《实验一--巨噬细胞吞噬功能实验.docx》由会员分享，可在线阅读，更多相关《实验一--巨噬细胞吞噬功能实验.docx（4页珍藏版）》请在三一文库上搜索。
1、实验一 巨噬细胞吞噬功能实验1、【实验原理】(1)巨噬细胞作为单核吞噬细胞系统的主要细胞，具有活跃的吞噬功能。能清除体内抗原物质及变性的细胞，在特异性及非特异性免疫中均起重要作用。M受抗原刺激后活化，可使其吞噬功能明显增强。(2)此实验采用体内法，即：在小鼠体内诱导腹腔巨噬细胞产生后，再给小鼠腹腔注射鸡红细胞30min后处死小鼠，取出腹腔液，以冷美蓝染色，油镜下计数吞噬鸡红细胞的百分数，及观察巨噬细胞中内因被杀死而染为蓝色的鸡红细胞的形态、数目，以判断巨噬细胞中的杀伤能力，由此间接地测定机体的非特异免疫水平。2、【实验步骤】（1）试验前3d，小白鼠腹腔注射6无菌淀粉液1ml，诱导巨噬细胞渗出至
2、腹腔中。（2）实验时，每只小鼠腹腔注射鸡红细胞液1ml，轻揉腹部，使红细胞在腹腔中分布均匀，利于吞噬（3）30min后，将小鼠拉颈处死，固定，打开腹腔暴露肠管，用吸管取出腹腔液，均匀涂布于载玻片上，然后再滴一小滴0.03冷美蓝溶液，盖上盖玻片。（4）低倍镜下找到观察区域后，换高倍镜下进行观察，计数3、【实验结果】4、【结果分析】（1）如图所示，在小鼠体内诱导腹腔巨噬细胞产生后，再给小鼠注射鸡红细胞后镜检腹腔液，可观察到巨噬细胞吞噬鸡红细胞的现象，并且可以看到部分鸡红细胞聚集到吞噬细胞附近。（2）镜下可见吞噬细胞核呈蓝色，被吞噬的鸡红细胞呈椭圆形，其胞浆呈红色而核被染成蓝色。(3)由于未将腹腔液
3、和冷美蓝溶液充分混合均匀，使得视野中出现大片深染区域。总体实验结果较好，视野中央可见清晰的吞噬了鸡红细胞的巨噬细胞。5、【注意事项】（1）涂片的薄厚要适当，否则影响计数。（2）小鼠腹腔注射时不要刺伤内脏。（3）如小鼠腹腔液过少，可注入适量生理盐水。（4）剪开小鼠腹腔时应避免出血，否则将影响试验结果。（5）被吞噬的鸡红细胞时间过长可被消化，时间过短未被吞噬，必须掌握好吞噬作用时间。实验二 双向琼脂扩散实验1、【实验原理】（1）可溶性抗原 与相应抗体特异性结合，两者比例适当并有电解质存在及一定的温度条件下，经一定的时间，可形成肉眼可见的沉淀线/环的现象，称为沉淀反应 。（2）琼脂扩散是指为可溶性抗
4、原与抗体在琼脂凝胶中所呈现的一种沉淀反应。当对应的抗原、抗体在半固体琼脂终相遇，且二者比例适当时，便出现可见的白色沉淀线，这组沉淀线是一组抗原、抗体的特异性复合物。当琼脂中有多组不同的抗原、抗体存在时，便各自依其扩散速度的差异，再适当的部位形成独立的沉淀线。因此，琼脂扩散不仅用于疾病的诊断，更广泛地用于抗原成分的分析。（3）双向琼脂扩散试验是定性实验。将可溶性抗原与相应抗体分别加人琼脂板上的孔内，两者均可扩散，在抗原抗体比例适宜处形成可见的沉淀线。如果不是相应的抗原与抗体，就不出现沉淀线。本试验常用于分析抗原抗体的纯度及相互关系。2、【实验步骤】（1）制板：将熔化的1%琼脂加在玻片上，3ml/
5、板。（2）打孔：待琼脂凝固后，在板上打孔。（3）加样：在空中加入相应抗原、抗体。（4）结果观察 将琼脂板放入湿盒内置 37c 温箱中 24 小时后取出观察结果。3、【实验结果】4、【结果分析】 （1）如图所示，在中央孔与添加抗原1的孔之间出现沉淀线，有抗原抗体反应，为阳性反应，说明抗原1与抗体相对应。中央孔与添加抗原2的孔之间没有沉淀线，说明抗原2与抗体之间不相对应。（2）抗体与抗原发生扩散时，随扩散距离的增大浓度降低，在抗原抗体比例适宜处形成可见的沉淀线。当有沉淀线出现时，说明有抗原抗体反应。5、【注意事项】（1）加样时不要将琼脂划破，以免影响沉淀线的形成。（2）反应时间要适宜，时间过长，沉淀线可解离而导致假阴性、不出现或不清楚。（3）加样时不同浓度抗体和抗原不要混淆，影响试验结果。（4）试验前应做预试验，确定抗体的稀释度。