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1、51rtig 三 n百度文库超敏病毒RNA纯化试剂盒说明书产品组成超敏病毒RNA纯化试剂盒5次样品50次制备Cat. No.40030054003050核酸纯化柱/5个30个2 ml离心管5个30个Carrier RNA20科l120 科 lBuffer L9/6 ml 55 mlBuffer WA （浓缩液）ml12 mlBuffer WBR （浓缩液）ml12 mlBuffer TE2 ml2 mlX2说明书1份1份产品储存Carrier RNA 请置于-20 C贮存。、其他物品和试剂请于 28 C贮存。技术支持杭州新景生物试剂开发有限公司研发部：e-mail:,电话：400-0099-8
2、57。产品介绍本产品适合从500日新鲜的或者冷冻的血浆或血清中分离纯化总RNA ,可稳定检测到含100copies/ml RNA病毒的体液标本。本试剂盒采用强烈的裂解液溶解并沉淀去除蛋白。在含有RNA的上清液中补加乙醇后加入核酸纯化柱， RNA结合在核酸纯化柱上， 残留的蛋 白与PCR抑制物则被过滤除去， RNA经Buffer WA和Buffer WBR洗涤后，用Buffer TE洗 脱，即可用于各种分子生物学实验。用户需自备的试剂与物品1 .无水乙醇2 .离心管（必须选用 RNase-free的离心管）3 .移液器吸头（为避免RNA酶的污染，请选用含有滤芯的RNase-free移液器吸头）4
3、 .乳胶手套、一次性口罩等防护用品和纸巾/5 .台式小量离心机（可配离心离心管和2ml离心管的转子）/6 .旋涡震荡器7 .不使用RNA酶的实验室/使用前准备1）如果离心机有制冷功能，请将温度设置到 25Co/2）根据试剂瓶标签上的指示在Buffer WA和Buffer WBR中加入无水乙醇， 并在标签的方框中打勾作好“乙醇已加”的标记。步 由于唾液、皮肤上均含有RNA酶，请在RNA的提取的全过程中都戴口罩和乳胶手套。分怦科回回印样品数计算需要使用的Buffer L9体积（1ml Buffer L9/管，注意由于加液过程时!勖在误差，建议计算时增加300500仙Buffer L9的体积），按每
4、1mlBuffer L9体积加入3 Carrier RNA的比例加入 Carrier RNA ,旋涡振荡数秒混匀。操作步骤：RNAW毒核酸提取注意事项：1 .尽量采用新鲜分离的或者冻融不超过一次的血清进行病毒RNA的分离纯化。反复冻融的血清将导致检出的敏感性降低，表现为CT值偏大或者假阴性。2 .如果不能及时将新鲜的血清进行RNA提取，可将血清用Buffer L9溶解后于-70C冻存。（详见步骤1）1）在 ml离心管中加入1ml含Carrier RNA 的Buffer L9 ,再加入500 则清或 者血浆，漩涡振荡30秒混合均匀。*如果不能及时将新鲜获得的血清或者血浆进行RNA提取，可在本步骤
5、将溶解后的标本于 -70C冻存。冻存一星期内不影响RNA的提取效率。* Buffer L9具有腐蚀性，请戴防护用品进行操作。2） 13,000 rpm离心10分钟。在一个洁净的 ml离心管中加入400 %以比水乙醇备 用。3）吸取700。离心上清转移到装有无水乙醇的ml离心管中，勿弃吸头，直接用吸头吸注两次混匀，吸取混合液进入步骤4）的操作。4）转移550。步骤3）中的混合液转移到核酸纯化柱（核酸纯化柱置于2ml离心管中）中，盖上管盖，12,000 rpm离心30秒。5）弃2ml离心管中的滤液，将核酸纯化柱置回到2ml离心管中，将 ml离心管中剩余的液体全部倒入核酸纯化柱中，盖上管盖，1200
6、0 rpm离心30秒。* 滤液无须彻底弃尽，如果要避免粘附在离心管管口的滤液对离心机的污染，可将 2ml离心管在纸巾上倒 扣拍击一次。6）弃2ml离心管中的滤液，将核酸纯化柱置回到2ml离心管中，在核酸纯化柱中加入500 l Buffer WA, 盖上管盖，12,000 rpm 离心30秒。* 确认在Buffer WA中已经加入无水乙醇。7）弃2ml离心管中的滤液，将核酸纯化柱置回到2ml离心管中，在核酸纯化柱中加入700 l Buffer WBR, 盖上管盖，12,000 rpm 离心30秒。* 确认在Buffer WBR中已经加入无水乙醇。8）弃2ml离心管中的滤液，将核酸纯化柱置回到2m
7、l离心管中，14,000 rpm离 心1分钟。* 如果离心机的离心速度达不到 14,000 rpm,则用最高速离心 2分钟。/* 请勿省略该步骤，否则可能因所纯化的核酸中混有乙醇而影响后续的实验效果。/9）弃2ml离心管，将核酸纯化柱置于一个 RNase-free的离心管中，在纯化柱 中加入3050 M Buffer TE ,盖上管盖，室温静置1分钟，12,000 rpm 离心30 秒。* 如果离心机没有防泄漏的盖子，请将离心条件改为8,000 rpm离心1分钟，以免管盖脱落而损伤离心机。10）弃纯化柱，洗脱的RNA可立即用于各种分子生物学实验；或者将 RNA储 存于-70C备用。/* 用于病毒RNA检测，适当增加模板的用量可提高检测的敏感性（终体积为 50 pl的一步法RT-PCR反应 体系中加入254洗脱的RNA作为模板，无明显的抑制效果）。1