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1、专题2 /微生物的培养与应用课题微生物的实验室培养晨背ENBEIGUANJIANYUJU1. 培养基中含有水、无机盐、碳源、氮源和生长因孑等营养物质。2. 实验室常用的灭菌方法有灼烧灭菌、干热灭菌和高压蒸汽灭菌等。3. 固体培养基的配制过程为:计算一称量一溶化一灭菌一倒 平板。4. 平板划线法和稀释涂布平板法是微生物接种的常用方法。5消毒的目的是杀死物体表面或内部一部分对人体有害的微生物, 灭菌则是杀死物体内外所有的微生物，包括砲子和芽范。知识点一培养基及无菌技术自複教韵齐基敲1.培养基 (1)概念：人们按照微生物对一营养物质一的不同需求,配制出的供其生长繁殖的营养物质O(液体培养基(2)种类
2、(加入琼脂等凝固剂)体培养基:微生物在上面可形成菌落(3)营养成分：水、无机盐、碳源、氮源，此外还 要满足微生物生长对PH、特殊营养物质及氧气的要求。2. 无菌技术(1) 目的：获得纯净培养物。(2) 关键：防止外来杂菌的入侵。(3)不同对象的无菌操作方法连线:方法对象 化学药齐 高压蒸汽灭菌类型II培养皿巴氏消毒紫外灭I 灼烧灭菌 干热灭消I 接种针(环)DI 操作者双手N水源地Si思考探究S I KAO TAN J I U|F面是察氏培养基（培养霉菌所用）的主要成分，请根据下述培养基，回答下列问题:蔗糖20 gNaNO33gK2HPO4lgKC1lgMgSO4-7H2O0.5 gFeSO4
3、0.01 g琼脂20 g水定容至1 000 mL(1)该培养基根据物理性质划分应是什么培养基？为什么?提示：固体培养基。因为该培养基加入了凝固剂琼脂。(2)该培养基包含微生物生长和繁殖所需要的几类营养物质？分别 是什么？提示：4类物质。分别是碳源、氮源、无机盐和水。蔗糖提供的是哪类营养物质？ NdNOs提供的是哪类营养物质?提示：蔗糖提供的是碳源。NaNOs提供的是氮源和无机盐。(4)在提供上述几种主要营养物质的基础上，培养基还需要满足微生物所需要的哪些条件?提示：满足微生物生长对pH、特殊营养物质以及氧气的需要。2.探讨培养基、培养皿、接种环、实验者的双手、空气和牛奶所釆用的灭菌或消毒方法。
4、提示：分别为高压蒸汽灭菌、干热灭菌、灼烧灭菌.化学消毒、紫外线灭菌、巴氏消毒法。3. 消毒与灭菌的相同点与区别分别是什么?提示：消毒是杀灭病原微生物和有害微生物，并不要求杀灭一切活的微生物；而灭菌则是杀死物体内外所有微生 物，包括芽抱和抱子。線雄名呻解疑璀1.培养基的成分营养物质定义 作用主要来源碳源凡能提 供所需 碳元素 的物质构成生物体的 细胞物质和一 些代谢产物， 有些是异养生 物的能源物质无机化合物：co2> NaHC>3等；有机化合 物：糖类、脂肪酸、花 生粉饼、石油等氮源凡能提供所需氮元素的物质合成蛋白质. 核酸以及含氮 的代谢产物无机化合物：n2> nh3、鞍盐
5、、硝酸盐等；有机化合物：尿素.牛肉蛋白腺等营养物质定义生长因子生长必不可少的微 量有机物水在生物体内含量很 高无机盐为微生物提供除 碳、氮以外的各种 重要元素，包括大 量元素作用主要来源酶和核酸的组成成分维生素、 氨基酸、 碱基等不仅是优良的溶剂而 且可维持生物大分子 结构的稳定外界摄入细胞内的组成成分， 生理调节物质，某些 化能自养菌的能源， 酶的激活剂无机化合 物2.实验室常用的消毒和灭菌方法项目概念常用方法消毒使用较为温和的物理或化学方法仅杀死物体表面或内部一部分微 生物（不包括芽抱和抱子）煮沸消毒法：在100-C 煮沸56 min巴氏消毒法：在70 75 °C 煮 30 mi
6、n 或在80 °C煮15 min化学药剂消毒法紫外线消毒法：紫外灯照射30 min一般物品一些不耐高温的液 体，如牛奶如用酒精擦拭双手、用氯气消毒水源等接种室、操作台项目概念常用方法应用范围灭菌使用强烈 的理化因 素杀死物 体内外所 有的微生 物（包括芽灼烧灭菌：酒精灯火焰CT干热灭菌：在160170 °C 下灭菌12h抱和抱子）高压蒸汽灭菌：在压力为100 kPa,温度为121 C的条件下，灭菌1530 min接种工具的灭菌和试管口的灭菌玻璃器皿、金属工具的灭菌培养基及容器的 灭菌09知识点二大肠杆菌的纯化培养自養教材务基舷1. 制备固体培养基计算依据牛肉膏蛋白腺培养基m
7、配方比例，计算各成分的用量牛肉膏比较黏稠，可用称量纸称称量取，牛肉膏和蛋白腺都易吸潮， 称取的动作要迅速，称后及时盖 上瓶盖溶化牛肉膏和称量纸+水亠取 出称量纸一加蛋白豚和氯 化钠一 加琼脂（注意:不断 用玻璃棒搅拌，防止琼脂糊底 而导致烧杯破裂）一 补加蒸 憾水至100 mL灭菌培养基:高压蒸汽灭菌 培养皿干热灭菌倒平板待培养基冷却至50 °C左右时， 在酒精灯火焰附近倒平板2. 纯化大肠杆菌 方法：3! 平板划线法:通过接种环在琼脂固体培养基表面连续 划线的操作,将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基的表面。 稀释涂布平板法:将菌液进行一系列的梯度稀释,然 后将不同熨甦的菌液分别涂布到
8、琼脂固体培养基的表面，进行培养。(2)鉴定：将接种后的培养基和一个未接种的培养基都 放入37 °C恒温箱中,培养12 h和24 h后，分别记录观察。(3)菌种保存：对于频繁使用的菌种，可以釆用临时保藏法:对于需 要长期保存的菌种，可以釆用甘油管藏法。S I KAO TAN J I U1.培养基灭菌后，需要冷却到50 C左右，才能用来倒平板，你用什么办法来估计培养基的温度?提示：可以用手触摸，感觉上以刚不烫手为准。2如果需要调节培养基的pH,应在哪一步骤后进行?提示：溶化后,灭菌前3在用平板划线法接种大肠杆菌时，第一次划线前、每次划线前及划线操作结束后，都要灼烧接种环，请分析其目的分别
9、是什么o提示：第一次灼烧每次划线前灼烧划线结束灼烧目 的避免接种环上 可能存在的微 生物污染培养 物杀死上次划线结束 后接种环上残留的 微生物，使每次划 线的微生物来自上 次划线末端杀死接种环上 残留的菌种, 避免细菌污染 环境和感染操 作耆4.在纯化大肠杆菌操作中，如何验证培养基灭菌 是否彻底？提示：将接种后的培养基和一个未接种的培养基， 都放在37匸恒温箱中培养，观察并记录结果。線雄名娜解疑璀1.微生物培养中有关实验操作的注意事项(1)倒平板操作： 培养基灭菌后，需冷却至50 °C左右时才能倒平板，原 因是琼脂在44 °C以下凝固。 培养皿打开一条稍大于瓶口的缝隙，不要
10、完全打开。 整个操作过程要在酒精灯火焰旁进行，避免杂菌污染。 平板冷凝后要倒置的原因：防止皿盖上的冷凝水珠落入 培养基，造成污染。 若倒平板时，培养基溅在皿盖和皿底之间的部位，这个 平板应丢弃。(2)平板划线操作： 第一次划线前及每次划线之前都需灼烧接种环灭菌,划线操作结束仍需灼烧接种环o 灼烧接种环之后，要等其冷却后才能伸入菌液温度太高杀死菌种。 划线时最后一区域不要与第一区域相连。 划线用力要大小适当，防止用力过大将培养基划破。稀释操作时：每支试管及其中9mL水、移液管均需灭菌；操作时，试管口和移液管应在离火焰12 cm处。(2)涂布平板时：稀释涂布平板的操作比较复杂，且各个细节均需无菌操
11、作，应特别注意: 酒精灯与培养皿的距离要合适o 吸管头不要接触任何其他物体。 吸管要在酒精灯火焰周围使用O3.平板划线法和稀释涂布平板法的比较项目优点平板划线 分离法可以观察菌落特 征，对混合菌进 行分离稀释涂布 平板法可以计数，可以 观察菌落特征缺点适用范围不能计数适用于好 氧菌吸收量较少、较 麻烦，平板不干 燥效果不好，容 易蔓延适用于厌氧菌和兼性厌氧菌4.两种菌种保存方法的比较项目临时保藏法甘油管藏法适用对象频繁使用的菌种CTI长期保存的菌种培养基类型固体斜面培养基液体培养基温度4 °C-20 °Ci落长成后于冰箱中将培养的菌液与等方法缺点保存，每36个月将 菌种从旧
12、的培养基转 移到新鲜培养基上 菌种易被污染或产生体积灭菌后的甘油混合均匀后于冷冻 箱内保存培养基的成分考向例1下列描述正确的是（）A. 同一种物质不可能既作碳源又作氮源B. 除水以外的无机物仅提供无机盐C. 凡是碳源都能提供能量D. 有些无机氮源也能提供能量解析对异养型微生物来说，含c、H、O、N的化合物E是碳源，又是氮源。如蛋白陈既是碳源又是氮源和能源，葡 萄糖是碳源同时又是能源。除水以外的无机物种类繁多，如CO?和2是无机物，但也是某些微生物的碳源和氮源。CO?是 光能自养细菌的碳源，但不能提供能量。NaHCOs可作为自养 型微生物的碳源和无机盐。硝化细菌所利用的氮源是无机氮源 氨，同时氨
13、也为硝化细菌提供用于化能合成作用的能源。答案D归纳拓展几种微生物的营养能量来源微生物类型碳源 氮源能源 举例化能异养型化能自养型糖类、蛋白 质等有机物 co蛋白质等有机物大肠杆菌光能自养型CO2nh3NH、NO等nh3光能硝化细菌共生固氮微糖类等有生物机物n2有机物蓝藻根瘤菌自生固氮微生物CO2N2光能固氮蓝藻考向二4纯化大肠杆菌的方法例2下列有关平板划线的操作，正确的是（）A. 使用已灭菌的接种环、培养皿，操作过程中不再灭菌B. 打开含菌种的试管需通过火焰灭菌，取出菌种后需马 上塞上棉塞C. 将沾有菌种的接种环迅速伸入平板内，划35条平行 线即可D. 最后将平板倒置，放入培养箱中培养解析在培
14、养基上接种时，一定要做到无菌操作，以防止 杂菌污染影响实验或研究的结果。微生物无处不在，包括空气中 也充满了各种微生物，所以无菌操作显得很困难，但在酒精灯火 焰附近约10 cm的四周为无菌区，因而菌种试管和待接种试管管 口不能离开火焰附近，接种环.棉塞也不能离开火焰附近。接种 完毕之后为了防止菌体污染，要在火焰上灼烧管口和接种环。为 防止皿盖上的水珠落入培养基造成污染，应将平板倒置。答案D易错提醒要建立有菌观念，接种用具、器皿、空气中都充满了微生物，都有被污染的可能，必须严格地消毒灭菌。同时，在实验室中,不可吃东西、喝水,离开时一定要洗手，以防被微生物感染。使用过的培养基要经过高 压蒸汽灭菌后
15、才能丢弃，以免污染环境。1.僵璧基舷畝国下列叙述正确的是A.培养基是为微生物的生长繁殖提供营养的基质B.培养基只有两类：液体培养基和固体培养基C.固体培养基中加入少量水即可制成液体培养基D.微生物在固体培养基上生长时，可以形成肉眼可见的单个细菌解析：培养基是人们按照微生物对营养物质的不同需求，配制 出的供其生长繁殖的营养基质。培养基的种类根据划分依据的 不同而不同，如根据化学成分可分为天然培养基和合成培养 基。固体培养基是液体培养基添加凝固剂形成的，其他成分均 相同。单个的微生物形体微小，肉眼无法看到，必须借助仪器 才能看到，在固体培养基上用肉眼观察到的是一个菌落。答案：A2.下列操作错误的是
16、A.用酒精擦拭双手B.用氯气消毒水源C.实验室用紫外线进行消毒D.玻璃器皿（吸管、培养皿）用酒精直接擦拭即可达到彻 底灭菌的目的解析：玻璃器皿、金属用具等耐高温、需要保持干燥的物品，应采用干热灭菌法进行灭菌，而用酒精直接擦拭达不到彻底灭菌的目的。答案：D3关于牛肉膏蛋白陈固体培养基的制备，叙述错误的是A.()操作顺序为计算、称量、溶化、倒平板、灭菌B.将称好的牛肉膏连同称量纸一同放入烧杯C.待培养基冷却至50 °C左右时进行倒平板D.等平板冷却凝固约510 min后将平板倒过来放置解析：制备牛肉膏蛋白陈固体培养基时，其操作顺序为计 算一称量一溶化一灭菌一倒平板；由于牛肉膏比较黏 稠，
17、称量时可连同称量纸一同放入烧杯；待培养基冷却至50UJ匸左右时，在酒精灯火焰附近倒平板；平板冷凝后，应将平板 倒过来放置，以防止皿盖上的水珠落入培养基，造成污染。答案：A4.某研究小组从有机废水中分离微生物用于废水处理。下列叙述正确的是A.培养基分装到培养皿后进行灭菌B.转换划线角度后需灼烧接种环再进行划线C.接种后的培养皿须放在光照培养箱中培养貝D.培养过程中每隔一周观察一次 解析：培养微生物过程中应先灭菌再倒平板；每一次划线前都要进行接种环的灼烧灭菌；接种后的培养皿应在恒温培养箱中进行培养；培养过程中观察间隔的时间一般不超a 24 ho答案:B賈淋弁嚴裡中A袈黛一«奧申菇給总宇、 境鎊簸淋明矽孩。