD13、CD44，而CD14、CD34、HLA-DR表达呈阴性。体外诱导实验证实，该细胞具有成脂肪和成骨分化的能力。RT-PCR显示其表达干细胞特异性因子OCT-4；2.hUCMSCs冻存复苏后，活细胞约为86，流式细胞仪分析这些细胞表达CD13、CD44和CD71等MSCs标志物，不表达CD14、CD34和HLA-DR表面抗原。复苏细胞在成脂诱导剂的作用下，细胞中有脂滴产生，通过油红O染色显示细胞核周围有脂滴聚集，通过RT-PCR检测有LPL及P
36、PAR-2 mRNA的表达。3.细胞与支架复合培养1-2天后可见hUCMSCs与蚕丝素多孔支架充分附着，培养5-7天细胞生长增殖十分活跃，10天左右时，蚕丝支架孔中hUCMSCs成片状融合。荧光倒置相差显微镜和扫描电镜见细胞与支架黏附良好并有大量基质分泌，且活性指标与正常培养的hUCMSCs比较无统计学意义(P>0.05)，细胞-支架复合物成脂诱导4周时，已有成脂样细胞生成，并与蚕丝素蛋白多孔支架牢固粘附，成脂诱导6周，见大量成脂样细胞生成；将成脂诱导6周的细胞-支架复合物植入大鼠体内植入4周后，可见有脂肪形成，8周后支架材料继续降解，脂肪组织形成明显，对照组支架材料逐渐降解，未
37、见脂肪组织形成。 结论：1. hUCMSCs能在体外培养、扩增并且具有和骨髓间充质干细胞相似的生物学特性；2.将hUCMSCs冻存复苏后培养至第12代，仍具有向脂肪细胞分化的潜能，可作为脂肪组织工程的种子细胞来源；3.蚕丝素多孔支架对hUCMSCs具有良好的吸附作用，并能维持其正常形态、功能及活性，蚕丝素多孔支架是hUCMSCs三维立体培养时良好的天然支架，该支架是一种理想的生物可降解支架，hUCMSCs接种于蚕丝素多孔支架可构建出组织工程脂肪。目的：1.探讨人脐带间充质干细胞(human Umhilical Cord Mesenchvmal Stem Cells hUCMSCs)的体外分离、
38、纯化及培养条件，并对其生物学特性进行研究；2.观察hUCMSCs冻存复苏后向脂肪细胞定向分化的能力；3.观察蚕丝素多孔支架对hUCMSCs吸附作用及支架对hUCMSCs形态、功能及活性的影响，探讨蚕丝素多孔支架与hUCMSCs构建组织工程脂肪的可行性。 方法：1.将剔除动静脉的新鲜人脐带组织切成小块培养，得到贴壁细胞，倒置显微镜观察细胞形态，细胞计数绘制细胞生长曲线；流式细胞仪测定细胞表面标记；化学染色及RT-PCR检测其体外诱导成脂和成骨分化的能力；RT-PCR检测干细胞特异性标志基因OCT-4；2.将第1代的hUCMSCs采用梯度冷冻技术冻存5个月，复苏后培养至第12代时，加入成脂诱导剂培
39、养。当诱导至21天时行油红O染色，7天及14天时用RT-PCR技术分别检测成脂转化基因过氧化物酶增殖剂受体(PPAR-2)和脂蛋白酯酶(LPL)；3.将hUCMSCs制成细胞悬液接种于蚕丝素多孔支架，荧光倒置相差显微镜、扫描电镜和四甲基偶氮唑蓝(MTT)法观察其在支架上的吸附和生长情况，将细胞-支架复合物成脂诱导6周后移植于大鼠体内，观察细胞在支架上成脂情况。 结果：1.体外培养4-6天后，有细胞从组织块中游出；细胞传代培养至第10代，无明显的形态和增殖能力改变；细胞阳性表达CD13、CD44，而CD14、CD34、HLA-DR表达呈阴性。体外诱导实验证实，该细胞具有成脂肪和成骨分化的能力。R
40、T-PCR显示其表达干细胞特异性因子OCT-4；2.hUCMSCs冻存复苏后，活细胞约为86，流式细胞仪分析这些细胞表达CD13、CD44和CD71等MSCs标志物，不表达CD14、CD34和HLA-DR表面抗原。复苏细胞在成脂诱导剂的作用下，细胞中有脂滴产生，通过油红O染色显示细胞核周围有脂滴聚集，通过RT-PCR检测有LPL及PPAR-2 mRNA的表达。3.细胞与支架复合培养1-2天后可见hUCMSCs与蚕丝素多孔支架充分附着，培养5-7天细胞生长增殖十分活跃，10天左右时，蚕丝支架孔中hUCMSCs成片状融合。荧光倒置相差显微镜和扫描电镜见细胞与支架黏附良好并有大量基质分泌，且活性指标
41、与正常培养的hUCMSCs比较无统计学意义(P>0.05)，细胞-支架复合物成脂诱导4周时，已有成脂样细胞生成，并与蚕丝素蛋白多孔支架牢固粘附，成脂诱导6周，见大量成脂样细胞生成；将成脂诱导6周的细胞-支架复合物植入大鼠体内植入4周后，可见有脂肪形成，8周后支架材料继续降解，脂肪组织形成明显，对照组支架材料逐渐降解，未见脂肪组织形成。 结论：1. hUCMSCs能在体外培养、扩增并且具有和骨髓间充质干细胞相似的生物学特性；2.将hUCMSCs冻存复苏后培养至第12代，仍具有向脂肪细胞分化的潜能，可作为脂肪组织工程的种子细胞来源；3.蚕丝素多孔支架对hUCMSCs具有良好的吸附作用
42、，并能维持其正常形态、功能及活性，蚕丝素多孔支架是hUCMSCs三维立体培养时良好的天然支架，该支架是一种理想的生物可降解支架，hUCMSCs接种于蚕丝素多孔支架可构建出组织工程脂肪。目的：1.探讨人脐带间充质干细胞(human Umhilical Cord Mesenchvmal Stem Cells hUCMSCs)的体外分离、纯化及培养条件，并对其生物学特性进行研究；2.观察hUCMSCs冻存复苏后向脂肪细胞定向分化的能力；3.观察蚕丝素多孔支架对hUCMSCs吸附作用及支架对hUCMSCs形态、功能及活性的影响，探讨蚕丝素多孔支架与hUCMSCs构建组织工程脂肪的可行性。 方法：1.将
43、剔除动静脉的新鲜人脐带组织切成小块培养，得到贴壁细胞，倒置显微镜观察细胞形态，细胞计数绘制细胞生长曲线；流式细胞仪测定细胞表面标记；化学染色及RT-PCR检测其体外诱导成脂和成骨分化的能力；RT-PCR检测干细胞特异性标志基因OCT-4；2.将第1代的hUCMSCs采用梯度冷冻技术冻存5个月，复苏后培养至第12代时，加入成脂诱导剂培养。当诱导至21天时行油红O染色，7天及14天时用RT-PCR技术分别检测成脂转化基因过氧化物酶增殖剂受体(PPAR-2)和脂蛋白酯酶(LPL)；3.将hUCMSCs制成细胞悬液接种于蚕丝素多孔支架，荧光倒置相差显微镜、扫描电镜和四甲基偶氮唑蓝(MTT)法观察其在支
44、架上的吸附和生长情况，将细胞-支架复合物成脂诱导6周后移植于大鼠体内，观察细胞在支架上成脂情况。 结果：1.体外培养4-6天后，有细胞从组织块中游出；细胞传代培养至第10代，无明显的形态和增殖能力改变；细胞阳性表达CD13、CD44，而CD14、CD34、HLA-DR表达呈阴性。体外诱导实验证实，该细胞具有成脂肪和成骨分化的能力。RT-PCR显示其表达干细胞特异性因子OCT-4；2.hUCMSCs冻存复苏后，活细胞约为86，流式细胞仪分析这些细胞表达CD13、CD44和CD71等MSCs标志物，不表达CD14、CD34和HLA-DR表面抗原。复苏细胞在成脂诱导剂的作用下，细胞中有脂滴产生，通过
45、油红O染色显示细胞核周围有脂滴聚集，通过RT-PCR检测有LPL及PPAR-2 mRNA的表达。3.细胞与支架复合培养1-2天后可见hUCMSCs与蚕丝素多孔支架充分附着，培养5-7天细胞生长增殖十分活跃，10天左右时，蚕丝支架孔中hUCMSCs成片状融合。荧光倒置相差显微镜和扫描电镜见细胞与支架黏附良好并有大量基质分泌，且活性指标与正常培养的hUCMSCs比较无统计学意义(P>0.05)，细胞-支架复合物成脂诱导4周时，已有成脂样细胞生成，并与蚕丝素蛋白多孔支架牢固粘附，成脂诱导6周，见大量成脂样细胞生成；将成脂诱导6周的细胞-支架复合物植入大鼠体内植入4周后，可见有脂肪形成，
46、8周后支架材料继续降解，脂肪组织形成明显，对照组支架材料逐渐降解，未见脂肪组织形成。 结论：1. hUCMSCs能在体外培养、扩增并且具有和骨髓间充质干细胞相似的生物学特性；2.将hUCMSCs冻存复苏后培养至第12代，仍具有向脂肪细胞分化的潜能，可作为脂肪组织工程的种子细胞来源；3.蚕丝素多孔支架对hUCMSCs具有良好的吸附作用，并能维持其正常形态、功能及活性，蚕丝素多孔支架是hUCMSCs三维立体培养时良好的天然支架，该支架是一种理想的生物可降解支架，hUCMSCs接种于蚕丝素多孔支架可构建出组织工程脂肪。目的：1.探讨人脐带间充质干细胞(human Umhilical Cord Mes
47、enchvmal Stem Cells hUCMSCs)的体外分离、纯化及培养条件，并对其生物学特性进行研究；2.观察hUCMSCs冻存复苏后向脂肪细胞定向分化的能力；3.观察蚕丝素多孔支架对hUCMSCs吸附作用及支架对hUCMSCs形态、功能及活性的影响，探讨蚕丝素多孔支架与hUCMSCs构建组织工程脂肪的可行性。 方法：1.将剔除动静脉的新鲜人脐带组织切成小块培养，得到贴壁细胞，倒置显微镜观察细胞形态，细胞计数绘制细胞生长曲线；流式细胞仪测定细胞表面标记；化学染色及RT-PCR检测其体外诱导成脂和成骨分化的能力；RT-PCR检测干细胞特异性标志基因OCT-4；2.将第1代的hUCMSCs
48、采用梯度冷冻技术冻存5个月，复苏后培养至第12代时，加入成脂诱导剂培养。当诱导至21天时行油红O染色，7天及14天时用RT-PCR技术分别检测成脂转化基因过氧化物酶增殖剂受体(PPAR-2)和脂蛋白酯酶(LPL)；3.将hUCMSCs制成细胞悬液接种于蚕丝素多孔支架，荧光倒置相差显微镜、扫描电镜和四甲基偶氮唑蓝(MTT)法观察其在支架上的吸附和生长情况，将细胞-支架复合物成脂诱导6周后移植于大鼠体内，观察细胞在支架上成脂情况。 结果：1.体外培养4-6天后，有细胞从组织块中游出；细胞传代培养至第10代，无明显的形态和增殖能力改变；细胞阳性表达CD13、CD44，而CD14、CD34、HLA-D
49、R表达呈阴性。体外诱导实验证实，该细胞具有成脂肪和成骨分化的能力。RT-PCR显示其表达干细胞特异性因子OCT-4；2.hUCMSCs冻存复苏后，活细胞约为86，流式细胞仪分析这些细胞表达CD13、CD44和CD71等MSCs标志物，不表达CD14、CD34和HLA-DR表面抗原。复苏细胞在成脂诱导剂的作用下，细胞中有脂滴产生，通过油红O染色显示细胞核周围有脂滴聚集，通过RT-PCR检测有LPL及PPAR-2 mRNA的表达。3.细胞与支架复合培养1-2天后可见hUCMSCs与蚕丝素多孔支架充分附着，培养5-7天细胞生长增殖十分活跃，10天左右时，蚕丝支架孔中hUCMSCs成片状融合。荧光倒置相差显微镜和扫描电镜见细胞与支架黏附良好并有大量基质分泌，且活性指标与正常培养的hUCMSCs比较无统计学意义(P>0.05)，细胞-支架复合物成脂诱导4周时，已有成脂样细胞生成，并与蚕丝素蛋白多孔支架牢固粘附，成脂诱导6周，见大量成脂样细胞生成；将成脂诱导6周的细胞-支架复合物植入大鼠体内植入4周后，可见有脂