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1、C13尿素-呼气试验,Introduction,幽门螺杆菌（Helicobacter pylori，简称H. pylori）是一种单极、多鞭毛、末端钝圆、螺旋形弯曲的细菌。在体内呈螺旋形,在体外为杆状,故名。 H. pylori长2.54.0m，宽0.51.0m,有12个弯曲,革兰阴性。H pylori是微需氧菌，环境氧要求58%，在大气或绝对厌氧环境下不能生长。 H. pylori的尿素酶极为丰富，约含菌体蛋白的15%，活性相当于变形杆菌的400倍。尿素酶催化尿素水解形成“氨云”保护细菌在高酸环境下生存。 H. pylori的全基因序列已经测出，VacA基因和CagA基因分别编码空泡毒素和细
2、胞毒素相关蛋白，专家多认为这两种蛋白的表达与胃疾病关系较为密切。,幽门螺杆菌（Hp）的危害,感染地域广泛，人群众多；全球40 岁以上的人群中有超过半数的感染Hp，发展中国家人口感染率高于发达国家。中国是Hp高感染率地区,平均感染率为58.07%，1020 岁感染已达50%以上。 具有传染性，中国家庭内传播可能是Hp 感染的主要途径。对儿童危害显著，儿童Hp感染会造成发育迟缓和营养不良，且将来胃癌的发病率也会高于成人。 与多种疾病相关。,Background,1987 年Graham 等首先报道应用稳定性核素13C 标记的尿素呼气试验检查Hp 感染, 由于它的非侵入性和无创性逐渐被重视, 尤其是
3、近年来随着质谱仪及13C-尿素价格的下调, 使13C-UBT 的应用得以推广。 用13C-尿素呼气试验（UBT）诊断Hp感染在国内也已经开展了20余年，技术趋于成熟。目前已成为根除Hp治疗后随诊观察的首选非侵入性方法。,幽门螺杆菌（Hp）的检测,幽门螺杆茵(Helicobacter pylori，Hp)感染诊断中的应用利用Hp产生尿素酶特性而设计的13C-尿素呼气试验(Urea breath Test，UBT)能反映全胃实时的Hp感染状态，而避免了由于感染灶分布不均引起的活检误差，加上已被广泛知晓的高准确度，不少学者也将13C-尿素呼气试验视为诊断胃Hp感染的“金标准”。,幽门螺杆菌检测适应症
4、,幽门螺杆菌检测方法,幽门螺杆菌检测结果的判断,C13呼气检测的优点,13C-尿素呼气试验测定Hp感染具有很高的特异性和灵敏度，目前被公认为胃部Hp感染诊断的金标准，提高Hp感染的检出率。该试验还具有非侵入性、重复性好、无放射性、无痛苦、安全、可靠、操作简单等优点，对老人、小孩、危重病人、孕产妇、惧怕胃镜检查者等特殊群体均适用，在临床中得到了最广泛应用，其操作方法简单。,ZHP型C13呼气质谱仪,我院采用北京中科科仪有限公司生产的ZHP-2001型C13呼气质谱仪。 利用13C-呼气试验的原理进行幽门螺杆菌（Hp）及肝脏功能等的检测，因具有精确、非侵入性、重复性好、无放射性、无痛苦、操作简单等
5、优点，受到了广大患者的欢迎。,丁国林,于科岐. ZHP-2001型13C呼气质谱仪的研制J. 分析仪器,2004,04:9-14.,13C,13C是一种自然稳定的同位素，被用作特殊代谢产物的标记。患者口服一定量的13C后，经过特定的复杂生化代谢过程，13C成为的13CO2的形式，并通过呼气释放出来。通过取样的形式，我们将呼出的气体进行脱水、除氮、去氧之后，分离出二氧化碳，经过毛细管直接注入质谱系统进行碳同位素分析，然后电气系统将接收到的离子流信号经过放大递交至计算机进行分析，得出最终检测结果。该过程无痛苦，无放射性，普适于孕妇和儿童等特殊人群。,尿素13C胶囊,我院采用深圳市中核海得威生物科技
6、有限公司产品（计量：75mg/粒）。 13C-尿素在胃内分布较均匀，其与胃黏膜的接触更广泛，能更全面反映整个胃黏膜Hp的感染情况。 研究认为13C-呼气试验是检测Hp现症感染的最好方法。,检测操作步骤,医生准备工作：扫描并打印患者检验条码，分别贴于3个样品管上； 患者准备工作：空腹状态最好，次之应禁食2小时以上； 操作步骤：平静吸气后向收集管内连续不间断吹气4-6s，为零时气；而后用80ml凉开水送服13胶囊，静坐20，30 min后（在此期间禁食水）再向收集管内用相同方法各吹气1次，吹气过程中嘱患者用力适度均匀，以防影响试验结果，呼气完毕后立刻旋紧采集试管盖子。 封存结果：将同一受试者的3个
7、待测样品管用送检单卷好，并用皮套勒住； 送检样品：常温避光保存，小心防压，避免样品管的破碎，并检查封签、标注。,13尿素呼气试验的原理,尿素13C呼气试验(13C-UBT)是利用Hp内源性尿素酶分解尿素的特性，以13C标记的尿素为示踪剂，经检测呼气中13CO2量，从而判定Hp在人体存在的方法。,简并实验步骤,有Hp感染的患者，其尿素酶活性增高持续时间至少1小时，13CO2排出量的峰值大约在20-30分钟出现。 为了简便，有些学者认为只收集本底和30分钟两个样品进行检测，仍然能保持试验的准确性。（也可以在30分钟时吹两管，检测其中一管，另一管备用。）,测量和计算,13C没有放射性，可以被包括质谱
8、仪(mass spectrometer)在内的多种仪器探测。 呼气试验时，呼出气体中13C的丰度决定于给予剂量、标记底物中13C的丰度以及经过代谢的13CO2的产量，其中给予剂量影响最大。13CO2呼气分析时，由于呼气中13C丰度变化非常小，常采用13CO2超量“”值来表示，计算公式为： =(13CO2/12CO2)样品(13CO2/12CO2)标准品-11000 =-本底,结果判定,即高于本底的值DAB(delta above baseline)或DOB(delta over baseline)，再根据单位时间的CO2产量得到单位时间13C剂量同收率PDR(percentage dose r
9、ecovered)和累计PDR(cumulative percent dose reoovered)，单位时间13C PDR和累计PDR通常被用于反映代谢的基本情况。 结果判断标准为：口服13C尿素后，呼气样本13C原子峰值（电压值）超过基线呼气样本5%即为阳性，也就是说： DOB值4.00.4 时，可判定受试者为Hp阳性。,13UBT的灵敏度和特异性,由于尿素13C呼气试验检测试剂可在胃内均匀分布，因此结果不受细菌点状分布的影响,具有较高的准确性。 大样本研究及荟萃分析提示：尿素13C呼气试验与组织病理结果对照比较，其灵敏性和特异性均在95%以上；而在有Hp 感染临床症状的患者中，尿素13C
10、呼气试验的检出正确率甚至可高达95 % - 100 %。,谢鹏雁,刘新光,陈绍亮,李培勇,吴靖川,严建,朱瑞森. 评价国产-13C-尿素呼气试验药盒诊断幽门螺杆菌感染的效果J. 中国临床药理学杂志,2004,06:409-411.,检测前注意事项,受试者应空腹或禁食2小时以上； 检测前不可剧烈活动，避免血液酸碱度发生变化； 吹气管应插入样品管底部，边呼气边徐徐向试管口移动； 受试者每次向试管呼气完成后，应随即盖紧管盖； 如下因素可能会影响该试验的诊断结果： 一个月内使用过抗生素、铋制剂、质子泵抑制剂等Hp敏感药物； 一周内的上消化道急性出血可使Hp受抑制，有可能造成假阴性； 部分胃切除手术可能
11、造成同位素从胃中快速排空或胃酸缺乏。,规范操作的细节步骤,呼气试管在使用前不得开启，拆开封后的药盒应尽早使用，暴露在空气中的时间不得超过30 rain，以免吸收空气中CO2而影响测量结果； 铝塑料板胶囊必须密封，以免造成胶囊潮解粘连，如胶囊破损，不得使用； 试验药盒应在4-8的干燥条件下保存，在18个月的有效期内使用； 指导患者正确进行深呼吸训练，确保标本采集的质量。,表1 C13和C14尿素呼气试验的比较,实施中需要注意的问题,个人要求治疗,健康教育,向患儿家属讲解感染幽门螺杆菌的危害性及根治Hp的意义，对于Hp 检测结果阳性的患儿，医师指导患儿用药，告知注意观察用药后反应。 向患儿及家长讲
12、解幽门螺杆菌这个菌是会传染的，必须要和家人分餐，碗筷消毒通风，饮食定时定量，避免食用硬、冷、辛辣等刺激性食物，不要喝碳酸型饮料，餐前便后洗手，避免交叉感染。 在用药期间有不适及时复诊，治疗结束停药1个月后复查Hp，如结果为阴性，则表明Hp已经根除。,护理配合,在临床检查Hp 感染的方法很多，非侵入性检查方法，13 C 呼气试验检测幽门螺杆菌感染的检查方法具有诊断Hp 感染有较高的敏感性、特异性、无痛苦、安全的优点，13 C 呼气试验无放射性，对环境无影响，适用于儿童、孕妇、乳母Hp 感染的诊断及用药后疗效观察，为了确保试验检测结果的准确性，检测中要做好患儿及家长的护理。,护理配合,针对检测阳性
13、的患者，通过发予健康宣教材料及口头指导等方法讲解抗Hp治疗的方法，督促患者及早就医，严格按医嘱要求服药。治疗结束后及时电话随访，确保治疗质量。,In summary,C13呼气试验是目前Hp感染的临床诊断标准之一。由于其敏感性与特异性优于快速尿素酶试验（RUT），适用于流行病学调查、治疗前检查及治疗后复查Hp感染状态，并用于评价Hp的根治疗效。,In prospect,13C呼气试验是一种安全、方便、灵敏、准确定量、非侵入的功能检测方法，已经应用于胃肠道和代谢功能研究。国外在临床应用方面做了上述诸方面的探索研究，国内除Hp外，其他应用领域尚未引起普遍重视，而且试剂基本以进口为主。随着各种特异标记底物的取得和商品化销售以及质谱仪的普及，呼气试验的应用范围必将进一步扩大。,Thank you!,