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1、实验三 果蔬中维生素C的定量测定（紫外法）（4学时）一、实验目的1. 学习用铜离子氧化法测定维生素C（Vc）（紫外法）；2. 了解Vc定量测定的其他方法，如：磷钼酸比色法、碘量法、2,6-二氯酚靛酚滴定法（近年来用全自动电位滴定仪进行电位滴定）、紫外法、2,4-二硝基苯肼测定总抗坏血酸量、高效液相色谱法、毛细管电泳法、荧光法、Flinb近红外分光光度法等。二、实验原理抗坏血酸在波长243267nm处有较高的吸收值，但在样品成分比较复杂时，因有强烈的背景吸收而不适宜用紫外法测定其Vc含量。用碱加热法等处理法都存在试剂较贵、操作复杂、时问长等一系列问题而不能广泛应用。利用铜离子消除背景误差，能直接
2、测定一些水果蔬菜样品中的Vc含量而不需要进行前处理，操作简单干扰少。附加说明：在测定Vc的国标方法中，荧光法为测定食物中Vc含量的第一标准方法，2,4-二硝基苯肼法作为第二法。三、实验器材与试剂实验材料桔子实验器材紫外/可见分光光度计；涡旋混合仪；高速冷冻离心机；榨汁器；电热恒温水浴锅；试管与试管架；胶头器长滴管及移液管；250mL烧杯等。实验试剂1. 120g/mL Vc贮液：120mg Vc，加适量蒸馏水溶解，然后用1000毫升容量瓶定容。存4备用。2. 5g/mL的铜离子溶液：先配成1000g/mL的硫酸铜溶液；取上述硫酸铜溶液5mL，加入1mol/L的醋酸溶液7mL及1mol/L醋酸钠
3、200mL，用蒸馏水定容。5104mol/L的EDTA溶液：36.5mgEDTA溶于适量蒸馏水，250 mL馏水定容。铜离子-EDTA混合液（6.2105mol/L）：使用前将上述铜离子溶液和EDTA以4:1（v/v）混合而成（现用现配）。四、实验步骤1. 标准曲线制作取12支试管（大试管）分成2组，按下表进行操作。维生素C溶液浓度为120g/mL。蒸馏水(mL)1.00.90.80.70.60.5标准Vc(mL)00.10.20.30.40.5Cu2+-EDTA（pH6）5.05.05.05.05.05.0A267浓度(g/mL)2. 样品测试取一定量的桔子瓣记录克数。挤压成汁，9000 r
4、pm，4离心15min，取上清液量其体积并稀释20倍。1 mL样品稀释液，加入5mL铜离子-EDTA混合液（pH6）于波长267nm处测定其吸收值，结果为J（I）。取1mL样品稀释液加入4mL铜离子溶液（5g/mL），50水浴中加热15min，以破坏所有Vc，然后加入1mL 5104 mol/LEDTA溶液于波长267nm处测定其吸收值，结果为J（II）。3. 计算样品中Vc含量 = 其中：6铜离子-EDTA溶液稀释倍数JJ(I )-J(II)V材料总体积S标准曲线斜率M样品质量五、注意事项由于Vc已被氧化，同时不同植物体内不同程度地含有已被氧化成深色产物的鞣酸等成分，为尽量避免背景物质、有色物质的产生，准确测定Vc含量，实验过程中应尽量迅速操作。六、实验报告1. 内容与要求实验目的与要求、实验原理、主要实验步骤与结果观察、结果与讨论。2. 思考题查阅、比较与讨论目前测定Vc的方法，谈谈自己的看法。