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1、miRNA qRT-PCR 引物 Bulge-Loop miRNA qRT-PCR是锐博生物开发的成熟miRNA检测方法，不需荧光探针，只要SYBR Green即可，具有高灵敏度和特异性的优点。检测包括两个步骤：(1) 基于茎凸环结构引物的逆转录反应和(2) 实时荧光定量PCR。茎凸环结构的逆转录引物能与miRNA 3端部分结合，在逆转录酶的作用下进行逆转录反应，然后特异的正反向引物和SYBR Green荧光染料共同参与的定量PCR反应体系，实现对逆转录产物进行定量检测。 产品目录 Bulge-Loop miRNA qRT-PCR Primer 产品说明 订购 订购卡下载 miRNA是一类内源
2、性非编码小RNA分子，长约20-23个核苷酸，预测有1/3的人类基因被miRNA调控，并且在物种间有非常高的同源性。研究表明，miRNA参与了几乎所有生命活动，包括细胞增殖和凋亡、器官生成、个体发育、造血、脂肪代谢等。目前，miRNA检测方法包括Biochip，qPCR， Northern Blots和micro-array。虽然qPCR是高灵敏性的方法之一，但是基于荧光探针的qPCR检测价格昂贵。Bulge-LoopTM miRNA qRT-PCR是锐博生物开发的成熟miRNA检测方法，不需荧光探针，只要SYBR Green即可，具有高灵敏度和特异性的优点。检测包括两个步骤：(1) 基于茎凸
3、环结构引物的逆转录反应和(2) 实时荧光定量PCR。茎凸环结构的逆转录引物能与miRNA 3端部分结合，在逆转录酶的作用下进行逆转录反应，然后特异的正反向引物和SYBR Green荧光染料共同参与的定量PCR反应体系，实现对逆转录产物进行定量检测。 特异性hsa-let-7家族成员同源性极高（表1），彼此之间仅有单个或数个碱基的差异。传统检测方法对此无能为力，无法区分各个家族成员。但Bulge-LoopTM miRNA定量PCR方法采用了具有茎凸环结构的逆转录引物以及高特异的miRNA引物套装，保证了该方法的高度特异性，即使是高度同源的miRNA也能被准确检测。表1：hsa-let-7家族：红
4、色标示的是与hsa-let-7a不同的碱基图1 Bulge-LoopTM miRNA定量检测has-let-7家族成员的融解曲线针对hsa-let-7家族7个miRNA成员的Bulge-LoopTM miRNA定量PCR结果分析表明，hsa-let-7家族各成员的特异性引物对其他成员的干扰极小，绝大部分均可以区分开来（下表：以7个化学合成的miRNA为模板，归一化处理后的定量检测结果）。与一般的 miRNA检测方法不同，Bulge-LoopTM茎凸环结构引物可以在同一个试管进行1-45个逆转录反应，而不影响检测效果。Bulge-LoopTM miRNA实时定量PCR具有检测范围广、更快速，更灵
5、敏，更省钱的优点；既能够准确定量低至0.1 pg总RNA中5个拷贝数的miRNA，也能够实现从1g总RNA中精确定量检测高拷贝数的miRNA，即miRNA的拷贝数在7个数量级的动态变化范围内，均可实现准确定量的目的。 高灵敏度能够准确定量0.1pg总RNA中，最低量至5个拷贝的目标miRNA，具有一个7个数量级的动态变化范围。比传统的miRNA定量检测方法（如Northern blot和micro-array）具有更宽广的动态变化范围，无需担心因样品量少或者miRNA表达量低而无法精确检测。图3 高灵敏度：低至5个拷贝的目标miRNA都能被检测出来准确性Bulge-LoopTM miRNA实时
6、定量PCR可以验证微阵列表达谱数据的准确性。尽管只有少量的样品，该方法也能有效地检测出miRNA的表达量，而且重复性高。图2 以化学合成的has-let-7a为模板，进行梯度稀释后的定量检测Bulge-LoopTM miRNA qPCR Primer Set是一个包含了miRNA特异的逆转录引物，以及PCR正反向引物的套装。具有茎凸环结构状的miRNA特异逆转录引物以及高度特异的正反向引物使得Bulge-LoopTM miRNA qPCR反应避免了miRNA前体的干扰，而反应的模板可以是总RNA或已纯化的miRNA分离物。通常U6 snRNA或5S rRNA作为miRNA检测的内参，适用于单个
7、或多个样品不同miRNA的相对定量，而当您想知道一个细胞中miRNA的绝对数量时，可以使用化学合成的miRNA您现在的位置：产品服务 产品列表miRNA inhibitor miRNA inhibitor是化学修饰的miRNA抑制物，通过特异地靶向抑制某个miRNA分子，可以削弱内源miRNA的基因沉默效应，提高蛋白表达量，进行功能缺失性（loss-of-function）研究，可以用来筛选miRNA靶位点，筛选调控某一基因表达的miRNA，筛选影响细胞发育过程的miRNA。 产品目录 miR-Ribo miRNA inhibitor 产品说明 订购 订购卡下载 miRNA inhibitor
8、是化学修饰的miRNA抑制物，通过特异性抑制某个miRNA分子，可以削弱细胞中miRNA的基因沉默效应，进行功能缺失性（loss-of-function）研究。它们可以用来筛选miRNA靶位点，筛选调控某一基因表达的miRNA，筛选影响细胞发育过程的miRNA。 图1 运用EdU方法检测miRNA inhibitor对细胞周期的影响miR-Ribo miRNA inhibitor Negative Control 产品说明 订购 订购卡下载 miR-Ribo miRNA inhibitor Negative Control 选用的是C. elegans的miRNA， 经过BLAST分析表明其与
9、人、小鼠、大鼠 的基因组，以及miRBase 14.0 中所有miRNA具有最小的同源性，适用于人、小鼠、大鼠的miRNA实验阴性对照。 Custom designed miRNA inhibitor 产品说明 订购 订购卡下载 客户设计的miRNA inhibitor，可以加上各种修饰 miRNA Precusor miRNA Precusor是化学方法制备的miRNA前体分子，可以进行荧光标记。 产品目录 Custom designed miRNA Precusor 产品说明 订购 订购卡下载 miRNA一般由发夹结构的约70-90个碱基大小的单链RNA前体经过酶加工后形成具有功能的miR
10、NA成熟分子，锐博生物能够为您化学合成70nt以下的miRNA Precusor。miRNA agomirAgomir是经过甲基化、硫代、胆固醇修饰的miRNA激动剂，在动物体内具有更高的稳定性。 产品目录 miR-Ribo miRNA agomir 产品说明 订购 订购卡下载 Agomir是经过甲基化、胆固醇等特殊化学修饰的特殊的miRNA mimics，在动物体内具有更高的稳定性和抑制效果。 miR-Ribo miRNA agomir Negative Control 产品说明 订购 订购卡下载 miR-Ribo miRNA agomir Negative Control 选用的是C. e
11、legans的miRNA， 经过BLAST分析表明其与人、小鼠、大鼠 的基因组，以及miRBase 14.0 中所有miRNA具有最小的同源性，适用于人、小鼠、大鼠的miRNA实验阴性对照。 Custom designed miRNA agomir 产品说明 订购 订购卡下载 客户设计的miRNA agomir，可以加上各种修饰 miRNA antagomir Antagomir是经过甲基化、硫代、胆固醇修饰的miRNA拮抗剂，在动物体内具有更高的稳定性和抑制效果。 产品目录 miR-Ribo miRNA antagomir 产品说明 订购 订购卡下载 Antagomir是经过甲基化、硫代、胆
12、固醇修饰的miRNA拮抗剂，适用于动物实验。miR-Ribo miRNA antagomir Negative Control 产品说明 订购 订购卡下载 miR-Ribo miRNA antagomir Negative Control 选用的是C. elegans的miRNA， 经过BLAST分析表明其与人、小鼠、大鼠 的基因组，以及miRBase 14.0 中所有miRNA具有最小的同源性，适用于人、小鼠、大鼠的miRNA实验阴性对照。Custom designed miRNA antagomir 产品说明 订购 订购卡下载 客户设计的miRNA antagomir，可以加上各种修饰mi
13、RNA Library 公司提供miRbase14.0中人的所有miRNA mimics和miRNA inhibitors，经济实惠，使用方便。 产品目录 miR-Ribo miRNA mimics Library (Rat) 产品说明 订购 订购卡下载 miR-Ribo miRNA mimics Library (Rat)包含miRBase 14.0中Rat的388 个miRNA mimics，于96孔板储存。miR-Ribo miRNA mimics和inhibitor文库可加速生物通路中miRNA的功能研究，这些生物通路包括： 代谢途径 (Metabolic Pathways) 生物发育
14、 (Developmental Pathways) 细胞生长 (Cell Growth) 组织发育 (Tissue Development) 癌细胞分化和增殖 (Cancer Cell Differentiation and Development) 干细胞分化 (Stem Cell Differentiation) miR-Ribo miRNA inhibitor Library (Rat) 产品说明 订购 订购卡下载 miR-Ribo miRNA mimics Library (Rat)包含miRBase 14.0中Rat的388个miRNA inhibitor，于96孔板储存。miR-R
15、ibo miRNA mimics和inhibitor文库可加速生物通路中miRNA的功能研究，这些生物通路包括： 代谢途径 (Metabolic Pathways) 生物发育 (Developmental Pathways) 细胞生长 (Cell Growth) 组织发育 (Tissue Development) 癌细胞分化和增殖 (Cancer Cell Differentiation and Development) 干细胞分化 (Stem Cell Differentiation) miR-Ribo Selection miRNA Set - 20 miRNA inhibitor 产品说
16、明 订购 订购卡下载 锐博生物可以根据您的需要定制miRNA组合文库（包含miRBase 12.0中人、小鼠、大鼠的所有miRNA，需20个以上miRNA起订） miR-Ribo miRNA inhibitor Library (Mouse) 产品说明 订购 订购卡下载 miR-Ribo miRNA mimics Library (Mouse)包含miRBase 14.0中Mouse的710个miRNA inhibitor，于96孔板储存。miR-Ribo miRNA mimics和inhibitor文库可加速生物通路中miRNA的功能研究，这些生物通路包括： 代谢途径 (Metabolic
17、Pathways) 生物发育 (Developmental Pathways) 细胞生长 (Cell Growth) 组织发育 (Tissue Development) 癌细胞分化和增殖 (Cancer Cell Differentiation and Development) 干细胞分化 (Stem Cell Differentiation) miR-Ribo miRNA mimics Library (Mouse) 产品说明 订购 订购卡下载 miR-Ribo miRNA mimics Library (Mouse)包含miRBase 14.0中Mouse的710个miRNA mimics
18、，于96孔板储存。miR-Ribo miRNA mimics和inhibitor文库可加速生物通路中miRNA的功能研究，这些生物通路包括： 代谢途径 (Metabolic Pathways) 生物发育 (Developmental Pathways) 细胞生长 (Cell Growth) 组织发育 (Tissue Development) 癌细胞分化和增殖 (Cancer Cell Differentiation and Development) 干细胞分化 (Stem Cell Differentiation) miR-Ribo miRNA inhibitor Library (Human
19、) 产品说明 订购 订购卡下载 miR-Ribo miRNA mimics Library (Human)包含miRBase 14.0中Human的904个miRNA mimics，于96孔板储存。miR-Ribo miRNA mimics和inhibitor文库可加速生物通路中miRNA的功能研究，这些生物通路包括： 代谢途径 (Metabolic Pathways) 生物发育 (Developmental Pathways) 细胞生长 (Cell Growth) 组织发育 (Tissue Development) 癌细胞分化和增殖 (Cancer Cell Differentiation
20、and Development) 干细胞分化 (Stem Cell Differentiation) miR-Ribo miRNA mimics Library (Human) 产品说明 订购 订购卡下载 miR-Ribo miRNA mimics Library (Human)包含miRBase 14.0中Human的904个miRNA mimics，于96孔板储存。miR-Ribo miRNA mimics和inhibitor文库可加速生物通路中miRNA的功能研究，这些生物通路包括： 代谢途径 (Metabolic Pathways) 生物发育 (Developmental Pathways) 细胞生长 (Cell Growth) 组织发育 (Tissue Development) 癌细胞分化和增殖 (Cancer Cell Differentiation and Development) 干细胞分化 (Stem Cell Differentiation) miR-Ribo Selection miRNA 产品说明 订购 订购卡下载 锐博生物可以根据您的需要定制miRNA组合文库（包含miRBase 14.0中人、小鼠、大鼠的所有miRNA，需20个以上miRNA起订）