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1、Coombs Test机体受某些抗原刺激后，可产生不完全抗体，由于这种抗体体积较小、长度短，只能与颗粒抗原一方相结合(又称单价抗体)，因而不能出现肉眼可见的凝集反应。Coombs首先根据抗体存在于球蛋白，注入异种动物的球蛋白又是抗原的原理，将含有不完全抗体的血清球蛋白免疫异种动物，获得抗球蛋白抗体，此种抗体可以起到桥梁作用，连接已结合有不完全抗体的抗原，产生肉眼可见的凝集反应，这种反应称为抗球蛋白实验。抗球蛋白实验又称Coombs实验，经常用作实验的有两类方法，即为直接Coombs实验和间接Coombs实验。一、直接Coombs实验将含球蛋白的试剂直接加到红细胞表面结合抗体的细胞悬液中，即可见
2、细胞凝集。可用玻片法定性测定，也可用试管法作半定量分析。常用于新生儿溶血症、自身免疫性溶血症、特发性自身免疫性贫血和医源性溶血性疾病等的检测。二、间接Coombs实验用以检测游离的血清中的不完全抗体。将受检血清和具有待测不完全抗体相应抗原性的红细胞相结合。再加入抗球蛋白抗体就可出现可见的红细胞凝集。此实验多用于检测母体Rh(D)抗体，以便及早发现和避免新生儿溶血症的发生。亦可对红细胞不相容的输血所产生的血型抗体进行检测。Coombs实验除了广泛应用于血液病的检测外，还可采用专一特异性的抗球蛋白的血清如抗IgG血清、抗IgA或抗IgM以及抗补体血清等，分析结合于红细胞上的不完全抗体的免疫球蛋白亚
3、类。（1）直接抗人球蛋白试验（DAT）：DAT是直接检测洗涤后红细胞，以确定该细胞是否在体内被 IgG致敏，主要用于自身免疫溶血性贫血，药物引发的溶血，新生儿和输血所导致的同种异体免疫反应等疾病时血型 血清学检测。 （2）间接抗人球蛋白试验（IAT） 用途：洗涤后的人红细胞与血清标本在体外孵育，再加抗人球蛋白试剂，检测体外致敏红细胞的血清抗体。临床应用时亦可由不完全抗体确定红细胞血型（如RH血型检测），血清中抗体的检测和确定，以及血型相容试验。直接抗人球蛋白试验 （direct antiglobulin test DAT）定义：用于诊断胎儿有核红细胞增多症、新生儿溶血病和自身免疫性溶血性贫血症
4、的试验。依据某些患者红细胞表面含不完全抗体，滴加抗人球蛋白血清后可出现凝集现象。 直接抗人球蛋白试验阳性对溶血性贫血的意义 溶血性贫血是由于红细胞破坏增多、增速，超过造血补偿能力范围时所发生的一种贫血。人骨髓的红细胞生成能力较强，具有产生正常红细胞6-8倍的代偿潜力。如红细胞的寿命缩短，破坏加速，而骨髓造血仍能代偿时，可不出现贫血，称为溶血性疾患。当平均红细胞寿命期短于15-20d时，红细胞破坏加速远远超过骨髓代偿潜在能力，则将出现贫血。 溶血是贫血的原因之一，其中许多溶血的原因与免疫反应无关。血清学检查不能确诊患者是否有溶血性贫血，仅能帮助鉴定溶血是否有免疫基础，以及是什么类型的免疫性溶血性
5、贫血，从而有助于治疗。 血液免疫学上所用抗球蛋白试验中直接抗人球蛋白试验的目的是检测在体内已被抗体或补体致敏的红细胞，如自身免疫性溶血性贫血、药物诱发性的溶血性贫血、新生儿溶血病及输红细胞所致溶血性输血反应的检测。 在盐水介质中，不完全抗体通常只能致敏红细胞（结合了不完全抗体的红细胞，称为致敏红细胞），而不能使致敏的红细胞出现凝集。 使用抗人球蛋白试剂后，致敏的红细胞之间则出现凝集。同样的方法也能检出在体内已被抗体或补体成分致敏的红细胞。这种检测的方法，称为抗人球蛋白试验。 直接抗人球蛋白试验阳性并不意味一个人红细胞存活期的缩短。医院患者中有10%、献血员中有1/(1000-9000)的人直接
6、抗球蛋白试验呈阳性，但并没有免疫性溶血的临床表现。与红细胞存活期缩短有关联无关联的直接抗人球蛋白试验阳性，可在体内由下列9种现象所引起：1、红细胞抗原的自身抗体如免疫球蛋白或补体或两者都附着于红细胞。2、近期输血的受血者所产生的同种抗体与献血员红细胞上抗原发生反应。3、献血员血浆、血浆制品或红细胞部分所存在的抗体与受血者红细胞上的抗原发生反应。4、母亲的同种抗体通过胎盘附着于胎儿的红细胞上，此类抗体常与新生儿溶血病有关。5、抗菌药物（如青霉素）的抗体与药物致敏的红细胞相结合。6、红细胞膜受某些药物（以头孢菌素类最多见）疗法而改变，导致蛋白（包括免疫球蛋白）非特异性地被红细胞膜所吸引。7、对给予
7、药物（如奎尼替丁及非那西丁）的反应形成药物-抗药物复合体，使补体成分、IgG（占少数）与红细胞相结合。8、为减少器官及骨髓移植患者的T细胞群体，应用有嗜异性抗体存在的马抗人淋巴细胞球蛋白时。9、丙种球蛋白过高血症患者的免疫球蛋白与红细胞发生非抗体媒介的结合时。这种现象的直接抗球蛋白试验阳性也见于高剂量静脉用丙种球蛋白治疗的患者。 直接抗人球蛋白试验是诊断自身免疫性溶血性贫血(AIHA)的重要依据，检查被检红细胞上有无不完全抗体，又称Coombs试验。直接抗人球蛋白试验正常值：直接抗人球蛋白试验呈阴性。直接抗人球蛋白试验临床意义：异常结果：试验阳性1. 自身免疫性贫血， IgG型引起的溶血性贫血
8、，本试验直接反应常呈强阳性。2. 药物诱发的免疫性溶血性贫血，与间接反应共同反应疾病。3. 冷凝集素综合征直接反应阳性4. 新生儿同种免疫溶血病，因Rh血型不合所致溶血病，直接强阳性，持续数周、换血输血后数天内可变为阴性，由于“ABO”血型不合引起的溶血病，结果常为阴性或弱阳性。5. 红细胞血型不合引起的输血反应，ABO或Rh血型不合输血，供者的红细胞被受者的血型抗体致敏，在供者被致敏的红细胞完全破坏以前，直接反应阳性。6. 其它在传染性单核细胞增多症、SLE、恶性淋巴瘤、慢性淋巴细胞白血病、癌肿、铅中毒、结节性动脉周围炎、EVan氏综合征等，病人直接反应亦可阳性，阵发性寒冷性血红蛋白尿症患者
9、中，急性发作后用抗补体血清做试验直接反应常为阳性。直接、间接抗人球蛋白试验各有什么意义？出现假阳性或假阴性有什么可能性？抗人球蛋白试验的原理：不完全抗体（是一种球蛋白）不能与含有抗原的红细胞发生凝集，但可与其结合；结合了不完全抗体的红细胞称为致敏红细胞。当加人抗人球蛋白血清后，由于球蛋白一抗球蛋白的特异反应，使致敏红细胞发生凝集，从而显示出不完全抗体的存在。抗人球蛋白试验分直接试验和间接试验： 直接试验是检查被检红细胞上有无不完全抗体吸附的情况，即是检查体内致敏红细胞的一种方法，在临床上有重要意义。如新生儿溶血、溶血性输血反应（输异型血后，不相合的红细胞被受血者抗体致敏）及自身免疫性溶血性贫血
10、（患者红细胞被自身抗体致敏）等情况下均可出现阳性反应； 间接试验：用以检测患者血清中有无游离的不完全抗体或补体，以间接估计体内抗红细胞抗体或补体的数量，判断预后；临床上也用以鉴定自身抗体性质。诊断价值不如直接试验。抗人球蛋白试验假阳性和假阴性原因分析： ( l ）假阳性的原因 有冷抗体，可用草酸盐或肝素抗凝，所得血清中的冷抗体不能固定在红细胞上，采用冷生理盐水冲洗红细胞亦可去处； 高球蛋白血症，如风湿热、系统性红斑狼疮、结节病、白血病、淋巴瘤及肿瘤等； 溃疡性结肠炎、梅毒； 药物，如。一甲基多巴、头抱霉素、苯阱、青霉素、奎宁与血防846 等，损伤红细胞表面或吸附于红细胞上； 脐带血中的胶样物质混人血清中，可引起红细胞凝集； 玻璃容器的游离硅酸可引起红细胞凝集； 其他如脂溶剂的蒸气污染，细菌污染与试剂不纯等。 ( 2 ）假阴性的原因 抗人球蛋白血清应包括抗Y 一球蛋白（主要由单核巨噬细胞合成）和抗非Y一球蛋白抗体，否则某些不完全抗体不易检出； 容器或试剂中混人人血清球蛋白，中和了抗人球蛋白抗体； 补体问题。因y 一球蛋白抗体是补体结合抗体，无补体存在时，不能呈现抗球蛋白阳性反应。因此，使用保存血清样品作为补体的来源。另外有抗补体因子时亦可能出现假阴性； 试剂不合格； 不完全抗体脱落，如红细胞积压过紧、洗涤过程中。