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1、甲基化分析服务报告书甲基化分析服务报告书 1 1 样本信息样本信息 1.1. 共有 2 个 DNA 样品，样本名称参照管上的原始编号 公司编号公司编号基因编号基因编号 物种物种组织组织 样本类型样本类型 细胞细胞gDNAgDNA 溶液溶液 Wnt4-122417 Wnt4-222417 Wnt4-322417 Wnt4-422417 Wnt4-522417 Wnt4-622417 小鼠 小鼠 小鼠 小鼠 小鼠 小鼠 2 2 服务内容服务内容 DNA 检测，BSP 实验 3 3 实验内容实验内容 3.13.1 基因组基因组 DNADNA 的检测的检测 3.23.2 BSPBSP 实验实验 （1）
2、亚硫酸盐处理及纯化（QIAGEN，cat：59824） 操作步骤：严格按照试剂盒说明书操作，取基因组 DNA 1ug进行亚硫酸盐转化并纯化回收。 （2）引物的设计（加粗斜体下划线加粗斜体下划线 部分为引物位置） Tcttttccttagttgagaataccactcactgtgaatttgcttacctgcgggatctccttatcaggtgagtcagctctgaaggccccttggtgagtcagctctgaaggccccttgggaggaccggct ctgggggttggtggtggtagatgggcgggaaaggccccaccctggccgcctgatgtcagccctgttc
3、tcgggaactgagctgaaaacaagctaaca gaaacctgggaatggatgaagaaatgaggattctttctaacctttcgaagtcaccaggatgagaggggctccatccggtccccagtgggctaaacat gctagattcagctatggctactgtccacacagcacagcctggactatatgtcccaaacaaaactaacaaactaaaagaaaaaccaaacaaaactaacaaactaaaagaaaaaattcatttgtgtgatt aatatacattagtagaaaaagtcctgcc Wnt4-F：GTGAGTT
4、AGTTTTGAAGGTTTTTTG Wnt4-R：TTTTTCTTTTAATTTATTAATTTTATTTAA PCR 产物大小：312 bp （3）PCR 扩增：50L 体系 PCR 体系（50l）(Genray cat：GK8015) 2PCR Mix 上游引物（10M） 下游引物（10M） 模板 DNA 水 25l 1l 1l 2l 补至 50l 1 反应程序： 95 94 55 72 72 4min 30s 30s 40s 5min1 40cycles 1 （4）T/A 克隆与测序 PCR 产物纯化： 按照试剂盒中的产品说明操作，将目标片段割胶纯化。 （Generay，cat：GK2
5、043） 连接 T 载体： 采用 Generay 的 pTG19-T（Lot：GV6021）作为载体，按照试剂盒中的产品说明操作。 转化 采用 XL10-Gold 感受态，按照产品说明进行转化、复苏和涂板。 酶切法鉴定阳性菌落 挑取质粒送测序，具体如下： 样品编样品编克隆测序克隆测序 号号（个）（个） Wnt4-150 Wnt4-210 Wnt4-3 Wnt4-4 Wnt4-5 Wnt4-6 4 4 实验结果实验结果 15 20 20 15 4.14.1DNADNA 质量检测质量检测 a）测定样品在 260nm 和 280nm 的吸收值确定 DNA 的质量（仪器ND5000 超微量紫外可见分光
6、 光度仪） 。内容见下表 公司编号公司编号Abs260Abs260 Wnt4-1 Wnt4-2 Wnt4-3 Wnt4-4 Wnt4-5 Wnt4-6 0.3 0.465 0.556 0.446 0.646 0.443 Abs280Abs280Abs230Abs230260/230260/230260/280260/280 0.169 0.257 0.224 0.273 0.245 0.215 0.158 0.256 0.198 0.194 0.235 0.178 1.9 1.81 1.91 1.91 1.88 1.83 1.77 1.81 1.81 1.87 1.91 1.79 样品浓度样品
7、浓度 ng/ulng/ul 15.0002 23.2287 25.222 18.876 19.747 15.898 b）进行琼脂糖凝胶电泳，确定抽提 DNA 的完整性。 2 4.24.2测序结果与分析展示（测序结果与分析展示（Wnt4-1Wnt4-1） Sequence_IdentifierCpG_1CpG_2CpG_3CpG_4CpG_5CpG_6 2Wnt4-1-1.1M13-111111 3Wnt4-1-11.1M13-111011 4Wnt4-1-14.1M13-110111 5Wnt4-1-16.1M13-111011 6Wnt4-1-17.1M13-111011 7Wnt4-1-18.1M13-111011 8Wnt4-1-19.1M13-111011 9Wnt4-1-2.1M13-111010 10Wnt4-1-20.1M13-111111 11Wnt4-1-22.1M13-111111 12Wnt4-1-24.1M13-111011 3