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1、制定日期：XXX （广州）有限公司编号：修定日期：修改版本号：实施日期：题目：恒温检测程序本份页他：共2页制定部门：品控部贞他：2-1制核定准审 核蛋白质检验（七）一、原理：凯氏定氮法是一个消化管中样品首先与浓硫酸作用，加热消化，并加入适 量的硫酸钾以升高溶液的沸点，加入适量的硫酸铜作催化剂。由于硫酸的 氧化作用，氮转化为硫酸镂。然后加入浓NaOH,蒸储，释放出的氮用标准 硫酸溶液吸收，再把吸收液用返滴定法测量含量。二、仪器：1、 Tecator 消化器 D 5 6 ;2、 凯氏蒸储装置；3、 4 0 0 ml 烧杯。三、试剂：1、 浓硫酸；2、 催化剂：9份无水硫酸钾与1份硫酸铜混和；3、
2、5 0%（W/V） NaOH 溶液；4、 标准0 .1NH2SO4溶液；5、 标准0 .1N NaOH溶液；6、 混合指示剂：1份0 .0 4澳甲酚绿的异丙醇溶液及1份0 .1%（W/V）甲基红的乙醇溶液混和;7、 锌粒；8、 0.04 %澳甲酚绿的异丙醇/水(2 0 % V/V)溶液。四、取样量：样品中氮量须在0 .0 0 5克至0 .04克范围内，以多于0.0 2克为宜。由 于有泡沫产生，下列产品最适宜的用量为：豆奶5 ml;酱油及半制品2 ml五、操作：1、 精确加入5 ml样品于消化管中，加入约4克催化剂，缓慢加入1 0 ml浓硫酸；2、 充分摇匀；3、 在2 0 3 C加热消化样品1
3、5 2 0分钟，样品变成绿色后，将温度设 至4 0 1 C,继续消化1小时，然后立即将消化管移到铁架上，防止消化液结 晶，冷却；4、 往消化管中加入蒸储水至约1/3体积；5、 加入1粒锌粒，并迅速装好蒸储装置；6、 定量移取2 0 . 0 ml 0 . 1 NH2SO4溶液至接收瓶，滴入数滴混合指示剂(若是牛奶样，则移取3 0 ml 0 . 1 NH2SO4溶液)；7、 全程拉下碱液板手，缓慢加入5 0 ml 5 0 % NaOH溶液；8、 通入蒸气，加热直至接收瓶内已接收大约1 5 0 ml的蒸储液；9、 用0 . 1 N NaOH滴定收瓶，直至由粉红色变成绿色为终点。六、计算：1.4 X(
4、NXV N' x V' ) X 5 . 7 1总氮量(, W/V)=V o其中：N 标准H2SO4的当量浓度；单位：N;V标准H2SO4的体积；单位：ml;N 标准NaOH有当量浓度；单位：N;V' 标准NaOH的滴定体积；单位：ml;V 0 样品体积；单位：ml；七、注意事项：1、 在消化过程中，首先应缓慢加热，直至无气泡生成后才用强热；2、 由于锌与NaOH反应会生成氢气，因此会产生大量气泡，可防止在蒸储过程中产生暴沸；3、 在蒸储过程中，接收瓶的接头须插入硫酸溶液中，通过提供足够的冷却水及控制蒸储速度来避免倒吸；4、 在蒸储前先把凯氏蒸储装置内的水加热至沸。方法是用一支空的消化管及烧杯安装好蒸储装置，拉下蒸汽板手，等到有蒸储液漏出是时即可停止。5、 蒸储完毕后，关闭电源，打开凯氏蒸储装置后的排水阀进行排水，排水结束后把阀关闭。6、 转化为蛋白质含量，必须乘以下表中所给出的各物质的转化系数：样品转化系数豆奶6.25 （依新加坡食酱油6.25品标准而定）小攵制口口麦片5.83除麦片外的面粉5.70通心粉5.706.31稻米5.95大麦、燕麦、裸麦5.83玉米6.25大豆5.715.71(GB5009.5-85)牛奶及奶制制品6.38胶质5.55其它食物6.25