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1、1.0目的检测食品饮料中的大肠菌群，以监测饮料的微生物状况。2.0范围适用于咖啡饮料，茶饮料等产品的大肠菌群的测定。3.0职责微生物品控员负责本文件的执行；QA 佥验工程师负责监督本文件的有效执行。4.0定义无5.0程序5.1 培养介质的准备所有培养剂必须根据制造商的说明进行制备和灭菌。它们对热很敏感，所以不能过热。培养剂应装入200 300ml的瓶内进行灭菌。容器中至少保留15%的空间。5.2 培养皿准备5.2.1 按测试内容及测试样品数量准备好平板和乳糖胆盐发酵管，另外每个测试项目加 一个发酵管作对照试验，放入灭菌釜灭菌。5.2.2 将灭菌好的发酵管和平板置于干燥箱中高温烘干。冷却待用。5
2、.3 操作步骤5.3.1 检样稀释及培养5.3.1.1 以无菌操作，将检样25g或25ml放于含有225ml无菌水的玻璃瓶内（瓶内预 置适当数量的玻璃珠），经充分振摇作成1:10的均匀稀释液。5.3.1.2 用1ml灭菌吸管吸到1:10稀释液1ml,沿管壁徐徐注入含有9ml无菌水的试 管内（注意吸管尖端不要触及管内稀释液），振摇试管混合均匀，作成1:100的 稀释液。5.3.1.3 另取1ml灭菌吸管，按上项操作顺序，作 10倍递增稀释液，如此每递增稀释 一次，即换用1支1ml灭菌吸管。5.3.1.4 由于本方法所适用的样品均要求无菌，因此只选择原液、1:10和1:100两个稀释度，分别作10
3、倍递增稀释的同时，即以吸取该稀释度的吸管移1ml稀释液于灭菌发酵管内（已按待测样品的类别和批号分别作好记号）内，每个稀释度作 三个发酵管。5.3.2 乳糖发酵试验将检验样品接种于乳糖胆盐发酵管内，每一稀释度接种三管，置 36+/-1 oC温箱 内，培养24+/-2小时，如所有乳糖胆盐发酵管都不产气，则可报告大肠菌群阴 性，如有产气者，则按下列程序进行。5.3.3 分离培养将产气的发酵管分别转种在伊红美蓝琼脂平板上，置36+/-1 oC温箱内，培养48+/-2h ,然后取出，观察菌落形态，并作革兰氏染色和证实试验。5.3.4 证实试验在上述平板上，挑取可疑大肠菌群菌落 12个进行革兰氏染色，同时
4、接种乳糖发 酵管，置36+/-1（温箱内培养24+/-2h,观察产气情况，凡乳糖管产气、革兰氏染 色为阴性的无芽胞杆菌，即可报告为大肠菌群阳性。5.3.5 报告根据证实为大肠杆菌阳性的管数，在“ GB4789.3食品卫生微生物学检验大肠菌群的测定”中查MPN佥索表，报告每100ml大肠菌群的最可能数，并将结果记录 在“微生物检验记录 FM-QA-520o6.0参考文献6.1 本文件支持纲要文件：R-QA-006 微生物监控纲要大肠菌群测定。6.2 本文件参考：GB 4789.3 食品卫生微生物学检验7.0附件/记录7.1 附件：无7.2 记录：微生物检验记录FM-QA-520修订记录修 订 次 数修订日期修订内容