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1、流式细胞仪产品介绍,杨海霞 德国美天旎生物技术公司 (仅供内部培训),主要内容,流式细胞仪基本原理 MACSQuant流式的性能 流式的竞争分析,流式细胞仪基本原理,流式细胞术（FCM）： 就是对在高速流动的鞘液包括下的细胞、粒子进行分析和分选的技术，这种细胞或粒子是经过特异荧光标记的。其特点是测量速度快，每秒钟能测数千个乃至上万个细胞，且可进行多参数测量。,流式细胞术的概念,流式细胞术发展趋势,单纯到复杂 检测荧光参数 定量 手动到自动 荧光试剂,液流,检测器,光源,电子计算机,流式细胞检测原理,细胞可被检测的参数(无探针标记),散射光信号: 细胞内在的结构参数 细胞大小 前向角散射 (FS
2、C) 细胞内部颗粒性 侧向角散射 (SSC),是细胞或细胞上的荧光染料被激光激发后发射出的荧光，不同的荧光染料其发射波长不同。 区分阴阳性：通过荧光强度可将同一个细胞群体中的有荧光标记的细胞与无荧光标记的细胞区分开来。 区分阳性强弱：也可以将阳性细胞中的高FL的细胞与低FL的细胞区分开来。,相对荧光强度（FL） (需探针标记),散点图,密度图,二维等高图,直方图,图 报告中常见的几种流式细胞图,如何看流式图,流式细胞术的应用,流式细胞术在细胞生物学中的应用 染色体核型分析 在分子遗传学领域中的应用 用于性别的预选择 在微生物学中的应用 在细胞周期研究中的应用 流式细胞术在医学中的应用 在免疫学
3、中的应用 流式细胞术在肿瘤学上的应用 在血液学研究中的应用 流式细胞术新的应用,流式细胞仪的临床应用,HIV免疫分型，CD4绝对计数 白血病和淋巴瘤的免疫分型 肿瘤的细胞周期和倍体分析 网织红细胞计数 细胞移植的交叉配型和免疫状态监测 干细胞计数 残量白血病细胞检查 HLA-B27检查 血小板功能及相关疾病,11,临床意义,了解在不同情况下体内免疫功能状态 辅助临床疾病的诊断 探索疾病的发病机理、病程、预后 监测、指导临床治疗方案 免疫系统疾病 免疫缺陷病，AIDS 移植病人排斥反应或移植物抗宿主反应的检测 肿瘤病人化疗后免疫力检测,流式细胞仪的科研应用,树突细胞研究 干细胞研究 癌症病人的多
4、药耐药性 细胞周期和细胞凋亡 流式细胞术与分子生物学研究 细胞系的鉴定 细胞内蛋白的分析 细胞膜电位测定 细胞内钙离子测定,流式细胞仪潜在客户,医院：血液科，检验科，风湿免疫病科，肿瘤科，细胞治疗科,开展移植（肝肾）的科室。 科研院所及大专院校：免疫系或免疫实验室，中心实验室，分子生物学室，肿瘤研究所，血液病研究所。,MACSQuant流式细胞仪 细胞分析的里程碑,多参数细胞分析,三激光 紫色 (405 nm) 40 mW 蓝色 (488 nm) 25 mW 红色 (635 nm) 20 mW 9个光学参数 FSC/SSC + 7 个荧光通道,MACSQuant光路系统,MACSQuant流式
5、细胞仪的创新特性： 集成，台式数字化流式细胞仪强大并且直观的软件 多参数：3激光，9个参数（FSC,SSC,FL1-7) 12寸触摸屏（内置） 不同用户登录模式，可用密码进行保护 2种不同的模式（针对有丰富经验和无流式经验的人员） 分析速度可达10000个细胞/秒,无需计数微珠进行绝对计数 不同的流速控制：25/50/100uL/分钟 自动化处理样本，自动进样，自动清洁，自动补偿,自动标记 矩阵补偿和脱机补偿 小巧（60X35X40cm）、低噪、低热。,流式细胞仪基本特征,细胞富集系统 绝对计数，无需微珠 自动补偿 自动进样 自动标记,A new milestone in cell analy
6、sis,MACSQuant 分析仪 功能强大、操作简单的多参数细胞分析的理想工具 (高端仪器 操作简单 多种自动化选择),MACS 富集系统 使用MACS微珠磁性富集细胞 细胞被富集后再进行流式细胞术分析 预富集的应用： 内皮祖细胞检测 频率:每 105 PBMCs 中有1个细胞(如 CD34的预富集) 肿瘤细胞检测 频率: 每 107 PBMCs 中有1个细胞 (如 EpCAM的预富集) 抗原特异性T细胞检测 (如 CD154的预富集) 成分检测 可以只检测富集后组分或者同时检测原始标本、阴性组分和阳性组分,MACSQuant流式细胞仪独有特征：,高灵敏度地分析稀有细胞,每次反应后，自动计算
7、每 L体积中的细胞数 无须计数磁珠，细胞培养后往往需要细胞计数，可以完全替代细胞计数仪 CD4绝对计数用于辅助HIV监测治疗 CD34绝对细胞计数用于干细胞移植,MACSQuant流式细胞仪独有特征：,绝对细胞计数(容积型),自动化的多样本处理： 使用 MACS MiniSampler 和 MACS 冷冻试管架 灵活性高，可使用不同的试管 5 mL tubes 15 mL tubes 50 mL tubes 通量高(从Chill 96 rack 到 96孔板),MACSQuant流式细胞仪独有特征：,自动进样,MACSQuant流式细胞仪独有特征：,自动标记,MACS微型载样器上的试剂架，可最
8、多放置4支染色试剂，如： PI / 7-AAD 荧光素标记的抗体 抗体混合物 (如MACS MC Cocktails) 全系列试剂 (抗体 和试剂盒),如: MACS 对照抗体混合物: MC CD14 Monocyte Cocktail, human MC CD19 B Cell Cocktail, human MC CD34/CD133 Cocktail, human MC CD34 Cocktail, human MC CD4 T Cell Cocktail, mouse MC CD90 Pan T Cell Cocktail, mouse MC CD19 B Cell Cocktail,
9、 mouse ,MACSQuant流式细胞仪独有特征：,完全自动化的仪器设置,全自动的仪器校准 (使用 MACS Calibration Beads) 7x7 矩阵补偿 自动补偿，对多色分析自动生成补偿值 手动补偿,仪器操作简单、易行: 溶液瓶 (1.5L) 附着在仪器两侧(通过瓶子上不同的指示灯来显示机器状态),结构： 数字化 分析速率 10,000 events /秒 流速: 25 / 50 / 100 L/min,MACSQuant Analyzer,自动化的仪器设置 自动校准仪器（使用MACS校准微珠） 自动补偿 7X7自动矩阵补偿 自动清洗 自动化进样和抗体标记 带有清洗工作站（wa
10、shing station）的进样针 自动化进样针臂（y,z方向移动） 无加压系统 溶液瓶附着在仪器上 仪器状态能够通过溶液瓶的不同颜色来指示,用户友好的仪器操作,12触摸屏（内嵌） Live support 远程网络服务，德国工程师进行远程在线检修机器 VGA 接口 (连接第二个显示器或者代替的显示器) 功能强大、易于操作 直观的操作界面 (用于仪器控制, 数据获取和数据分析) 不同的用户模式 拖拉式安装 含预设程序 在个人电脑上进行独立数据分析 MACSQuant 数据（MQD)文件 -FCS格式-FCS3.0 -与其它流式软件兼容,软件基本特征,简捷的数据处理: 个人用户登录 数据自动保
11、存在对应的用户文件夹中 MQD 文件 (内部格式) 数据 储存/备用: 可用硬盘驱动器 / DVD RW 驱动器, USB 接口, 以太网络连接,软件基本特征,软件简单易操作: 键盘在显示屏上 (触摸式显示屏) USB接口 可用来连接外设的鼠标、键盘 条形码读码器,MACSQuant Analyzer A new milestone in cell analysis,MACSQuant Analyzer A new milestone in cell analysis,MACSQuant Analyzer A new milestone in cell analysis,流式相关抗体,针对流式
12、检测的全系列抗体。,-FITC -PE -APC -Vioblue - ,北京大学人民医院血液病研究所 流式细胞仪检测报告 姓名： 性别： 年龄： 标本： 病历： 诊断： 编号：,淋巴细胞占有核细胞 % CD3+细胞占有核细胞 % CD4+细胞占有核细胞 % CD8+细胞占有核细胞 % CD14+细胞占有核细胞 %,签名： 审核者： 日期：,竞争优势: 预富集功能，高敏感性检测罕见细胞，比如临床最常用的造血干细胞、肿瘤干细胞、pDC等。 非常节省细胞，对于科研珍贵标本尤为重要！ 绝对的细胞计数，无需计数微珠，细胞培养后往往需要细胞计数仪，可以完全代替细胞计数仪。 自动标记，自动进样，自动清洗，
13、节省时间。 自动补偿，对多色分析自动生成补偿数值 小巧的台式机设计,低噪，低热 非加压系统进样,MACSQuant Analyzer A new milestone in cell analysis,34,(25),仪器的竞争分析,BD的各种机型（一）,calibur,Aria,LSR II,BD的各种机型（二）,Canto II,Influx,Beckman的各种仪器（一）,EPICS XL-ADC,Cytomics FC500,Gallios,Moflo,EPICS XL-Altra,Quanta,Partec公司各种机型（适合植物学研究）,Amnis公司的ImageStreamX图像流式
14、细胞仪,被评为2008年度生命科学十大创新产品之一，是流式细胞仪上的新突破 .,Milipore公司的Guava,EasyCyte Mini/EasyCyte Plus无鞘液毛细管细胞分析仪,Accuri 的c6-流式细胞仪,一种全功能、二激光、六探测器分析流式细胞仪系统,MACSQuant Analyzer “add-ons” MACS MiniSampler Chill Racks (Chill 5, 15, 50 or 96 well adapter) MACSQuant Columns Additional years of Service Fluorochromes, MACS Co
15、ntrol Cocktails and Microbeads Instrument Training MACSQuant Calibration Beads MACSQuant Starting Buffer kit Individual Buffer/Solution boxes,MACSQuant Analyzers in the World Belgium Canada China France Germany Iceland Ireland Italy Japan Russia South Korea Syria United Kingdom United States Coming
16、soon to the list is: Australia,Flow Cytometry Market Estimated to be $1.5 billion in 2008 (CAGR 10-15%, $3.7 billion in 2015) Instruments 68% - $1.02 billion Reagents 32% - $480 million Sales in 2009 Total 6.1 million (4.7 million ) Instruments 2.632 million (0.36%) Reagents 3.4 million ( 0.99%),Who
17、 buys the MACSQuant Analyzer Innovators are the first to purchase instruments and new gadgets Most countries are currently selling to the early adopters Some countries have sold a few MQ and are now selling to the researchers who want/need greater scientific arguments . Must be targeted to maximize
18、our success Guidelines have been followed in several countries and success is seen!,What have we learned? Miltenyi Biotec is still a new player in flow cytometry What is the MB track record in flow cytometry? What is the capability of MB Service (in US, EU and around the world) MACSQuant is a huge p
19、roject Underestimated level of need on all levels We need an improved MACSQuant support structure Combination with MACSQuant is a powerful tool Fluorochromes autoMACS Pro gentleMACS MACSQuant is the unifier of MACS brand not the divider,Goals 2010 MACS Cell Analysis Gain customer awareness in the ma
20、rket place Introduce MACS Cell Analysis as a flow cytometry provider (flow cytometer, fluorochromes and kits, assays and applications) Improve our support structure to augment the offerings Become known as a flow cytometry company More exposure, publications and reference customers,The rules for Suc
21、cess Plan, Plan, Plan Customer must be ready to buy and have money Contact established 4 weeks prior Full presentation times and practical demonstration planned 1 week prior Ensure success - use MACS Reagents and MACS Control reagents Day 0: set-up MQ and run calibration (no demo or training) Day 1:
22、 Seminar and introduction of instrument GOAL: We can illustrate the effectiveness of the MQ in all 7 channels Stain cells with our antibodies before any customer samples are run on the instrument (customer supplies unstained spleen or PBMC) Customers are scheduled to bring in their individual samples Day 2, 3 or 4: Pack up the instrument,