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1、,微生物检验培养基质量控制技术,培养基质量的重要性,培养基是微生物试验的基础，直接影响微生物试验结果。适宜的培养基制备方法、贮藏条件和质量控制试验是提供优质培养基的保证。,主 要 内 容,培养基制备、使用、贮存中的注意事项培养基质量控制2010版药典附录实例（培养基质量对实验结果的影响）CHP与USP的异同点同行的方法介绍新技术部分菌种在培养基上的典型特征,培养基制备过程中的注意事项,培养基的水化 培养基水化时不得用铜锅或铁锅,以防有离 子混入培养基中,影响微生物的生长； 配制培养基最常用的溶剂是纯化水 ,不能含 有任何可能抑制或影响微生物生长的物质；,培养基制备过程中的注意事项,培养基的溶解
2、 在培养基分装灭菌前,各成分应溶解均匀, 使用电炉等设备煮沸培养基时,应用小火加热,并边加热边搅拌,避免培养基焦化或爆沸溢出。,培养基制备过程中的注意事项,培养基的灭菌 已配制好的培养基必须立即灭菌 湿热灭菌必须严格控制灭菌温度和时间,培养基制备过程中的注意事项,培养基的pH微生物必须在适宜的pH范围内才能正常生长繁殖或体现其生物特性。调整培养基的pH,应用1 mol/LNaOH或1 mol/L HCl调整pH，一般灭菌前比最终pH高0.20.3。,培养基制备过程中的注意事项,培养基的保温 灭菌以后培养基应该迅速冷却至所需温度,避免长时间保存在灭菌锅内,造成过度灭菌,影响培养基的营养成分或选择
3、性效果。,培养基使用过程中的注意事项,培养基的接种 平板在接种使用时,表面必须无明 显潮湿水珠； 对于保存的培养基,需待温度回复 至室温后才可使用,并且使用前应 检查；,培养基贮存过程中的注意事项,干燥培养基 应遵循先入先出的原则； 贮存于阴凉干燥处,避免强光直射；,培养基贮存过程中的注意事项,已配制的培养基 建议平板倾注后立即使用； 在平板上标上制备日期和/或有效期 和名称； 固体培养基灭菌后的再融化只允许 一次 ；,实 例,三糖铁培养基（TSI）未校正pH时，不同厂家的TSI培养基产硫化氢强度不一；校正pH7.5后，各培养基硫化氢反应均有改善,不同厂家的TSI培养基产硫化氢强度仍不相同；,
4、实 例,三糖铁培养基（TSI）由于培养基pH太低, 本身就是黄色,细菌生长后下层仍为黄色, 而斜面变为橙红色,易误判断为下层“ 变为黄色” 。由此定为发酵菌，造成误判；,培养基质量控制（2010版药典）,培养基适用性检查,计数培养基,控制菌检查用培养基,计数培养基适用性检查,对照培养基 系指按培养基处方特别制备、质量优良的培养基，用于培养基适用性检查。由中国药品生物制品检定所研制及分发。,计数培养基适用性检查,大肠埃希菌金黄色葡萄球菌 枯草芽孢杆菌 白色念珠菌 黑曲霉 白色念珠菌,营养琼脂培养基,玫瑰红钠琼脂培养基,酵母浸出粉胨葡萄糖 琼脂培养基,计数培养基适用性检查,结果判定 被检培养基上的
5、菌落平均数 对照培养基上的菌落平均数 菌落形态大小应与对照培养基上的菌落一致 计数培养基, 70%,控制菌检查用培养基适用性检查,促生长能力 抑制能力 指示能力,检查项目,控制菌检查用培养基适用性检查,增菌培养基促生长能力检查：分别接种不大于100cfu 的试验菌于被检培养基和对照培养基中，在相应控制菌检查规定的培养温度及最短培养时间下培养。与对照培养基管比较，被检培养基管试验菌应生长良好。,控制菌检查用培养基适用性检查,固体培养基促生长能力检查：取试验菌各0.1ml（含菌数50100cfu）分别涂布于被检培养基和对照培养基平板上，在相应控制菌检查规定的培养温度及最短培养时间下培养。被检培养基
6、与对照培养基生长的菌落大小形态特征应一致。,控制菌检查用培养基适用性检查,培养基抑制能力检查：接种不少于100cfu 的试验菌于被检培养基中，在相应控制菌检查规定的培养温度及最长时间下培养，试验菌应不得生长。,控制菌检查用培养基适用性检查,固体培养基指示能力检查：取试验菌各0.1ml（含菌数不大于100cfu）分别涂布于被检培养基和对照培养基平板上，在相应控制菌检查规定的培养温度及时间下培养。被检培养基中试验菌生长的菌落形态、大小、指示剂反应情况等应与对照培养基一致。,控制菌检查用培养基适用性检查,液体培养基指示能力检查：分别接种不大于100cfu 的试验菌于被检培养基和对照培养基中，在相应控
7、制菌检查规定的培养温度及最短培养时间下培养。与对照培养基管比较，被检培养基管试验菌生长情况、指示剂反应等应与对照培养基一致。,培养基质量控制（2010版药典）,实验室配制的培养基的常规监控项目pH 适用性检查试验 定期的稳定性 检查以确定有效期,培养基质量控制（ CHP与USP的异同点）,计数培养基的适用性检查： CHP USP菌种的选择 大肠埃希菌 铜绿假单胞菌结果判定 比值大于70% 1/2 2 培养基 营养琼脂培养基 大豆消化酪素培养基 玫瑰红钠琼脂培养基 沙氏葡萄糖培养基 酵母浸出粉胨葡萄糖 琼脂培养基(YPD),培养基质量控制（ CHP与USP的异同点）,控制菌检查用培养基的适用性检
8、查：CHP与USP方法基本一致，检查用培养基不同。,同行的方法介绍,培养基质量控制 理化试验方法 包括测定培养基的pH值和凝胶强度 微生物学方法 包括固体培养基和液体培养基,同行的方法介绍,固体培养基 定量质控 采用倾注平板法、涂布法、 划线法(半定量法) 、改良的MilesMisra 法等测定生长情况； 定性质控 评价目标微生物非目标微生 物接种以后的生长情况 ；,同行的方法介绍,液体培养基 采用定量稀释法,用目标菌和杂菌的混合 菌株评价选择性增菌培养基的选择性； 利用OD 值评价液体培养基生长率；,同行的方法介绍,分值计算 质量比较,新技术介绍,BioBall是一个很小的水溶性球状物，包含
9、了数量精确的微生物个体，它可以使微生物质控中的定量控制达到非常高的精确度。,新技术介绍,BioBall目前可以提供超过25种菌株；可应用于培养基质控、方法验证等需要定量质控的各个领域；,新技术介绍,BioBall SingleShot 提供1次精确接种量BioBall MultiShot-550 提供10次精确接种量,新技术介绍,BioBall SingleShot 每个BioBall SingleShot都含28至33cfu； 标准误差小于或等于3cfu；,新技术介绍,BioBall与常规稀释法相比的优势使用方便；精确的cfu数量；不同批次间cfu数量稳定；减少了由于接种量的变化，造成的质控失 败的风险；,BioBall,典型特征,大肠杆菌在伊红美蓝琼脂(EMB)上典型特征,典型特征,黑曲霉和白色念珠菌在玫瑰红钠琼脂上典型特征,典型特征,金黄色葡萄球菌在甘露醇氯化钠琼脂上典型特征,典型特征,沙门氏菌在SS琼脂上典型特征,典型特征,沙门氏菌在BS琼脂上典型特征,典型特征,沙门氏菌在XLD琼脂上典型特征,谢谢！,