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1、第七章、酶的抑制作用及抑制动力学,失活作用: 通过变性作用引起酶活力下降或丧失 抑制作用: 改变必需基团性质,引起酶活力下降,丧失 第一节抑制作用的类型: 一、分类: (一)不可逆抑制作用: 抑制剂以很牢固的共价键与酶结合，不能用物理方法除去，抑制后酶活力不能恢复 专一性的不可逆抑制剂: 非专一性的不可逆抑制剂: (二)可逆抑制作用: 抑制剂以非共价键与酶结合阻遏酶的活性，可以用物理方法除去抑制剂后，酶活力能恢复,二、区别方法 (一)物理方法: (二)动力学方法: 1.酶预先用抑制剂处理后 测定酶活力变化情况: 2.在测活系统中加入抑制剂, 然后加入不同酶量, 测定酶 活力变化情况:,第二节不
2、可逆抑制作用 一. 非专一性的不可逆抑制作用: 1.概念: 2. 非专一性的不可逆抑制剂 酰化试剂:(酸酐,乙酰咪唑,硫代三氟乙酸乙酯,O-甲基异脲) -NH2 NHCO-R R-CO-X + E- -OH E- O CO-R + HX -C6H5-OH C6H5-OCO-R -SH SCO-R,烷化试剂:(2.4-二硝基苯氟,碘代乙酸,碘代乙酰胺等) -NH3 -NH-R -SH -S-R R-X + E -COOH E-COOR + HX - S-CH3 -S (CH3)-R 咪唑基NH -咪唑基N-R,含有活泼双键试剂:(N-乙基顺丁烯二酸抱亚胺(NEMI)、丙烯腈等 亲电试剂:(四硝基
3、甲烷(TNM) 氧化剂: H2O2, NBS等 作用-SH、Trp、吲哚基等 还原剂: ME, DTT等, 作用-S-S-、,二、专一性不可逆抑制剂: （一）Ks型不可逆抑制剂: 1.概念 2.抑制机理 E + I EI EIn 判断Ks型抑制剂作用是否发生在活性部位方法: 化学定量法. 底物、竞争性抑制剂保护方法 酶先可逆失活,再研究KS型抑制情况,（二）Kcat型不可逆抑制动力学 概念:自杀性底物 例如中E.coli中-羟基葵酰硫酯脱水酶 CH3-(CH2)6-CH2-CH(OH)-CO-S-R R = -CH2-CH2-NH-CO-CH3 CH3-(CH2)6-CH=CH-CO-S-R
4、(-反式双键) CH3(CH2)5-CH=CH-CH2-CO-S-R (,顺式双键),Kcat型抑制剂: 3.4-葵炔酰-N-乙酰半胱胺 CH3-(CH2)5-CC-CH2-CO-S-R E CH3-(CH2)5 HC=C=CH-CO-SR CH3(CH2)5HC=C-CH2 -CO-SR 不可逆共价结合,第三节 可逆抑制作用的动力学: 可逆抑制作用: Reversible Inhibition 1.概念 2.类型: 竞争性抑制: Comp. C Competitive inhibition 非竞争性抑制 NonC. NC Non-Competitive 反竞争性抑制 UnC. UC Un-C
5、ompetitive 混合型抑制 MT Mixed Type inhibition,一、竞争性抑制作用动力学 模型图:,动力学模型: 动力学方程： 式中Vm=k2Eo 不变 Km 为米氏常数 Kmapp 表观米氏常数，增大 KI 为抑制常数,双倒数作图法： 抑制常数：KI的求法： 以Kmapp 对I作图，横轴截距为 - KI 抑制率i % = (1 - vi / vo) 100% i %与S有关, S i% ,二、非竞争性抑制作用动力学: 动力学模型: 动力学方程： Vm=k2Eo Vmapp为表观最大速度，减小 Km 为米氏常数 ， 不变。 KI 为抑制常数,双倒数作图法： 抑制常数：KI的
6、求法： 以1/Vmapp 对I作图，横轴截距为 - KI 抑制率: i %与S无关,三、反竞争性抑制作用动力学: 动力学模型: 动力学方程： Vmapp为表观最大速度，减小 Kmapp 为表观米氏常数 ，减小 KI 为抑制常数,双倒数作图法： 抑制常数：KI的求法： 以1/Vmapp 对I作图， 横轴截距为 - KI 抑制率: i %与S有关, S i% ,二、混合型抑制作用动力学: 动力学模型: 动力学方程： Vmapp为表观最大速度，减小 Kmapp 为表观米氏常数 ， 当KI KIS Km减小,双倒数作图法： 抑制常数：KI、KIS的求法： 以斜率对I作图，横轴截距为-KI 以1/Vmapp 对I作图，横轴截距为 - KIS,