《OMEGAdna提取说明书.docx》由会员分享，可在线阅读，更多相关《OMEGAdna提取说明书.docx（2页珍藏版）》请在三一文库上搜索。
1、材料与仪器： 离心机 （至少14000g） 、 1.5ml 或 2ml 无核酸酶离心管、 水浴锅、无水乙醇、氯仿、异戊醇、 无酶水 。试验之前：先用 absolute ethanol 稀释 DNA Wash Buffer Concentrat薛瓶 DNA Wash Buffer Concentrate1口 80ml （200 份装）试验步骤：1 .使用mortar 和 pestle 在 liquid nitrogen 中研磨样品（不超过50 毫克） ，放入 1.5ml microcentrifuge tube 。2 .力口 350ulBuffer ML1 和 25ul Proteinase K
2、涡旋混匀，60 c孵育（最少30 分钟） ，大多数孵育不超过4 小时或者37孵育1 晚。3 . 裂解产物加350ul 氯仿和异戊醇的混合溶液（ 24:1 ） ，涡旋混匀。10000g室温离心 2min,转移上清液到 1.5ml microcentrifuge tube, 避免含有污染物和抑制剂的乳白色界面。4 .估计步骤3 supernatant体积，加等集体的Buffer MBL,涡旋15s混 匀，70孵育10min 。5 .加步骤3 等体积的无水乙醇，涡旋15s 混匀。 （tips:300ul 上清液+300ul Buffer MBL+300ul absolute ethano）l6 .把
3、柱子和提供的2ml 收集管装配好， 加步骤 5 的溶液 750ul， 10000g室内离心1min,倒掉被离心的液体，重复利用提供的 2ml收集管。7 .把步骤5 剩余的混合物按照步骤6 的方法离心，但抛弃提供的 2ml收集管。8 .把柱子放在新的2ml收集管，力口 500ul HB Buffer,10000g 30s,第一 次洗柱子。9 .重复利用 2ml 收集管，力口 700ul DNA Wash Buffer,10000g,1mi触弃被离心的液体，重新利用 2ml 收集管。10 .重复步骤 9,加 700ul DNA Wash Buffell温 15000g,2min （这一步关键是去除微量的乙醇，以防其感染下游的实验） 。11 .把柱子放入1.5ml 离心管，预热Elution Buffer60-70 ,加 50-100ul到柱子内，室温下浸泡 2min, 10000g, 1min离心。12 .使用50-100ul Elution Buffer重复洗月步骤，再次U攵集DNA样品。13 14