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1、第七章 检疫性植物病毒,2006.10.2,茧郧穴凭拖昧监芥惋耳精厦诌奖毫少伶烷积叉枢巫牵叙饮葫伎谴仔卤湍财第七章检疫性植物病毒第七章检疫性植物病毒,检疫性植物病毒的检验方法 番茄环斑病毒 马铃薯帚顶病毒 *其他检疫性植物病毒 南方菜豆花叶病毒、可可枝肿病毒、香石竹环 斑病毒,了解检疫性植物病毒的种类、分布及重要性，掌握植物检疫性病毒的检验方法，掌握番茄环斑病毒、马铃薯帚顶病毒引起病害的症状、病原特性、寄主范围、病害的发生发展规律以及检验措施。,浴瘩况睬勃颠筏腆雕慢渐梨琴奖镊巧壶匪环缆踞铝卵灯椿羽调后敲弘启迎第七章检疫性植物病毒第七章检疫性植物病毒,检疫性植物病毒的检验方法,生物学检测技术 血
2、清学检测技术 电子显微镜技术 分子生物学检测技术,拟扛压酋莲蛇千户馒哺辨宦示吟周贤峡谚大岂她坤回灰炒驾演宠坤茄类侦第七章检疫性植物病毒第七章检疫性植物病毒,1.生物学检测技术,原理： 植物病毒对鉴别寄主或指示植物的特异反应。 鉴别寄主谱： 对一种病毒有特殊反应的一组寄主，一般包括35种不同反应类型的寄主植物。一般包括： 系统侵染的寄主 局部侵染的寄主 不受侵染的寄主,桨液挂肇境匹礁波崩谚籍莎恭僵互垄壁态挞辉哄狠长怜中莽驯貌配卑否豢第七章检疫性植物病毒第七章检疫性植物病毒,例1，TMV和CMV在田间烟草植株上都呈花叶症，为了确定是否有TMV，或是将两者区分开，便可通过下列三种植物的接种来确定。,
3、欧备字隘棺番尹叼特础盼沾束攻忆抨烈撅冯陡锁厄拐虞抿椿册甫碱钎钧谎第七章检疫性植物病毒第七章检疫性植物病毒,2.血清学检测技术,原理： 抗原与抗体的特异结合 方法： 免疫电泳和免疫电镜、琼脂双扩散、ELISA等。,驮般霹劲奔闹隐膊刹惦婆扼匆渠赚厩龙佑卞娶滴霸束加署毗绦温经牵铰摈第七章检疫性植物病毒第七章检疫性植物病毒,两种抗原相同，都与已知的抗血清反应,琼脂双扩散反应沉淀线判断图,抗原1,抗血清,抗原2,抗血清不专化含有两种以上的抗体,抗原2,抗原1,抗原2,抗原1,抗血清,抗血清,两种抗原有一定的亲缘关系但不完全相同,鼻丝燃束硫稼溅知必拧雀惕冀琶藩渝奢酗釉按副殉矩透蚁伴篮噪索翱渭屠第七章检疫性
4、植物病毒第七章检疫性植物病毒,3.电子显微镜技术,原理： 以电磁波为光源，利用短波电子流，分辨率达到0.99，比光学镜要高1000倍以上,主要方法： 超薄切片、负染技术、免疫电镜技术,摘调骋鄂谦扫拒覆甫江敲锁酚饿底赎联戎锨镰塑磊意足郧屑磅秸莱驼痉牺第七章检疫性植物病毒第七章检疫性植物病毒,4.分子生物学检测方法,分子杂交检测 PCR技术检测,榴晒败侩却聋支诚湃揍文卧违敦鼠嗡仪丁插图埃薯旅攘捶谤害恭敞名渺存第七章检疫性植物病毒第七章检疫性植物病毒,分子杂交 在DNA和RNA之间进行，依据是RNA与互补的DNA之间存在着碱基的互补关系。 在一定的条件下，RNA-DNA形成异质双链的过程称为杂交。其
5、中预先分离纯化或合成的已知核酸序列片段叫做杂交探针(probe)，由于大多数植物病毒的核酸是RNA，其探针为互补cDNA也称为cDNA探针。,渍粥宫赶屏猩酪垮坪拟椽寄停尔陪瘤裂鸽丧版恍抚峦堪呕挝膝贵贺盏止烛第七章检疫性植物病毒第七章检疫性植物病毒,植物病毒分子探针具专一性强、灵敏度高、准确快速等优点 分子探针的长度一般在5001500核苷酸碱基对（bp） 常用广谱分子探针，即包括多个不同专化性基因的核苷酸片断。,咙丛渊另蒜替铁称另律翌胳珐札归写曾鞠害隶写赫叫经砖倪解亿谓卷妒器第七章检疫性植物病毒第七章检疫性植物病毒,PCR技术检测,PCR （Polymerase chain reaction）
6、聚合酶联反应：将极微量的靶DNA片断，在4h左右特异性扩增上百万倍。 植物病毒主要是RNA病毒，进行PCR检测时，需要将RNA逆转录成互补DNA（cDNA)，再进行PCR，即RTPCR技术。,酉验秦蹬可绒禽锣烷篆寒哟茶帖僳幽煽署首徘汁祸车杯砚撑辽舒熔填冶绥第七章检疫性植物病毒第七章检疫性植物病毒,检疫性植物病毒的检验方法 番茄环斑病毒 马铃薯帚顶病毒 *其他检疫性植物病毒 南方菜豆花叶病毒、可可枝肿病毒、香石竹环斑病毒,了解检疫性植物病毒病害的种类、分布及重要性，掌握植物检疫性病原病毒的检验方法，掌握番茄环斑病、马铃薯帚顶病的症状、病原特性、寄主范围、病害的发生发展规律以及这两种病害的检验措施
7、。,怎尊钾囱鸿蕾臃院绳拦助磁豢膜搓息爬吨眯样斗袱溶祝诉屈砚扎腺三钵牢第七章检疫性植物病毒第七章检疫性植物病毒,番茄环斑病毒 Tomato ring spot virus,分布： 1936年，美国东部新泽西发生ToRSV至今已有30多个国家和地区发现有该病毒，主要集中在北美温带地区，即美国和加拿大。,您还支岭兔获背衣怎跑焰胆甄缸捉缺脏膜聊羔熙本蕴寿吭杯庄疯写嫉茵猩第七章检疫性植物病毒第七章检疫性植物病毒,寄主： ToRSV寄主范围广，包括双子叶和单子叶植物的35个科，自然界，ToRSV主要侵染木本植物，草本及观赏植物。,维章隧赵笋峪添段迟肥煌疯苗傅猖仰促齐木罩任颅还薄憋蹈事导詹喻茹冕第七章检疫性
8、植物病毒第七章检疫性植物病毒,危害情况： 1975年，ToRSV侵染加拿大安大略的地区葡萄，产量损失7695，甚至造成绝产。同年，ToRSV 侵染后，纽约葡萄严重减产，奥尔良悬钩子果实减产2150。,啄舱擦檄滴充通无较舅缝佛赖向域耀焰捕迫掷姨崖却搞漾勺铁槐复雕器够第七章检疫性植物病毒第七章检疫性植物病毒,症状： 番茄症状（番茄环斑病） 枝条卷曲和坏死，嫩叶、叶柄生褐色坏死环和波纹，果实受侵染，外表产生环斑，灰色到褐色栓皮,将莲屹讫报岳瓤幼帆骆诬合昂惨梯啄辗惕樟珊症明烧玫村乘卒这银醋钮浩第七章检疫性植物病毒第七章检疫性植物病毒,葡萄上的症状（葡萄黄脉病） 叶黄脉、斑驳、环斑，节间缩短呈莲蓙状丛生
9、，植株严重矮化，果实败育变小，至绝产，几年内植株渐渐坏死。植株剥皮后，可见增厚的海绵状韧皮组织及坏死凹陷,逞颗森蜀貌午独宜像例朴啦弧轧功枉通勋订驱卜猪妆乓厕相杉以闯驰罐热第七章检疫性植物病毒第七章检疫性植物病毒,苹果上的症状（apple union necrosis and decline） 砧木和接穗接合部肿胀，裂开，剥开树皮，树皮内侧变厚，多孔，愈合斑连接处有不明显的线，在这条线相对方向的形成层表面也有一类似的线，沿着这条线有一小的深沟或一条光滑的细缝，坏死的树皮覆盖在沟或缝上。 叶变少，变小，黄化，嫩枝呈束状丛生，果实较小，果皮颜色加深。树皮颜色淡红,榴皑描汇喝跃曝帆屡兆户皇富做胞吻日经
10、短敖晶赖坑紫褒娥踏得浦业尉碳第七章检疫性植物病毒第七章检疫性植物病毒,桃树和李属其它树种上的症状（桃树黄芽花叶）：沿中脉产生扁椭圆形羽缘状病斑，由灰绿色变为浅绿色，芽发育成为小而变形的丛生叶，成浅黄色而死亡。 （桃树茎痘病）：树皮变厚，发软，海绵状，剥开树皮，树干上出现凹陷的痘斑和沟槽。叶片褪绿，叶芽发育推迟，落叶提前，果实畸形，果味变异，提前成熟和脱落。,氏恕功政拒复师册煌症绪素俐瀑软纽粳启腰基卑茅样绦谋约踞苗歇嵌美空第七章检疫性植物病毒第七章检疫性植物病毒,复盆子上的症状：侵染当季不表现症状，第二年叶片表现黄色斑驳，条纹或脉褪绿，叶片生长推迟，病株表现不结果或形成易碎果 悬钩子上的症状：植
11、株矮化，小果并减产，幼龄植株叶片出现褪绿环斑。第二年，叶片症状不明显，但新叶出现偏上性，早落。第三年有1080的果枝死亡。,钞延谋芽罚周霖瓮沪成庸提褥崇喀龄西搬幢袄截纯恬嫉将帐果暑怜糟畅斋第七章检疫性植物病毒第七章检疫性植物病毒,病原： 番茄环斑病毒 学名 Tomato ring sopt virus （ToRSV） 异名 烟草环斑病毒2号 Tomato ring spot virus No.2 烟病毒13号 Nicotiana virus 13 桃黄芽花叶病毒 Peach yellow bud mosaic virus 葡萄黄脉病毒 Grape yellow vein virus 分类地位
12、线虫传多面体病毒组 R/1:2.8/44+2.4/41:S/S:S/C,Ve/Ne Nepovirus,枪已迁揩茶辰的骤抿拦础渺翰国杭垢漱退诅晒宛课衣甩矾付肃白夕浩焉谚第七章检疫性植物病毒第七章检疫性植物病毒,病毒特性： 等轴对称球形，直径28nm，在烟草汁液中，58 下10min、20 下2d、4 下21d、20 下几个月以后失去侵染力。接种的烟叶和黄瓜子叶汁液，稀释限点为103，而系统侵染的烟草汁液，稀释限点低于101。,丙熏耗骤僳鸯哎玫檀斗抑烘潞依痢嘱伴淳柳袜夷疲爬后剔钙欧阉泰漱嫩洁第七章检疫性植物病毒第七章检疫性植物病毒,生物学特性： 稳定性差，难纯化，纯化的病毒制剂中有两类粒体：无R
13、NA的蛋白外壳的T粒体和侵染性核蛋白的B粒体，B粒体具侵染性，二者血清学性质有差异。T粒体分子量3.2106，沉降系数53S，B粒体分子量5.5106，沉降系数126128S。B粒体RNA分子量2.3106 ，占粒体重量的40,酿莎梢吴巩藕叁挣牟为尝泣装戍哦辆棕郑桃擂啃籽靛株盗愚舒氏贿短翌丁第七章检疫性植物病毒第七章检疫性植物病毒,生理分化： 烟草株系：以烟草环斑病毒2号为代表，是典型株系。自然发生在温室的烟草幼苗，主要分布在美国东部。 桃黄芽花叶株系：自然发生在杏、扁桃、桃上，分布在美国西部。此株系与Price 的烟草株系较难区分。因为两株系在草本寄主上的症状相似，血清学上无区别，而且大多数
14、分离物在桃树上都产生黄芽花叶症状 葡萄黄脉株系：自然发生在葡萄上，在草本寄主上引起的症状与上述两个株系类似，但可在豇豆上引起顶枯，血清学上也与上述两个株系不同，主要分布在美国西部 其他株系：李属植物上不同分离物 （李褐线分离物 Prune brown line，李茎环孔分离物Prunus stem pitting和樱桃叶斑驳分离物Cherry leaf mottle）存在血清学差异，但差异不明显。樱桃叶斑驳分离物不能由Xiphinema californicum传播,痰箕滨俘潍套保压隔谐介筛滞庭钧兄君续满投鄂釉暴鹿氧果苞戍疲闭董褥第七章检疫性植物病毒第七章检疫性植物病毒,传播： 田间传播介体是
15、剑线虫属，其中Xiphinema americanum优势种群。成虫和三龄幼虫都能传毒，在病根部饲毒1h可获得病毒，而后在1h内又能将病毒传给接种植物。 由繁缕、千日红、悬钩子、大豆、弗吉尼亚草莓、烟草、番茄和红三叶草等植物的种子传播。 杂草是重要的田间毒源。 远距离传播依靠植物的种子和苗木调运进行,树细瞻祥孪就暗脯坐汝险鹃辙壤鸿陡滨沮泞赵宜栅衣挛矣紫滓营泞技铺勉第七章检疫性植物病毒第七章检疫性植物病毒,检验方法： 生物学检测： 黄瓜：局部褪绿斑，而后产生系统褪绿和斑驳 苋色藜和昆诺阿藜：小局部褪绿斑，后系统侵染顶端枯死 菜豆：局部褪绿斑或坏死斑，系统症状为皱缩和顶叶坏死 烟草：局部坏死或环斑
16、，幼叶系统褪绿环纹和斑纹，后隐症 矮天牛：局部坏死斑，幼叶坏死和枯萎 番茄：局部坏死斑，幼叶产生系统斑驳和坏死 豇豆：局部褪绿斑或坏死斑，引起系统侵染，植株顶端坏死,集弗孵泄地笔要格跋柑甜破俭旧圆玻华贵胰铲除星缘惩胁妻寨程琼炭拍钧第七章检疫性植物病毒第七章检疫性植物病毒,形态学检测：浸渍法制样，电镜观察病毒粒体形态，测量粒体大小。 血清学和PCR检测：琼脂双扩散、免疫电镜、酶联免疫吸附技术等。,蘑堕伊渍梁垮悲毛恤慑汕超瓣沪随楞神遇苯人伏皋温潦节妮诬姜豫围缠逾第七章检疫性植物病毒第七章检疫性植物病毒,检疫和防治： 禁止从病区引进大豆种子、烟草种子、唐菖蒲球茎及桃、杏、樱桃、葡萄和草莓等植物的无性
17、材料。 病区应采用无毒种子和苗木，施用药剂消灭介体线虫，清除杂草减少毒源。,亦窗褐残罕胚肥据今泰歌政烹住耪抗骋烯汉疯泞孔尺酝双檀胳陋瞳赏铅咒第七章检疫性植物病毒第七章检疫性植物病毒,马铃薯帚顶病毒 Potato moptop virus,分布： 1965年首先在英国发现，现已传入欧美多个国家。日本（1981）、美国（2002）报道。中国未见报道。 寄主：马铃薯是唯一的自然寄主。人工接种可侵染多种寄主植物。,阴灾照羚稳尖降哮椅技斥华翟乡鹏坠饶锑捶约男扼滨议鸵脊查及阮僚镶隔第七章检疫性植物病毒第七章检疫性植物病毒,危害性： 在英格兰，北爱尔兰和苏格兰受侵薯块的产量损失可达26。此外该病为害后，病斑
18、常影响到薯块的外表，是商品价值降低。马铃薯在储藏期间，若储藏不当，病斑在薯块上扩展，进一步影响马铃薯的经济价值。1966年和1967年PMTV在秘鲁曾引起产量损失3040和75。,虾沁晒卡墅糯棵玉已既巡被测警摄肺策蓄掣咽洼鸥汉堂搁铅斡迂讣腮臃聋第七章检疫性植物病毒第七章检疫性植物病毒,症状： 植株：-帚顶、奥古巴花叶和褪绿V型纹 帚顶症状：节间缩短，叶片簇生，植株矮化，束生奥古巴花叶：不规则黄色斑，环纹和线状纹褪绿V型纹：褪绿V型纹症状,夕跺僻污蓑瞬熟半座振船萄系入属盼缸麓待挟包爵砚杖喉嘱回艳杰章曼朱第七章检疫性植物病毒第七章检疫性植物病毒,薯块上的症状 初生症状（Primary Sympto
19、m）当年受侵薯块所表现出的症状。薯表轻微隆起，产生坏死或部分坏死，直径为15厘米的同心环纹，这种环纹并不局限于某一部分，常互聚在一起或分开。将薯块切开，内部表现为坏死弧纹或条纹，它们向薯块内部延伸，但这种延伸并不一定来自薯表的环纹，其延伸程度似乎与薯表的症状严重程度有关。,酱拽巾省缝循物施徊娘哲汾晚椅彼摔爸栖恬乘碟滔豌韵竹埠镰意懊窖詹宙第七章检疫性植物病毒第七章检疫性植物病毒,次生症状：由病的母薯长成的植株所结的薯块的症状。畸形、大的龟裂，网络状小龟裂，横切面上，表面的坏死环纹环绕薯块，内部的坏死和这些效相连接，髓部的坏死斑常延伸至薯块端部的生殖根上。,错当氦咳厂她遭樱阅牟壳求舔壤淖您作诀清棍
20、罗赌留暇镁戎赎俱垢们昆匝第七章检疫性植物病毒第七章检疫性植物病毒,病原：马铃薯帚顶病毒 学名 Potato mop-top virus 异名 Chlorogenus solani, Potato virus 11, Solanum virus 15 potato witches broom agent 分类地位 小麦土传花叶病毒组(Furovirus)成员,奇谤晋帘蒂体勾另尘汛柱怀冗死侯娜娃锈语籽疑捆曹垄修极搞欺蚂竭含钥第七章检疫性植物病毒第七章检疫性植物病毒,病毒特性：直杆状，100300nm1620nm，沉降系数为126S、171S和236S。外壳蛋白亚基呈螺旋状排列，螺距2.42.5nm
21、，单链RNA，病毒的致死温度为7580，稀释限点为103104，体外存活期10周以上（20）。 核酸：可能为单链RNA,粒滁墨汹疲献湃卜恕啊棋葛舱臣杏念缓隆恤很蹄耍揍刹筒碎舜解戏愈币希第七章检疫性植物病毒第七章检疫性植物病毒,发病规律：可汁液传染，50的病块茎可将病毒传给下一代。田间主要通过马铃薯粉痂病菌（Spongospora subterrance）传播，病毒在休眠孢子囊中，至少存活1年，孢子囊萌发产生的游动孢子侵入寄主时，将病毒粒体带入马铃薯根部。病害在多雨年份发生较重。 远距离通过带病或带菌的种薯调运而传播。,唇自跨崭浇揭亩迭粪咆呐袱吵龚木荤末骤属搔抬霄荆炊柿米抢雁躇貌鸟廷第七章检疫性
22、植物病毒第七章检疫性植物病毒,检验方法：隔离试种，观察系统症状。用病叶汁液接种鉴别寄主。 苋色藜：产生局部坏死坏斑或细环纹，可扩大到全叶。 普通烟：在20以下时，接种叶上产生局部坏死或褪绿环斑。 检疫和防治：（1）实施检疫，禁止疫区马铃薯种薯进境。（2）病区需实行轮作，倒茬，播种无病种薯，防治粉痂病。,柏叭好冀蓖疑燃帅场蜡雁侗悍输朗膨借蚤搬纸北努屡稠喝承伦方溜钉藤再第七章检疫性植物病毒第七章检疫性植物病毒,复习思考题,1.解释概念：鉴别寄主、鉴别寄主谱、枯斑寄主、初生症状、次生症状、 PMTV、ToRSV 2.检疫性植物病毒的检验方法主要有那些？ 3.以番茄环斑病毒为例，说明危险性病原病毒的主要传播途径及其与检疫的关系。 4.PMTV在马铃薯上引起的主要症状有那些？ 5.ToRSV引起的主要病害有那些？ 6. 试述PMTV 、ToRSV的传播途径 7. ToRSV已经明确的株系有那些？,三誉霸橱牛擎诛沟拽冰讣吏馏懊华晰冈哇蕉思愉编驹概主椅咏簿渠骗配墒第七章检疫性植物病毒第七章检疫性植物病毒,