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1、实验七 黄连中盐酸小篥碱与掌叶防己碱的提取分离及鉴定黄连为毛直科黄连属植物黄连(coptis chinensis Eraneh )、三角 叶黄连(coptis deltoidca C . Ycheng et Hsiao )或云连 (coptiteetoidesC.Y .cheng )的干燥根茎。黄连具有清热燥湿、清心除烦，泻火解毒的功效。黄连的有效成分主要是生物碱，已分离出的主要生物碱有小璧碱(berberine )、掌叶防己碱(palmatine )、黄连碱(jatrorrhizine )等。其中小璧碱含量最高，可达10%左右，是以盐酸盐的状态存在于黄连 中。小璧碱有很强的抗菌作用，已广泛地
2、应用于临床，掌叶防己碱也 作药用，其抗菌性能和小璧碱相似。目的要求1 .学习和掌握水溶性生物碱的提取方法。2. 学习和掌握生物碱的柱色谱分离方法。3. 学习和掌握生物碱的化学检识及薄层色谱的鉴定方法。实验原理小璧碱常以季铉碱形式存在，碱性强(pka11.53 ),能溶于水中， 其水溶液有三种互变形式。醛式(黄色)小璧碱为黄色针状结晶，mp为145 C,游离的小璧碱能缓缓溶于 水(1: 20)及乙醇中(1: 100),易溶于热水及热醇，难溶于乙酬， 石油酬、苯、三氯甲烷等有机溶剂，其盐在水中溶解度很小，尤其是 盐酸盐。盐酸盐为l: 500，枸椽酸盐1: 125,酸性硫酸盐1: 100, 硫酸盐l
3、: 30,但在热水中都比较容易溶解。O小栗碱（黄连素）掌叶防己碱又称巴马亭，为黄色结晶，溶于水、乙醇、几乎不溶于 三氯甲烷、乙酬等有机溶剂。盐酸掌叶防已碱为黄色针状结晶，并有 强烈的黄色荧光。易溶于热水或热乙醇，在冷水中的溶解度也比盐酸 小璧碱大。本实验是利用小璧碱和掌叶防己碱的硫酸盐在水中溶解度大的性 质，用硫酸水提取出来总生物碱，再利用其盐酸盐难溶于水及盐析作 用，使生物碱盐析出，以除去水溶性杂质。再利用两种生物碱极性不 同，采用柱色谱分离。实验内容一、提取分离黄连粗粉50g加 0.3% H2SO4500ml，浸渍 20 分钟煎煮30分钟，滤过药渣疽液加石灰乳调PH值至中性'放置1
4、0分钟，抽滤滤液加HCl调PH23加滤液体积45%的NaCl，放置30分钟，抽滤沉淀滤液（主要含小栗碱、掌叶防己碱、黄连碱等生物碱）加200ml水加热至澄明趁热抽滤1F滤液放置、抽滤V沉淀干燥（80C以下）用少量乙醇加热溶解拌少量硅胶H （180目），挥尽乙醇通过干柱色谱以 CHCl 3-MeOH-冰 HAc （7: l: 2）洗脱切割色带+不同色带46份（进行TLC检识）二、生物碱类检识1 .化学检识：（1）丙酮加成反应：取样品0.05g ,溶于50ml热水中，加入10% NaOH溶液2ml，混合均匀后，于水浴中加热至50 C，加入丙酮5ml, 放置，即有柠檬黄色结晶析出。此反应可用于原小璧
5、碱型季铉生物碱的鉴别(2)漂白粉显色反应：小璧碱酸性水溶液中加漂白粉(或通入氯 气)，溶液即变樱红色。2. 薄层色谱检识吸附剂：硅胶G对照品：盐酸小璧碱甲醇溶液样品：不同色带的甲醇溶液展开剂：CHCls-MeOH-冰 HAc (7: 1 : 2)检视：先在紫外灯光(365nm)下观察荧光，再喷改良碘化铉'钾 试剂。实验说明及注意事项1. 以硫酸盐代替盐酸盐，可增加生物碱的浸出量。2. 盐析最佳用量为45%。3. 干柱色谱是指用一种洗脱剂进行一次洗脱的分离方法。凡能用 TLC分离的混合物，把TLC条件直接用在干柱上，可迅速获得制备性 分离。简单讲干柱色谱是把吸附剂按干法装在柱中，欲分离的混合物 吸着在干柱的顶端，用溶剂洗脱，待溶剂达到柱底为止。以荧光定性或以化合物在薄层上的Rf值推定位置，根据各个成分的位置进行分割， 各段以有机溶剂提取，即将各成分加以分离。思考题1.根据小璧碱的性质，除用硫酸水溶液提取外，尚可用哪些提取 方法？请设计一个提取工艺流程。2 .掌握根据化合物结构及色谱条件推测不同化合物的Rf值的方法。在本实验色谱条件下，请比较小璧碱和掌叶防己碱极性及Rf值。3. 查阅文献：黄连中总生物碱含量测定