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1、实验1叶绿素a、b含量的测定（乙醇）（分光光度法）一、目的学会Chia、b含量的测定方法，了解叶片中 Chia、b的含量。二、材料用具及仪器药品菠菜叶片、721分光光度计、天平、研钵、剪刀、容量瓶（ 25ml）、漏斗、滤纸、乙醇（95%三、原理叶绿素a、b在波长方面的最大吸收峰位于665nm和649nm,同时在该波长时叶绿素a、b的比吸收系数K为已知，我们即可以根据Lambert Beer定律，列出浓度 C与光密度D之间的关系式：D665=83.31Ca+18.60C b .D649=24.54Ca+44.24 C b .(2)（1）（2）式中的D665、D649为叶绿素溶液在波长 665nm
2、和649nm时的光密度。 为叶绿素a、b的浓度、单位为每升克数。82.04、9.27为叶绿素a、b在、在波长665nm时的比吸收系数。16.75、45.6为叶绿素a、b在、在波长649nm时的比吸收系数。解方程式(2)，则得：G=13.7 D 665 5.76 D 649 G=25.8 D 649 7.6 D 665 (4)G=C+Q=6.10 D 665+20.04 D 649(5)此时，G为总叶绿素浓度， G、CB为叶绿素a、b浓度，单位为每升毫克，利用上面（3） （ 4） （5）式,即可以计算叶绿素 a、b及总叶绿素的总含量。四、方法步骤1. 称取0.05克新鲜叶片，剪碎，放在研钵中，加
3、入乙醇1ml共研磨成匀浆，再加 5ml乙醇，过滤,最后将滤液用乙醇定容到10ml。2 取一光径为1cm的比色杯，注入上述的叶绿素乙醇溶液，另加乙醇注入另一同样规格的比色杯中， 作为对照，在721分光光度计下分别以 665nm和649nm波长测出该色素液的光密度。计算结果：叶绿素 a 含量(mg/g. FW) =cA 乂 10 x 110000.05叶绿素b含量（mg/g.FW） =cb10100010.05叶绿素总量（mg/g.FW)=G10 11000 0.05五、实验报告计算所测植物材料的叶绿素含量。六、思考题1、分光光度法与一般比色法有何异同？2、 叶绿素a、b在红光和蓝光区都有一最大吸
4、收峰值，能否用蓝光区的最大吸收波长进行叶绿素a、b的定量分析，为什么？实验2生长素对根芽生长的不同影响一、原理生长素包括植物体内产生的吲哚乙酸及人工合成的化学试剂萘乙酸、2,4 - D等，均有刺激植物生长的作用。如促进细胞的生长与分化，加速根、芽的伸长、促进果实的形成与种子的萌发等。但不同浓度作用 不一样，一般来说，在浓度小或者用量少时有刺激生长的作用。在浓度大或者用量过多时，则抑制生长， 甚至会导致植物死亡。不同器官和不同位置的组织对生长素的反应也不一样，如刺激芽生长的浓度比刺激 根生长的浓度要大些。二、仪器及试剂（1）培养皿 （9cm）（ 2）移液管 （0.1ml ； 10ml）（ 3）1
5、0ppm 萘乙酸（4）滤纸（7cm）三、实验步骤1、洗净、烘干五套培养皿，在皿的边缘贴上标签，分别标明（1） 10ppm ；（ 2） 10-1ppm（ 3）10-3ppm（ 4） 10-5ppm（ 5）蒸馏水；2、 在（1）皿中用10ml移液管加入10ppm萘乙酸溶液10ml ；3、在（2） （ 5）皿中各加蒸馏水 9.9ml;4、 用0.1ml移液管从（1）皿中吸取0.1ml萘乙酸溶液加入（2）皿充分混匀后，再从（2）皿中吸取 0.1ml加入（3）皿中，如此继续稀释至（4）皿，即成各皿所标志浓度，最后从（4）皿吸出0.1ml弃去。5、在每个培养皿中加入洁净的滤纸两张，纸上均匀排放大小相似而发
6、芽一致（刚露白点）的水稻种 子10粒，加盖后放在室内。6、35天后，分别测量不同处理中萌发种子根、芽的长度。并将实验所测结果记录于下表，试比较 不同浓度的萘乙酸溶液对于水稻幼苗根、芽生长的影响（促进或抑制）不同浓度萘乙酸对水稻根芽生长的影响浓度（ppm）对照10-510-310-110平均根长（cm）平均芽长（cm）根为对照芽为对照备注：1、 水稻种子的萌发：在 30C下浸种2 3天，然后在30C以下保湿催芽至露白点（约 1 2天）。2、 1000ppm母液的配制：在分析天平上称萘乙酸0.1克用95 %酒精少许将其溶解后，倒入100ml容量瓶中，用蒸馏水定容至刻度。3、 10ppm萘乙酸溶液的
7、配制：用移液管吸取母液1ml，加蒸馏水定容于100ml容量瓶中。四、注意事项1、生长素浓度要尽量配制准确。2、试验中要防止生长素污染。五、思考题：在进行生长素实验时，为什么要用NAA代替IAA ?实验3植物叶片光合作用的测定（干重法）一、原理一般来说，植物叶片所处的内外因素相同时，它们彼此间光合产量也势必相等，这样在对称的叶片上，假设叶片两边所处条件相同，则两侧的光合产量也相等，因此，先测一半叶的单位面积的干重，待进行一 定时间的光合作用后，再测另一半叶的单位面积干重，二者之差，加上同时吸收消耗及运出部分的重量， 即为该时间内的光合产量。二、仪器及试剂（1）小刀或剪刀（2）黑布袋（3）纱布 （
8、4）钻孔器 （5）小标签 （6）干燥器（7）铝盒（8）胶塞（9）分析天平（10）烘箱 （11） 5%三氯乙酸三、实验用品1、样品的选择：在橡胶树或榕树上选中上部老化叶蓬的中间叶片，所选的叶在实验期间须不受遮荫 且光照良好，选妥以后在半片叶上，写明编号（光 1、光2、光3）。2、用三氯乙酸涂叶柄、叶脉；叶柄多涂几次。注意三氯乙酸不要涂到叶肉上。3、剪取样品：叶柄处理完毕，剪下未编号的半叶，夹于湿纱布中，并在叶片上编号（暗1、暗2、暗3）,置于黑布袋中取回。4、待留在树上的半叶进行 6-7小时光合作用后，将其剪下置于黑布袋内取回。5、 称重比较：将光、暗两种叶片，用钻孔器打取小圆片各 40片，注意
9、不要打到粗的叶脉。 分别将“光” 和“暗”两种不同处理了的叶片放入铝盒中，在85C下烘干5小时，取出，放入干燥器中，冷却后，分别 在天平上称重，铝盒和叶片的重量减去铝盒重量，即为叶圆片的重量。6、注意事项：（1）选择样片时，要注意生理条件一致，对称性好。（2）在光合期间保证有阳光照到选取的样本叶片。四、计算：1 1真正的光合强度 二干重增长（mg）-1.5（mgCO2/hr/dm2）时间叶面积五、实验作业记录实验结果并解释之。六、思考题1、阻碍光合产物外运的方法有哪些？这些方法对测定结果有何影响？为什么？2、什么是净光合强度？什么是总光合强度？该实验属于哪一类？为什么？3、 目前在实验室内，用
10、于测定光合强度而灵敏度较高的方法有哪些？其原理是什么？（列举2-3种）4、根据半叶法原理，如果让你设计一个实验来测定植物叶片呼吸强度，该如何进行？（写出简要步骤）实验4用CO?排出法测定呼吸强度一、原理植物进行呼吸作用，可通过单位时间内所吸收的O2或放出的CO2来测定。本实验是把植物材料置于密闭系统中，用抑制浓度和数量的Ba（OH） 2作为植物呼出的 CO2吸收基质，然后再用草酸滴定 Ba（OH）2的剩余量，其反应如下：Ba（OH） 2+ CO2 BaCO3（ + H2O （1）O OC/Ba（OH）2+（ COOH ） 2 Ba<J +2出0 O OC'CO2 量。同时作一空白
11、对照，二者的差数，即为呼吸作用放出的、仪器及试剂（1）大红花（2）广口瓶（3）橡胶瓶塞（带孔、带钩）（4）线（5）小铁钩（6） 0.05mol/L氢氧化钡溶液（7） 0.05 mol/L草酸溶液（8）酚酞指示剂三、实验步骤（一）空白实验：准确地称取25毫升0.05mol/L Ba（OH） 2溶液于广口瓶中，随即塞紧瓶塞，充分摇动几分钟，使瓶内 CO2被Ba（OH）2吸收，接着拔去瓶塞上的小橡皮塞，加入1 2滴酚酞指示剂，然后将滴定管插入小孔中，用 0.05mol/L （COOH ） 2滴定致红色刚退为止，记下草酸的消耗量。（二）呼吸强度的测定：先将瓶盖上小孔用纸帖好，称取大红花1朵，用线扎住，
12、挂于瓶塞钩上，长度适中，而后，装入 25毫升0.05mol/LBa（OH） 2溶液到广口瓶中，放入大红花，随即塞紧瓶塞，并记录时 间，同时摇动瓶子，待40-50分钟后，取出植物材料再盖紧瓶塞，与空白试验同样，分别加入指示剂并用草酸滴定，记下草酸的消耗量。四、计算1 1 呼吸强度（mg/100g为鲜重小时）=（A-B） M Ba（OH）2 44100W T注：A为对照草酸的消耗量 ml、B为呼吸瓶草酸的消耗量 ml、44为CO?时的摩尔数W为呼吸的材料重量（g）、T为净呼吸的时间（小时）实验5植物组织中自由水和束缚水含量的测定一、原理植物组织中的水分是由被胶粒所固着的束缚水以及不被胶粒所固着的自
13、由水两部分所组成。束缚水不易蒸发和结冰，不能转为溶剂，也不易被夺取。所以当植物组织被浸入较浓的糖溶液中脱水，一定时间后 仍未被夺取的水分为束缚水，而被夺取的水分作为自由水。自由水的量可根据所加糖液浓度的降低量来计 算。再由植物组织的总含水量减去自由水量，即可求得束缚水量。植物体内自由水束缚水含量及其比值率与植物的生长及抗性有密切关系。自由水较多时，代谢活动常 较强，生长速度也较快，但抗性往往降低。而束缚水含量多时，则情况相反，所以自由水与束缚水含量往 往作为植物抗性生理的一个指标。二、仪器与药剂（1）阿贝折射仪或糖量计（2）滤纸 （3）烘箱（4）称量瓶 6个 （5）天平 1/10000（6）移
14、液管 5ml、10ml、25ml（7）钻孔器 （8）菜心叶片（9） 60%蔗糖溶液三、实验步骤1、取铝盒两个，洗净，烘干，称重备用。2、取待测样品、快速剪碎，分另U放于两个已知重量的铝盒重，盖上盖子以免水分蒸发。3、 在天平上称重，记录后，1号盒置于100 105C烘箱中烘干至恒重，以计算含水量占鲜重的百分 数。4、 用5ml移液管吸取60%的蔗糖5ml，加入2号盒中摇匀测糖百分数 B1，然后加盖后再在天平上称 重，以求得所加糖液重量B,并摇动盒中溶液，使与样品混和均匀，放于荫凉处30分钟，其间不时摇动。5、用滴管吸取2号瓶中上层透明的溶液，滴一滴在折射仪棱镜（或糖量计）的毛玻璃上，旋紧棱镜，
15、在20C下测定此浸出液的含糖百分数B2及原来糖液的百分数 B1 （蔗糖溶液的原始浓度 t必须在折射仪上测得）。6、计算：按下式计算植物样品中自由水含量。P _B(B1B2)B2><Wf式中：3为自由水含量B为加入样品中蔗糖溶液重B1为原蔗糖溶液浓度百分数B2 为加样放置一段时间后糖溶液的浓度百分数Wf 为植物样品鲜重求得自由水含量后，即可根据下式求出束缚水含量 束缚水含量=组织含水量-组织中自由水四、实验作业测定同一植物不同品种的自由水和束缚水含量，实验重复三次，把结果填入下表:植物组织自由水和束缚水含量测定记录表植物样品编号样品鲜重g样品干重g糖溶液重量g浸叶前蔗糖浓度自由水含量束缚水含量自由水含量/束缚水含量五、思考题测定自由水和束缚水含量有何意义?