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实验六、小鼠骨髓细胞染色体标本制备与观察,目的与要求,1、掌握脊椎动物骨髓细胞染色体标本制备的方法； 2、了解小鼠骨髓细胞染色体的形态和数目。,实验原理,小鼠骨髓细胞始终保持较强的分裂活性，且细胞数量较多。,秋水仙素，可以抑制细胞分裂时的纺锤体形成，使处于增殖状态的细胞停止在中期。注射到动物活体内，可以收集到较多的中期分裂相的骨髓细胞。,内容与方法,1、动物预处理：取材前34小时，腹腔注射0.01%的秋水仙素。,2、取材：处死小白鼠，剥取股骨，暴露骨髓腔，用45ml KCl冲洗骨髓腔获得骨髓细胞，定容至6ml。,3、低渗：37度恒温水浴30分钟。,4、预固定：加1mlCarnoy固定液混匀，配平，离心1000rpm/8分钟。,5、固定：弃上清，再加Carnoy 固定液至6ml刻度，悬浮，静置20分钟，离心同上。,6、制片：去上清液,加少量固定液，混匀，滴片，,7、染色：Giemsa染色10分钟,取材：椎脱臼处死小白鼠，剥取股骨。,小白鼠骨骼标本,收集细胞：,暴露骨髓腔， 反复冲洗骨髓腔获得骨髓细胞， 收集到离心管中, 定容至6ml.,滴12滴于玻片上，吹气， 在酒精灯火焰过火23次， 做记号，凉干，染色,滴片：,作业与思考题,1、绘制一个你所观察到的小鼠骨髓细胞染色体中期分裂相。 2、本实验中秋水仙素、低渗液、固定液各起什么作用？ 3、简述实验中应注意那些关键问题？,