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1、科研仪器学 名解 1 SPR 技术（Surface Plasm on Resonance表面等离子共振）：利用入射光与金属表面自由电子作用，在一定入射角度或波长（SPR的共振角或共振波长）时，入射 光大部分转化为表面等离子体波（spw ,在反射谱上出现共振吸收峰；而当金属薄膜表面附着被测物质引起表面折射率的变化，SPR光学信号改变，从而获得被测物质的信息，达到生化检测目的。2流式细胞术：利用流式细胞仪，对处于快速直线流动的单列细胞或生物颗粒进行逐个、多参数、快速的定性定量分析（以及分选）的技术。 3层析技术：利用物质中各组分在固定相与流动相之间分配系数的不同，实现分离各组分目的的技术。4双向电
2、泳：等电聚焦电泳和 SDS-PAGE电泳的组合，先根据等电点（ pl）进行等电聚焦电泳，然后根据分子量进行SDS-PAG曲泳，从而分离混合蛋白质样品。5 PFGE （ pulsed field gel electrophoresis脉冲场凝胶电泳）：分离大的DNA分了 （ lOkb到10Mb）,在脉冲场凝胶不断变动的电场中，DNA分了带负电，朝正极移动。相对较小的分子在电场转换后可以较快转变移动方向，而较大的分子在凝胶中转向较为困难。因此小分子以阶梯式的方式向前移动的速度比大分子快，从而实现分离大DN防子的 目的。（bp碱基对，b碱基）6蛋白质组：由一个基因组或一个组织、细胞表达的所有蛋白质。
3、蛋白组学集中于动态描述基因调节，对基因表达的蛋白质水平进行定量测定。7生物芯片（DNA芯片或基因芯片）：DNA交探针技术与半导体工业技术相的结合。将大量探针分子固定于支持物上后与带荧光标记的DNA样品分了进行杂交，通过检测每个探针分了的杂交信号强度进而获取样品分了的数量及序列信息。8 RCF （relative centrifugal field相对离心力场）：在离心力场中，作用于颗粒的离心力相当于地球重力的倍数，单位是“g”。只要 RCF不变，一个样品 可以在不同离心机上得到相同的离心结果。9等电聚焦：利用缓冲液在凝胶内制造一个pH梯度，在一个电场作用下，两性分子特别是蛋白质分子到达各自的P
4、I点，从而达到各自的分离。10共聚焦技术：共聚焦显微技术的关键点在于，每次只对空间上的一个点（焦点）进行成像，再通过计算机控制的一点一点的扫描形成标本的二维或者二维图象。在此过程中，只有焦平面上的光才能穿过探测针孔，焦平面以外区域射来的光线在检测小孔平面是离焦的，不能通过小孔，从而大大提高了显微图象的清晰度和细节分辨能力。 由于成像过程中，出射小孔的位置始终与显微物镜的焦点（focal point ）是对应的关系（共轴conjugate ）,因而被称为共聚焦（con-focal ）显微技术。填空1检测细胞周期、细胞 DNA RNA含量、总蛋白质含量用（线性放大器），检测细胞表面抗原、膜受体分布
5、 （对数放大器）。2影响DNA测序的因素（模板、循环测序反应条件、电泳）。模板影响：模板 DNA纯；定量不准；难测模板循环测序反应条件：引物的影响；富含GC的模板电泳的影响3制备分析生物芯片的关键仪器（生物芯片点样仪、杂交仪、扫描仪）。4 RCF指离心力相对于重力加速度（g）倍数。像,5激光共聚焦显微镜的原理是利用（每次只对空间上的一个点（焦点）进行成像，只有焦平面内才能够成 焦平面外的物体是离焦）的成像原理。6细胞穿孔的方法（电穿孔、磷酸钙沉淀法、激光钻孔法、微射弹法）。7酶标仪中的光学检测方法（光度测定、荧光、时间分辨荧光、荧光偏振、化学发光）。8 DNA测序的主要方法（化学法、双脱氧末端
6、终止法）。9用于提取纯化生物大分了理化性质的离心机（分析性离心机），用于实验的（制备型离心机）FSC越大；侧向散射SSC越大。）、CY3 （红）10 （流式细胞术）前向散射（FSC,小角散射），大小与细胞直径成正比，细胞越大，（SSC, 90。散射），与细胞内颗粒结构的质量成正比，胞内颗粒结构越复杂质量越大，11 染色细胞核的染料：Hoechst33258（蓝）、DAPI （蓝）、Propodium Iodide12细胞融合的方法（电融合、聚乙二融合醇、病毒融合）。简答12 PCR （聚合酶链式反应）的原理。DNA在高温时也可以发生变性解链，当温度降低后又可以复性成为双链。通过温度变化控制DN
7、A的变性和复性，设计引物做启动子，加入模板链、DNA聚合酶、dNTP,可完成特定基因的体外复制。95 ° C高温变性，低温退火，适温延续2流式细胞术的特点。1实现对单列细胞的检测2实现高通量检测3多参数、多色荧光分析使细胞识别技术更精确4可定性定量分析细胞5分选特定功能性状的细胞3影响脉冲场凝胶电泳的因素。1脉冲角度2脉冲转化时间和速率3电压梯度4缓冲液类型、浓度和温度5琼脂糖类型和浓度6运行时间脉冲场凝胶电泳的应用。1DNA损伤的鉴定2药物效价鉴定3食品安全，公共卫生安全4绘制生物基因图谱4电穿孔仪与细胞融合仪的基本原理。电穿孔仪细胞膜基本上是一绝缘体，膜两侧浸在含离子的电解质溶液
8、中，在外加电场时，膜两边的电解质离子极化，形成外加膜电位差。高压电脉冲击穿细胞膜后，磷脂双分子层和细胞膜均可复原。细胞膜的复原与脂肪分子的排列和相互间引力有关，还与其他如胶体渗透作用、溶液离子作用和膜蛋白的影响等因素有关。细胞融合仪通过非均匀电场的电介质电泳作用，建立细胞（原生质体）间的紧密接触，形成细胞串。再利用高压脉冲的可逆击穿效应使接触区质膜上形成微孔，胞质通过微孔融合。影响因素：1）电脉冲的幅度、时间、脉冲波形；2）胶体渗透压合细胞膨胀；3）细胞膜的复原5蛋白组学的常用技术。1制备：破碎细胞、蛋白质溶解变性还原、提取全部蛋白质、除去非蛋白质部分。2分离：通过双向凝胶电泳（同位素标记、抗
9、体标记、荧光标记）、差异凝胶电泳、毛细管电泳、高效液相色谱来分离不同蛋白质。3鉴定：通过质谱技术、生物信息学技术、凝胶图像分析技术鉴定分离蛋白。分析：分子扫描仪激光捕获显微切割技术（ Laser captured microdissection, LCM ）6流式细胞仪的构成模块。流动室与液流系统、光源与光学系统、信号收集与信号转换系统、计算机与分析系统+ （分选系统）7荧光检测酶标仪的主要模块。1 一个激发光源（卤素灯林灯、激光）2荧光色团（染料）3波长选择元件：滤光片对或光栅（区分激发光和发射光）4发射光检测器（光电倍增管，即 PMT8超速离心机的主要使用注意事项。使用前：离心管须对称平衡
10、，且加满样品防离心管变形，但也不过满，防样品外溢污染转头。玻璃离心管禁止使用。转子盖严转头盖，放置需底座，移动需双手，且离心前须预冷，转头对准转轴放置，输入离心数据，编离心程序，还要进行使用登记。使用时：抽真空，离心机盖子盖严。使用后：小心取出转头，移动、打开幅度不过大，防止干扰离心效果，造成已分离物质再混合。离心后清洁离心机腔体和转头，并擦干腔内冷凝水，直至腔内恢复常温，防止水汽残留，注意维护转头和底部计数环。9简述影响电穿孔仪和细胞融合仪的因素。1电脉冲的幅度、时间和脉冲波形（采用指数型衰减波优于使用方形波）2胶体渗透压和细胞膨胀3细胞膜的复原能力4外加电压要达到临界值，否则无法击穿细胞膜
11、（由于细菌于有外膜，临界电压需要加大1? 2个数量 级）问答1荧光定量PCR的原理和应用。原理：在PCR反应体系中加入特异性荧光染料，随着 PCR反应的进行，PCR反应产物不断累计，荧光信号强 度也 等比例增加。每经过一个循环，收集一次荧光强度信号，通过荧光强度变化监测产物量的变化，从而得到一条荧光扩增曲线图，对比标准曲线对未知模板进行定量分析。应用：甲基化检测在扩增之前先处理DNA,使得未甲基化的胞口密嚏变成尿唯嚏，而甲基化的胞嚅嚏不受影响，用特异性的引物和Taqman （荧光）探针来区分甲基化和非甲基化的DNA扩增后的DNA则可以被检测出甲基化程度。产前诊断从孕妇的外周血中分离胎儿DNA,
12、用实时荧光定量 PCR检测其Y性别决定区基因，实现对于性别的认定。肿瘤基因检测在许多肿瘤早期，就出现癌基因的表达增加和突变情况。实时荧光定量PCR能准确检测癌基因的表达量,结合DNA杂交技术，能有效地检测到基因的突变。药物疗效考核对乙型肝炎病毒（HBV 、丙型肝炎病毒（HCV定量分析显不：病毒量与某些药物的疗效关系一一HCV高水平表达，干扰素治疗作用不敏感，而HCV低滴度，干扰素作用敏感。在才夫定治疗过程中，HBV-DNA的血清含量曾有下降，随后若再度上升或超出以前水平，则提示病毒发生变异。2蛋白质组学的概念和应用。概念：包括一种细胞乃至一种生物所表达的全部蛋白质。其本质在于大规模水平研究蛋白
13、质的特征，包括蛋白质的表达水平、翻译后的修饰、蛋白与蛋白相互作用等，由此获得蛋白质水平上的关于疾病发生、细胞代谢等过程的整体全面认识。应用：1组成蛋白质组学（竭泽法）、2差异蛋白质组学（功能法）1竭泽法：器官内部细胞的蛋白质组学2功能法：不同时期（常态下与病态下）相同部位的蛋白质的差异表达，将蛋白质组学作为研究生命的方法手段?（蛋白质表达谱的差异性分析）运用比较蛋白质组学技术，比较结肠正常黏膜与腺癌组织之间的蛋白质组表达差异，对结肠癌患者（伴有腺瘤）的正常黏膜、腺瘤、腺癌组织提取的总蛋白进行双向电泳，选择两两间差异表达大的蛋白质进行质谱分析和生物学信息分析，寻找结肠腺癌相关的蛋白质，有可能为结
14、肠癌的早期诊断和治疗提供新的分子靶向。?（蛋白质与药物相互作用）利用蛋白质芯片和表面增强激光解析离子化（让蛋白质保留在芯片的故固相层析板表面）-飞行时间质谱技术（直接检测被保留蛋白质），可以了解蛋白质与药物相互作用，在基因水平上寻找靶目标和靶向药物。?（肿瘤细胞信号转导、功能性调节）用表皮生长因子、血小板衍生因子处理Hela细胞，并进行免疫 沉淀，同时分析信号转导过程中的磷酸化蛋白质，揭示、鉴定蛋白质在此过程中的作用。【肿瘤蛋白质组研究，肿瘤发生发展机制的阐明；新特异性标志药物和治疗靶标，寻找疾病分子标记和药物靶标】3蛋白分析纯化的一般过程。1选择实验材料：目标蛋白质含量高、杂质少、易获得、成
15、本低2材料的预处理及细胞破碎：机械破碎法、渗透破碎法、反复冻融、超声波法、酶法（把蛋白质从组织或细胞中释放（过滤、离心、洗涤、压碎、破碎：研磨、匀浆、超声、酶解、溶胀、反复冻融）出来并保持原来的天然状态，不丧失活性） 3蛋白质的抽提：根据PH离了强度、组分特性，选择适当的缓冲液溶剂把蛋白质提取出来。4蛋白质粗制品的获得：选用适当的方法（凝胶过滤层析、离子交换层析、纤维层析、亲和层析、有机溶剂、盐析、等电 沉淀、超离、透析）将所要的蛋白质与其它杂蛋白分离开来。5样品的进一步分离纯化：用等电点沉淀法、盐析法所得到的蛋白质一般含有其他蛋白质杂质，进一步分离提纯得到一定纯 的样品。6蛋白质的鉴定：包括
16、：分子量、等电点、氨基酸组成顺序、免疫特性、结晶特性、生物学功能。【1分离技术：离心分离、层析分离、电泳分离、膜分离2分析技术：重量分析、化学分析、分光光度分析、酶分析、色谱分析、质谱3制备技术：沉淀、溶剂提取、浓缩 /干燥、萃取】论述对于国内外科研仪器发展的认识。机器，就是人类双手的延伸，而仪器作为机械的一种，它的发展就是方便、推动人们的研究。简单的仪器，就叫做工具，实验工具；而高性能，用于科研的高科技含量的仪器，就叫作科研设备了 它们之间并没有很明确的区分。对于科学家来说并不是一定要完全依赖于高科技仪器，但有了好的仪器， 能够更为快捷、高效地进行研究。也许在仪器产生之初，它就是使用者发明的
17、，因为他们知道自己需要 工具来做自己想要完成的事件（观察、测量、分析），但是随着时代的发展，使用者渐渐不再研发仪 把研发交给了生产者，于是使用者要与生产研发者合理沟通，才能够造出符合需求的仪器。而当今 如此细化的时代，仪器研发对于生产者来的确有些力不从心了，于是使用者必须告知生产者：仪 可以改进，让操作更简便、人性化，让那些部分和其他的仪器结合起来有效运作。而当下，国外科研仪器发展向着数字化、智能化、网络化、微机化方向发展：微电了技术的发展优化 器的运算处理能力（硬件提升）；人工智能的加入更方便使用者操作，提高了仪器的上手度（软件优化）； 仪器的多种总线和仪表共存，增强了不同仪器之间的关联度；
18、山于处理器、感受器微型化，传导方式的多 化，让仪器的体积得以缩小，并且具备了在多种领域使用的特性。相比国外，国内则处境堪忧，一方面科研外在环境不佳，经费紧缺，而投入到仪器研发的资金就更为 少；另一方面潜在的学术氛围不够浓郁，潜心从事长期仪器研发的态度离我们远去。国人习惯于购买使 外仪器，对于仪器的合理有效利用又不够，且日常维护和定期检修又不被重视，于是也出现了一方面 金购买新式仪器，另一方面有不肯花钱修缮现有仪器的状况。就 什么 器，而 社会分工 器哪些地方仪样稀 用国 没有资器 国在 的投入,科研仪器的发展道路遵循着从简单到复杂，从单一到联合，从人工到智能。而西方现在确立的科研仪 研发模式，是整合了第一次工业革命至现代电子信息技术革新这段漫长时期的对于机械研发的经验，中 科研仪器的发展商的确欠缺很多东西，但是归根到底，就是历史经验，一旦时间成熟，国家对于科研 人们对于科研的重视，学术界对于自主研发科研仪器的看法就会改善，就会变化。