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1、绿脓杆菌检测方法一、基本原理绿脓杆菌是革兰氏阴性杆菌，具有产生绿色色素和氧化酶等生化实验特征，因此，可利用选择性培养基培养、菌体检验和生化试验进行鉴定。二、主要设备和材料包温培养箱、显微镜三、培养基和试剂NAC液体培养基、NAC琼脂平血、普通营养琼脂平血、糖发酵培养基、 尿素培 养基、 西蒙氏柠檬酸盐培养基、硝酸盐培 养基、 营养明胶、氧化酶试剂。四、检测程序NAC液体培养基37 C 24h有绿色色素和菌膜室温放置至 72h有绿色 色素和菌膜产生无绿色色素、有菌膜氧化酶试验革兰氏染色镜检报告革兰染色镜检生化试验半固体动力试验氧化酶试验42C生长试验五、操作步骤1. 采样采取回盲部内容物、粪便或
2、病灶组织、分泌物。2. 分离培养将已接种的NAC液体培养基置37C包温培养箱中培养24h后观察生长情 况，对未产生绿色色素者转种丁 NAC琼脂平也，37C包温培养24h。3. 鉴定3.1生长特性及菌落特征绿浓杆菌在NAC液体培养基中均匀浑浊生长、有菌膜、大部分菌株可在培 养液上半部形成绿色色素;在 NAC琼脂平也上形成扁平，边缘不齐呈锯齿状， 23mm的菌落，大部分菌落可产生绿色色素而致使培养基呈绿色，部分菌株需延长培养时间方可产生色素。3.2菌体特征革兰阴性杆菌，菌体长短不一。3.3氧化酶试验阳性被检菌为革兰阴性杆菌，氧化酶阳性及产生绿色色素，可报告检出绿脓杆菌。3.4生化试验对不产生绿色色素的菌应做如下鉴定，见表 1。表1绿脓杆菌的主要生化特性葡萄糖木糖乳糖蔗糖枸椽酸盐尿素明胶液化 靛基质硫化氢 硝酸盐还原产气+ 一 +/一 + 一 一+：阳性； 一：阴性； +/ -：多数菌株阳性3.5半固体动力试验阳性3.6 42 C生长试验 阳性4.结果报告凡符合上述各项检测结果者做出阳性报告，不符合者做出阴性报告。