N2000色谱工作站的使用方法.docx

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1、校正归一法（单点多次校正）在本例中，所测样品有四种组分，各组分浓度如下:组分名组分浓度（）A25.23B45.22C15.5D14该样品所采用的方法为 面积校正归一 ”，且已对该标样进行了 2次平行进样（重复进样）。现要求对方法进行单点二次的校正 归一法校正。参照本章第一节的叙述，其校正步骤如下：1、选择方法和积分参数，在此例中我们使用面积校正归一法”，如图所示：机会Mr时分力旗r/而粗广归一法广夕际法演校正里一法r措畋法r篙度内标修2、编辑组分表，调开标样谱图，在本例中我们采用 全选”方式套用各组分保留时间及时间宽度，在峰名一栏中输入组分名“A”、“ B7 ” C：” D；然后单击 采用”，

2、工作站将跳出提交成功窗口:点击OK,工作站将加亮 校正”按扭，单击 校正”，工作站将跳出校正窗口 3、输入标准品含量：单击 组分含量”，在组分含量表中输入 A、B、C、D的浓度，如图所示:榨品电量也引输总电比平行注：在输入组分含量时，请将输入法切换成英文形式，在中文输入法下，很容易将小数点“.输成句号：”。这是软件不能接受的格式，还则系统将提示您请输入正确的数值”。4、校正：在本例中我们采用加入标样”来运行校正，单击加入标样”，工作站将跳出 打开谱图文件”窗口，选择标样hplc1.dat,单击打开”，以完成一次校正；二校正一反后-1C J' 1 * I度鼻校正复返r重复第一次校正步骤，

3、即再点击一次加入标样”，打开标样谱图hplc2.dat文件，并确定”，单击校正完毕”用以完成本次平 行两点校正/cm Ir5、预览校正曲线:单击另存”，输入方法文件名 面积校正归一法（平彳f两次校正）测样.MT：y ,用以保存校正曲线，以便分析样品使用面积外标法（单组分多点一次校正）本例是测定气体CO2组分含量示例，其组分分浓度如下表：项目CO2浓20度4060(%80该样品所采用的方法为 面积外标法”，且已对该标样进行了 5次不同浓度进样。现要求对方法进行单点五次的面积外标法校 正。参照本章第一节的叙述，其校正步骤如下：1、选择方法和积分参数，在此例中我们使用面积外标法”，如图所示：积分.1

4、中分神1但面职旧一法后际生r按正蛔一诲r描离凄广内掠法2、编辑组分表，调开标样谱图，在本例中我们采用全选”方式套用各组分保留时间及时间宽度，在峰名一栏中输入组分名“ CO2然后单击 采用”，工作站将跳出提交成功窗口:点击OK,工作站将加亮 校正”按扭，单击 校正”，工作站将跳出 校正窗口。3、输入标准品含量：单击组分含量”，在组分含量表中输入 CO2第一点的浓度（20）,如图所示:注：在输入组分含量时，请将输入法切换成英文形式，在中文输入法下，很容易将小数点".输成句号：这是软件不能接受的格式，还则系统将提示您请输入正确的数值4、校正：在本例中我们采用加入标样”来运行校正，单击 加入

5、标样”，工作站将跳出 打开谱图文件”窗口，选择标样CO2-20.dat,单击 打开”，以完成一次校正；打开标样谱图CO2-40.dat文件，并确rfiict 11 3 iif.-fT F-zJ厘 E7 J重复第一次校正步骤（3-4步），即再点击一次 组分含量”，输入第二点浓度（40） 定”，用以完成本次校正。打开标样谱图CO2-60.dat文件，并确vAtft llWa 上小股笨 -Zt若FEiSjlI4 % 出立片著tl :c-iy空h，三WM加府附5重复第一次校正步骤（3-4步），即再点击一次 组分含量”，输入第三点浓度（60） 定”，用以完成本次校正打开标样谱图CO2-80.dat文件，

6、并确重复第一次校正步骤（3-4步），即再点击一次组分含量”，输入第四点浓度（80） 定”，用以完成整个校正过程。5、预览校正曲线:,用以保存校正曲线，以便分析样品使用。单击另存”，输入方法文件名 面积校正归一法（平彳f两次校正）测样.MT：y比较谱图 离线色谱数据工作站的比较谱图功能打开用来 比技的清园接定文的时河对齐两个造图两个港图相加卷两 分开显不个诸图贿时舸坡起点对齐图相说合天显示两个右国两个造图合并分开圉94单击谱图比较菜单，就可以同时打开多个谱图并对之进行比较或加减。方法为用鼠标单击再打开按钮或选中菜单中的相应功 能，上面的是用来比较的谱图，下面的是被比较的谱图。在谱图加减运算中，上

7、面的谱图是用来加减的谱图，下面的是被加 减的目标谱图。谱图比较有很多实用的功能，如图 9-4所示，具体操作如下：图9-49.2.1分开显示谱图与合并显示再打开一个谱图后，您可以把多个谱图用合并显示与分开显示两种方式进行查看，默认为分开显示，如需为合并显示，则用鼠标单击合并显示按钮或在菜单中选中该功能。工作站马上就可以将两个谱图合并在一起显示，如图9-5所示。反之亦然图9-5多谱图打开比较：在打开两个谱图比较的基础上，你可以单再打开”，对多个谱图进行操作。如下图所示： 五个谱图三个谱图为了方便地进行比较，您可以根据需要对齐两个谱图，除了工作站默认的方式即起点对齐以外，工作站还可以先自定义好对齐的

8、时间点，然后单击对齐，如图 9-6所示。图9-6 9.2.3谱图的相加减N2000型色谱工作站还提供了多个谱图相加减的功能，在打开了如图9-7所示两个谱图后，您只要用鼠标单击谱图相加按钮或在菜单中选中该功能，就可得到如图9-8所示相加的谱图结果，还可以根据需要对运算结果加以保存。谱图相减的操作和谱图相加一样，下图是上述多个谱图相减后的结果。98手动积分实际分析中由于有时的样品十分复杂，实验室所用的色谱分离技术无法达到较理想的分离状况，虽然N2000色谱数据工作站采用了国际上最先进的算法对色谱信号进行智能鉴别，但作为一个软件产品，要百分之百准确地差别出峰的起点.终点与峰 的类型，仍然具有一定的难

9、度，于是我们工作站就提供了一个人工对色谱峰的识别进行补充处理的工具，这就是手动积分。手动积分是对工作站智能自动判别的一种合理补充。手动积分有手动画基线，设置峰类型（单峰/重叠峰/拖尾峰），移动峰起点与结束点，增加分割线/删除分割线，添加峰， 设置水平基线，添加负峰及删除负峰等几种。|同8|3|心七|中出| + |3乎|过皂回回回困囹送1田一|回山,图粗，方去|锢分表|报告场辕国君玩比较语图手动,，步.件料J手动积分的各个功能使用方法如下：您必须先用鼠标按下手动积分按钮，或者选中积分菜单中的手动积分功能，等到手动积分的各子功能按钮弹出（如图 9-9所示），然后您可以按照色谱工作站在谱图下方给出的

10、提示，用鼠标单击所需功能按钮，使该按钮按下，并在谱图上选择所需想改变的目标点以及改动以后的点即可。具体各功能的操作如下：图9-99.3.1 手动画基线 A：用鼠标按下手动画基线按钮或在菜单上选中该功能，然后用鼠标分别在色谱图上单击选择所需改变色 谱峰基线的起点及终点，工作站即自动在按您所给出的两个点之间画一条基线，并强制按这条线计算出该色谱峰的面积。9.3.2 强制改变峰类型（单峰 竺1/重叠峰/拖尾峰 5:用鼠标按下强制为单峰按钮或在菜单上选中该功能，然后用鼠标分别在色谱图上单击选择所需改变色谱峰类型的起点及终点，工作站即按您的要求对所选时间段内的色谱峰强制以单峰重新进行积分。如图所示。强制

11、为重叠峰与强制为拖尾峰的操作与强制为单峰一样。重叠峰处理单峰处理ijrir单峰地理格展峰处庠拖尾峰处理9.3.3移动起点心./移动结束点41：用鼠标按下移动起点（或结束点）按钮或在菜单上选中该功能，然后依下方的提示用鼠标在色谱图上单击在移动的目标峰，然后用鼠标单击选择新的起点（或结束点）理移动的峰JFJ解勃后. Kifa-JEIfrDMk IK &*%*&_* WIafI9.3.4增加分割线/删除分割线刍：用鼠标按下增加分割线按钮或在菜单上选中该功能,然后用鼠标在色谱图上单击选择所要添加分割线的位置，工作站即自动在您所选的位置强制添加一条分割线。如果您要想删除分割线，则在用鼠标

12、按下删 除分割线按钮或在菜单上选中该功能后，必须用鼠标在色谱图上单击选择所要删除分割线的起点与终点位置。Nmlwim9.3.5添加峰&J/删除峰士：用鼠标按下添加峰按钮或在菜单上选中该功能，然后用鼠标分别在色谱图上单击选择所要添 加色谱峰的起点与结束点9.3.6前向水平基线后向水平基线 三：用鼠标按下前向（或后向水平基线）按钮或在菜单上选中该功能，然后用鼠标分别在色谱图上单击选择所需改变色谱峰水平基线的起点与结束点，工作站即自动在的选两点处连接成一条水平线。9.3.7添加负峰'"1/删除负峰:用鼠标按下添加负峰（或删除负峰）按钮或在菜单上选中该功能，然后用鼠标分别在色

13、谱图上单击选择所需添加负峰（或删除负峰）的起点及终点，工作站即自动在按您所给出的两个点之间添加负峰（或删除负峰），并强制按这条线计算出该色谱峰的面积。 一*则:理蛀果嗯噌加的峰. r9.4手动积分事件表所谓手动积分事件表就是色谱工作站自动将您所做的每一步手动积分操作都记录在一个表格中，这就是手动积分事件表，如图9-10所示。通过手动积分事件表，您不仅可以清楚地看到每一次手动积分的积分内容，时间点1和时间2,而且可以先选择其中一个手动积分事件并通过点击删除按钮将该事件删除，或者通过点击清除按钮将所有的手动积分事件全部清除。N2000型色谱工作站的有关概念1、本工作站需用到的部分色谱专业术语1.1

14、 色谱图的有关概念色谱图：色谱柱流出物通过检测器系统时所产生的响应信号对时间或者说载气流出体积的曲线图 色谱峰:色谱柱流出组分通过检测器系统时所产生响应信号的微分曲线。基线：峰的起点与终点之间所连接的直线 峰高：从峰的最大值到峰基线的距离 峰宽：在峰两侧拐点处所作切线与峰基线相交两点之间的距离 半峰宽:通过峰高的中点作平等于峰底的直线，此直线与峰两侧相交两点之间的距离峰面积:峰与峰基线之间的面积1.2 峰处理参数色谱峰检测、基线漂移的修正、峰起落点的确定、分割分离不完全的峰、测定峰面积等谱峰处理，都是根据设定的峰处理 参数（如峰宽、斜率、漂移量、最小峰面积、时间变参、时间程序表及积分事件表）等

15、进行的，其有关概念见下表：参数单位及范围功能与说明峰宽0-50 (5)秒删除峰宽比设置值小的峰，过程如同筛子以最小有效峰的半高处的宽度为依据来 设置，最小半峰宽，可从谱图显示处估计该设置值。斜率099999.99 (70)(微伏/分)峰检测灵敏度，用于确定峰的起点与终点最小峰 面积卜99999.99( 100)(微伏？#)删除面积（峰高）比设定值小的峰，用于删除分析过程中面积相对较小的不相关峰 （如仪器噪声）漂移099999.99 (0)(微伏？#)确定基线变化程度，实现峰面积的自动分割置“ 0”则进行自动修正时间变参0-2000 (0)(分)依据色谱峰的峰形规律，在到达设定时间后，斜率减半.

16、峰宽加倍，置“0”根据峰 宽与实际峰形的关系，自动改变，如不想使用则设置一个比停止时间大的值锁定时 '司099999.99 (0)(分)删除分析开始至锁定时间之间的峰，主要用于删除分析开始的一段时间内出现的空气峰，溶剂峰，负峰等不相关峰样品量0999999.99 (100)分析样品的重量，不能置零，对非归一法有效注：表中括号内数据为系统默认值。2、色谱处理的相关概念2.1. 数据采集：在采集数据的过程中,分析仪器所输出的信号在采集器中由模拟信号转化为数字信号。数字信号传送到N2000色谱工作站并保存在信号数据文件中。2.2. 积分：积分是从信号曲线上确定峰并计算其大、。积分是定量计算必

17、不可少的。N2000色谱工作站积分时，先是辨别每一个峰的开始及结束时间，并用“|符号标记这些点，同时寻找这些峰的顶点，确定保留时间，建立基线，计算峰面积、峰高及峰宽。这些过程由积分参数表、时间表、手动积分事件表控制。在实际运行中，色谱工作站常常必须处理非常复杂的色谱问题。在一次运行中，峰的大小可能变化很大，而且峰经常是以 很小的浓度出现。系统噪声，漂移等干扰会影响工作站用来计算峰面积和高度的基线，最终会导致色谱过程难以完全将峰分 离。只要有可能，就优化色谱分析方法来产生分离效果。当由于某些原因而难以做到时，色谱工作站必须处理复杂峰。因此，我们知道峰的积分是一项复杂的工作，尽管我们浙江大学智能信

18、息工程研究所的增强型智能算法尚不能对极差的色谱峰完全补偿，但我们的 N2000型色谱工作站能够克服噪声、漂移和峰的不完全分离等问题，并从较差的色谱图中获得可重复的结果。2.3. 定量：使用峰面积或峰高来确定样品中化合物的浓度,包括以下过程：弄清并鉴别您所分析的化合物；建立分析含有这 种化合物样品的方法；分析含有已知化合物浓度的一个或几个标准样品，以获得该浓度下的响应，并计算出响应因子；分析 未知浓度的化合物样品，以得到未知浓度的响应；将未知浓度的样品与标准样品进行比较，并利用标准样品的校正因子来确 定未知样品中化合物的浓度。为了获得未知样品响应与标准样品的有效比较，必须在相同的条件下采集和处理

19、数据。2.4. 校准：校准是通过进样分析指定的准备好的标准样品,来确定计算绝对组分浓度的响应因子的过程。重复次数：同一浓度的标准样品平行进样的次数。校准点数：由一个校准不同样品浓度的校准点组成。标准样品：也叫校准样品或标准混合物，是含有用于定量的已知数量的化合物样品。标准样品可从国家标准试剂供应商处 买到。标准曲线：是从一个或多个标准样品中获得的化合物的数量与响因数据的图形表示。2.5. 报告：报告包含所分析样品的质及量的信息。报告可以直接打印，或在屏幕上显示，报告可包括运行中所测峰的详细信 息及所得的信号图。3、本工作站的特有概念介绍 ：积分方法、组分表、谱图、 ORG文件、MDY文件、DA

20、T文件、手动积分事件表等。3.1. 法（.MTD文件）方法是指控制工作站对色谱仪的信号进行显示、采样保存、分析计算、打印、同时记录试验条件的一个程序，包括采样控 制、积分参数、组分表、谱图显示控制、报告编辑格式、仪器条件等。本工作站所用的方法有三类：贮存方法、缺省方法、现用方法，扩展名为.MTD针对不同的样品设置相应的方法，可以使您更准确更快速更方便地进行样品测试，并真实地记录样品的实验条件。所以， 在日常的操作中应养成良好习惯；即取一个简单直观的方法文件名并及时地保存修改过的方法。N2000工作站文件系科构图3.2. 组分表（即ID表）工作站组分表就是用来鉴别峰，判定组分名称，进行非归一法计

21、算时的依据。3.3. 谱图DAT文件即只包含色谱数据信息的文件，与原N型和UPPER色谱工作站兼容,3.4.ORG 文件原始处理数据文件，除了谱图数据以外，还包括实验信息与样品分析方法、仪器条件、积分及定量计算结果、结果报告等信息。这是只可查看不可编辑的二进制文件，因而可确保结果的原始性，符合 ISO9000系列及美国GMP认证规定。后处理时不许对其进行修改，修改后保存为MDY文件3.5. MDY 文件对原始处理数据（ORG文件）进行修改后保存的文件。3.6. 实验日志即您利用本工作站时对方法的操作、数据的采集等在线工作站的自动记录。可记录整个系统的运行情况，包括方法的建立、保存、另存、加载、

22、实验数据的采集及文件的保存3.7. 手动积分事件表即您对谱图手动画基线等手动积分事件的集合。面积外标法（两点二次校正） 本例是测定白酒中各组分含量示例，其组分分浓度如下表:组分名浓度 1(mg/ml)浓度 2(mg/ml)甲醇0.010.02异戊醇0.030.06异丁醇0.060.12该样品所采用的方法为 面积外标法”，且已对该标样进行了 4次2种浓度重复2次进样。现要求对方法进行两点二次的面积 外标法校正。参照本章第一节的叙述，其校正步骤如下：1、选择方法和积分参数，在此例中我们使用面积外标法”，如图所示:和分磬出面双广福爱积分方借r旧一法病学用法r校由0法r指截法内际法在峰名一栏中输入组分

23、名单2、编辑组分表，调开标样谱图，在本例中我们采用全选”方式套用各组分保留时间及时间宽度, 醇”，异戊醇"、异丁醇”。:$ >然后单击 采用”，工作站将跳出提交成功窗口:点击OK,工作站将加亮 校正”按扭，单击 校正”，工作站将跳出校正窗口。3、输入标准品含量：单击组分含量”，在组分含量表中输入 CO2第一点的浓度（20）,如图所示:".输成句号：这是软件不能注：在输入组分含量时，请将输入法切换成英文形式，在中文输入法下，很容易将小数点接受的格式，还则系统将提示您请输入正确的数值4、校正：在本例中我们采用加入标样”来运行校正，单击 加入标样”，工作站将跳出 打开谱图文

24、件”窗口，选择标样白酒标样1.dat、白酒标样2.dat,单击打开”，以完成一次校正；jj重复第一次校正步骤（3-4步），即再点击一次组分含量”，输入第二点浓度，选择标样 白酒标样1.dat、白酒标样2.dat,单击打开”，以完成二次校正重复第一次校正步骤（3-4步），即再点击一次 组分含量”，输入第三点浓度（60）,打开标样谱图CO2-60.dat文件，并 确 定”，用以完成本次校正。ft abb Iik "foRmm.3Iow -wj 4iiW«w» Et1 |qsg i.!出IjRiKVO二“L . 可5、预览校正曲线:pffi.内fits尸I f*ft*<*i tKi.fin；单击另存”，输入方法文件名 面积校正归一法（平彳f两次校正）测样.MT：y ,用以保存校正曲线，以便分析样品使用