《蛋白质组学的研究.docx》由会员分享，可在线阅读，更多相关《蛋白质组学的研究.docx（3页珍藏版）》请在三一文库上搜索。
1、蛋白质组学的研究肝细胞，胶质细胞，热休克蛋白27蛋白质组学一词，源于蛋白质与 基因组学两个词的组合，意指“一种基因组所表达的全套蛋白质”， 蛋白质组的研究不仅能为生命活动规律提供物质基础，也能为众多种疾病机理的阐明及攻克提供理论根据和解决途径。通过对正常个体及病理个体间的蛋白质组比较分析，我们可以找到某些“疾病特异性的蛋白质分子”，它们可成为新药物设计的分子靶点，或者也会为疾病的早期诊断提供分子标志。确实，那些世界范围内销路最好的药物本身是蛋白质或其作用靶点为某种蛋白质分子。因此，蛋白质组学研究不仅是探索生命奥秘的必须工作，也能为人类健康事业带来巨大的利益。蛋白质组学的研究是生命科学进入后基因
2、时代的特征。利用蛋白质的等电点和分子量通过双向凝胶电泳的方法将各种蛋白质区分开来是一种很有效的手段。它在蛋白质组分离技术中起到了关键作用。质谱技术是目前蛋白质组研究中发展最快，也最具活力和潜力的技术。热休克蛋白27热休克蛋白27(HSP27)是热休克蛋白家族中的重要一员,蛋白质组学研究证实HSP27在人类大肠癌肿瘤细胞中呈过表达现象,并且认为HSP27表达与大肠癌肿瘤细胞转移相关.近年来,HSP27表达被证实与化疗药物耐药和患者预后相关.HSP27表达水平可能是大肠癌患者独立的预后因素.进一步深入研究HSP27与大肠癌的关系,利用其作为大肠癌诊断、分级、治疗、预后的标志物及研制开发新的抗大肠癌
3、药物有重大意义。此外，热休克蛋白27对大鼠脑缺血也用重要的影响。热休克蛋白是一类广泛存在于生物体内、生物进化高度保守、在生理和应激条件下均能表达的蛋白质家族. HSP27通过与凋亡通路中的一些重要蛋白相互作用也参与细胞凋亡的调控. 目的 探讨促红细胞生成素对大鼠脑缺血的保护作用.方法 采用线栓法阻断大鼠一侧大脑中动脉制作大鼠局灶性缺血再灌注模型.促红细胞预处理组于缺血开始前2 h予腹腔注射促红细胞生成素 3 000 u/kg;缺血再灌注组和假手术组在手术前2 h予腹腔注射等量生理盐水.再灌注24 h后进行细胞凋亡检测及热休克蛋白27和血管内皮生长因子免疫组织化学染色.结果 再灌注24 h后,
4、缺血再灌注组可见较多的POD阳性细胞(67.4811.17 个/高倍视野),促红细胞生成素预处理组缺血区阳性细胞数目减少(45.254.72 个/高倍视野,P0.01),假手术组偶见个别阳性细胞,正常组未见凋亡细胞;与缺血再灌注组(25.604.42个/高倍视野)相比, 促红细胞生成素预处理组热休克蛋白27表达增加(67.5613.84个/高倍视野,P0.01);促红细胞生成素预处理组血管内皮生长因子表达较缺血再灌注组亦增加(74.9011.64个/高倍视野比40.147.50个/高倍视野,P0.01).结论 促红细胞生成素预处理后可抑制缺血损伤后缺血侧皮层细胞凋亡,其机制可能是通过上调热休克
5、蛋白27和血管内皮生长因子基因表达而实现的. 肝细胞肝细胞是生物人工肝支持系统的核心原材料,近年来随着分子生物学的发展肝细胞永生化已成为可能.肝细胞的永生化对于药物毒理、生物人工肝支持系统以及肝脏组织工程的研究都具有非常深远的意义.目的 探讨体外定向诱导小鼠胚胎干细胞(ES细胞)分化为肝细胞的方法及肝损伤模型肝内移植的可行性.方法 常规培养ES细胞后,继续悬浮培养4 d以形成拟胚体(EBs),转移EBs到铺有明胶的6孔板中贴壁培养,并添加3 mmol/L丁酸钠开始诱导分化,7 d后加入淤胆血清筛选、纯化ES源性肝细胞,分化过程中用光学显微镜和电子显微镜观察细胞形态及超微结构的改变;用逆转录-聚
6、合酶链反应(RT-PCR)方法检测肝细胞特异性标志基因:白蛋白(ALB)、甲胎蛋白(AFP)、甲状腺素运载蛋白(TTR)、1抗胰蛋白酶(AAT)、葡萄糖6磷酸酶(G6P)、酪氨酸转氨酶(TAT)mRNA水平的表达;以荧光示踪剂CFDA-SE标记诱导获得的肝细胞,并移植到肝损伤小鼠肝内,观察移植细胞在肝内的定居、增殖情况.结果 诱导分化过程中,ES细胞形态逐渐出现肝细胞样改变,其超微结构与小鼠肝细胞超微结构十分相似;RT-PCR结果显示,随着诱导时间的推进,标志肝细胞发育过程的ALB、AFP、TTR、AAT、G6P、TAT mRNA顺序表达;肝内移植实验结果显示:ES源性肝细胞可在肝损伤小鼠肝内
7、定居并增殖.结论 丁酸钠联合淤胆血清可以诱导ES细胞分化为肝细胞,ES源性肝细胞肝损伤模型体内移植是可行的,这有可能为细胞移植治疗难治性肝病提供一种新的细胞来源. 星形胶质细胞星形胶质细胞(AS)是神经系统的重要组成部分,目前认为AS是构成突触结构的第三种成分.AS对突触的数量、形态结构、成熟过程以及突触传递都有影响.AS能够以多种方式和神经元相互作用,如通过谷氨酸-谷氨酰胺循环、细胞内Ca2+浓度的改变等环节影响神经元的生物活性,进而发挥对神经突触可塑性的影响.最新研究表明,AS亦能够通过分泌多种介质,如谷氨酸、高半胱氨酸、D-丝氨酸、ATP、雌二醇、胆固醇、神经营养因子、凝血酶敏感蛋白和集
8、聚蛋白等对神经突触可塑性发挥调节作用.。星形胶质瘤细胞与星形胶质细胞间的蛋白谱变化.方法 选择星形细胞来源的C6胶质瘤细胞和体外培养纯化大鼠皮层的星形胶质细胞进行蛋白组学分析.星形细胞和C6细胞双向凝胶电泳(2-DE)的凝胶图像用PDQuest软件比较,差异蛋白质点进行基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)和生物信息分析,部分蛋白质的差异表达结果用半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)验证.结果 获得了24个有明显表达变化的蛋白点;17个蛋白质得到质谱结果,与星形胶质细胞相比,经生物信息学分析确认的6个蛋白质中,磷酸甘油酸变位酶1、生物转化酶、谷胱甘肽S-转移酶P、钙网
9、织蛋白和膜联蛋白A2在C6细胞中表达量较高,而波形蛋白和肌动蛋白-肌动蛋白在C6细胞中表达量较低.磷酸甘油酸变位酶1、膜联蛋白A2和波形蛋白经半定量RT-PCR验证与2-DE结果相符.结论 本研究发现的差异表达蛋白质与许多重要的细胞生理活动和功能有密切关系,包括无氧酵解过程、细胞骨架组装、生物转化和信号转导,可能与胶质瘤的生长迅速、浸润迁移和抗药性相关.参考文献1) 史颖弘.细胞凋亡与自噬在肝细胞癌侵袭及转移中的作用研究D. 复旦大学 20052) 肖樟生.由肿瘤特异性启动子mTERT promotor驱动的m4-1BBL基因治疗小鼠肝细胞肝癌的实验研究D. 苏州大学 20093) 艾小明,肖
10、平.肝细胞刺激因子(HSS)诱导肝癌细胞凋亡的研究进展J. 中国民族民间医药. 2009(02)4) 顾文静.药物抑制血管内皮生长因子过表达对肝细胞癌变的影响D. 南通大学 20095) 王芳,杨富,张玲,徐丹,霍希松,毕海珊,孙树汉.微小RNA17-5p通过靶基因E2F1激活热休克蛋白27促进肝癌细胞转移(英文)A. 中国的遗传学研究遗传学进步推动中国西部经济与社会发展2011年中国遗传学会大会论文摘要汇编C. 20116) 钦伦秀,叶青海,汤钊猷.肝癌转移复发的分子机制与预测:从组学研究到临床应用A. 第十三届中国科协年会第18分会场-癌症流行趋势和防控策略研究研讨会论文集（补充）C. 2
11、0117) 丁辰月,胡铃敏,胡志斌,沈洪兵.端粒酶逆转录酶基因多态性与中国人群肝细胞肝癌遗传易感性的关系A. 全国肿瘤流行病学和肿瘤病因学学术会议论文集C. 20118) Townsend DM;Tew KD The role of glutathione-S-transferase in anti-cancer drug resistance 外文期刊 2002(47) DOI:10.1038/sj.onc.12069409) 高宜录;李传友;高树梓 C6细胞和星形细胞对神经干细胞体外迁移分化的不同影响 期刊论文 -中华神经医学杂志2006(11)10) 段国升 脑胶质瘤临床治疗的进展 期刊
12、论文 -中华神经外科杂志200411) Fantin VR;St-Pierre J;Leder P Attenuation of LDH-A expression uncovers a link between glycolysis,mitochondrial physiology,and tumor maintenance 200612) Sun HL;Liu J;Ding F Investigation of differentially expressed proteins in rat gastrocnemius muscle during denervationreinnervati
13、on 外文期刊 2006(3/4) DOI:10.1007/s10974-006-9067-413) Somogyi E;Petersson U;Hultenby K Calreticulin-an endoplasmic reticulum protein with calcium-binding activity is also found in the extracellular matrix 外文期刊 2003 DOI:10.1016/S0945-053X(02)00117-814) Roessler M;Rollinger W;Mantovani-Endl L;Hagmann ML
14、Palme S Berndt P Engel AM Pfeffer M Karl J Bodenmller H Rschoff J Henkel T Rohr G Rossol S R(o)sch W Langen H Zolg W Tacke M Identification of PSME3 as a novel serum tumor marker for colorectal cancer by combining two-dimensional polyacrylamide gel electrophoresis with a strictly mass spectrometry b
15、ased approach for data analysis 200615) Park HJ;Kim BG;Lee SJ;Heo SH Kim JY Kwon TH Lee EB Ryoo HM Cho JY Proteomic profiling of endothelial cells in human lung cancer 200816) Alfonso P;N(n)ez A;Madoz-Gurpide J;Lombardia L S(a)nchez L Casal JI Proteomic expression analysis of colorectal cancer by tw
16、o-dimensional differential gel electrophoresis 外文期刊 2005(10)17) Huang HL;Stasyk T;Morandell S;Dieplinger H Falkensammer G Griesmacher A Mogg M Schreiber M Feuerstein I Huck CW Stecher G Bonn GK Huber LA Biomarker discovery in breast cancer serum using 2-D differential gel electrophoresis/ MALDI-TOF/
17、TOF and data validation by routine clinical assays 200618) Langer R;Ott K;Specht K;Becker K Lordick F Burian M Herrmann K Schrattenholz A Cahill MA Schwaiger M Hofler H Wester HJ Protein expression profiling in esophageal adenocarcinoma patients indicates association of heat-shock protein 27 express
18、ion and chemotherapy response 200819) 谢超.王菲.俞雁 人类肝脏蛋白质组研究进展与展望 期刊论文 -国际遗传学杂志2008(3)20) 陈喜林.姜颖.贺福初 肿瘤干细胞蛋白质组学研究进展 期刊论文 -中华医学杂志2006(34)21) 李欣.董宝玮 蛋白质组学及其在肝细胞肝癌中的研究进展 期刊论文 -医学综述2007(14)22) 曾江辉.李山.秦雪.陈学杰 蛋白质组学技术及其在肝病研究中的应用 期刊论文 -中国医学文摘-肿瘤学分册2009(1)23) 彭仕芳.傅蕾.谭德明 热休克蛋白27高表达与肝细胞癌耐药相关 期刊论文 -中华肝脏病杂志2007(5) 本文讨论蛋白质组学研究对人类的影响，以及其作用，蛋白质组学的研究为人类一些疾病有着不可忽视的作用，为疾病的治疗做了巨大的贡献，蛋白质组学的研究还会依然继续下去，更多地为人类造福。