1、SMA分子检测进展分子检测进展董欣董欣 生物化学与分子生物学生物化学与分子生物学2162010115229821620101152298进行性近端型脊髓进行性近端型脊髓性肌肉萎缩症，简性肌肉萎缩症，简称脊髓性肌肉萎缩称脊髓性肌肉萎缩症（症（Spinal Muscular Atrophy）,SMASMA属于常染色体隐性遗传病，发病率为属于常染色体隐性遗传病，发病率为1/6000-1/10000。临床上根据临床上根据SMA发病年龄和病程的不同将其分发病年龄和病程的不同将其分为为、型型型（型（Werding-Hoffman病），又称严重型病），又称严重型SMA、急性型、急性型SMA、婴儿型、婴儿型S
2、MA，一般在两岁，一般在两岁之前死亡之前死亡型，又称中间型，是一种中等程度的型，又称中间型，是一种中等程度的SMA，大多仅能存活两年大多仅能存活两年型（型（Kugelberg-Welander病），又称成人型，病），又称成人型，属于轻型脊髓性肌萎缩症，其发病年龄从一岁半属于轻型脊髓性肌萎缩症，其发病年龄从一岁半至成年至成年SMA相关基因相关基因运动神经元生存基因运动神经元生存基因SMNSMN基因定位于基因定位于5号染色体长臂号染色体长臂1区区(sqll.2一一13.3)近端粒近端粒SMNt(SMN1)近着丝粒近着丝粒SMNc(SMN2)两者之间仅存在两者之间仅存在5个碱基的差距个碱基的差距现有
3、的分子诊断方法现有的分子诊断方法半定量半定量PCRFISH荧光实时定量荧光实时定量PCRPCR-RFLPPCR-SSCPMLPA多重多重PCR结合结合DHPLC等等。应用应用PCR-SSCP技术检测技术检测SMA聚合酶链反应聚合酶链反应-单链构象多态性分析（单链构象多态性分析（PCR-SSCP）PCR扩增特定靶序列扩增特定靶序列将扩增产物变性为单链，进行非变性聚丙将扩增产物变性为单链，进行非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳烯酰胺凝胶电泳因迁移率变化会出现泳动变位，从而可将因迁移率变化会出现泳动变位，从而可将变异变异DNA与正常与正常DNA区分开区分开应用应用PCR-RFLP法诊断法诊断SMAPCR-RF
4、LP法是一种简单、快速的诊断方法是一种简单、快速的诊断方法法PCR-RFLP的基本原理是用的基本原理是用PCR扩增目的扩增目的DNA，扩增产物再用特异性内切酶消化切，扩增产物再用特异性内切酶消化切割成不同大小片段，直接在凝胶电泳上分割成不同大小片段，直接在凝胶电泳上分辨。不同等位基因的限制性酶切位点分布辨。不同等位基因的限制性酶切位点分布不同，产生不同长度的不同，产生不同长度的DNA片段条带。片段条带。在差异碱基相邻处通过反向错配引物引入错配位在差异碱基相邻处通过反向错配引物引入错配位点点T(原序列为原序列为C)，从而在，从而在SMN2的的PCR产物中形产物中形成成1个特异的个特异的DraI酶
5、切位点酶切位点通过通过Dral对对SMN1与与SMN2的第的第7外显子外显子PCR产物产物进行直接酶切以区别进行直接酶切以区别SMN1和和SMN2SMN1的第的第7外显子外显子PCR产物产物(189bp)不被酶切，不被酶切，而而SMN2的第的第7外显子的外显子的PcR产物可被酶切，变成产物可被酶切，变成 165bP和和24bP片段。片段。展望展望 SMA分子诊断方法的多样性证明，每种分子诊断方法都不可避免地会有它自身的局限性。SMA分子诊断技术尚有待进一步完善。相信随着SMA基因检测的广泛开展，SMA分子诊断(包括产前基因诊断和植入前基因诊断)的准确性将进一步提高，从而为SMA患者家庭提供更可靠的遗传咨询和风险预测，降低出生缺陷的发生。The end,thank you!
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