《Ontogenesis of main organs and cloning and expression of tow immune--related genes in Litopenaeus vannamei.pdf》由会员分享，可在线阅读，更多相关《Ontogenesis of main organs and cloning and expression of tow immune--related genes in Litopenaeus vannamei.pdf（130页珍藏版）》请在三一文库上搜索。
1、f。= = = = = = = = 时 A b s t r a c t W h i t el e gs h r i m pL i t o p e n a e u sv a n n a m e ii sap r i m ea q u a c u l t u r es p e c i e s ，a n di t c o v e l s9 0 o f w e s t e r nh e m i s p h e r ec u l t u r ea n di sa l s oe x t e n s i v e l yf a r m e di nA s i a T h e 。e s t i m a t e
2、da n n u a lp r o d u c t i o nf r o mA s i ad u r i n g2 0 0 2w a s3 1 6 0 0 0m tI nC h i n a , e x o t i c s p e c i e s 化v a n n a m e Oh a d i n t r o d u c e dd u r i n gJ 9 8 8 f o r e x p e r i m e n t a lp u t l x ) s e sa n db y 1 9 9 8i sb e i n gs u c c e s s f u l l yc u l t u r e di nc
3、o m m e r c i a ls c a l e ；o v e r1 0 0 0h a t c h e r i e sa r ei n o p e r a t i o n T h e3 0 0 0 0 0t o n sa n d2 1 0 0 0 0t o n sh a r v e s t e dd u r i n g2 0 0 3i nm a r i n ea n d f r e s h w a t e r f a r m i n gr e s p e c t i v e l yT o g i v e m o r cu n d e r s t a n d i n g f o r t h
4、e w h i t e l e gs h r i m p ， w eh a v ei n v e s t i g a t e dt h eg e n e , so f i m p o r t a n ts y s t e m sa n do r g a n ，i n c l u d i n gd i g e s t i v e s y s t e m ，n e r v o u ss y s t e ma n dh a e m a t o p o e t i ct i s s u e ，f u r t h e r m o r e d e a l e dw i t ht w o i m p o r
5、 t a n ti m m u l l e r e l a t e dg e n e s O u ri n v e s t i g a t i o nO i lo n t o g e n e s i so fd i g e s t i v es y s t e mi nL i t o p e n a e u sv a n n a m e L r e v e a l e dt h a ti nn o n f e e d i n gs t a g e st h ey o l km a s si st h ei n d i g e n o u ss o u T c eo f f o o da n d
6、 u n t i lt h ef i l t hn a u p l i n s0 , 1 5 ) s t a g er e t a i n e di nf o r e g u tc a v i t y ，a b s o r p t i o ni sg r a d u a li n n a u p l i u sf N ) s t a g e sw h i l ed i s a p p e a r a n c eO c c u r s a tN 6s t a g e T h ea n t e r i o rm i d g u t c a e c i l r f lg e n e r s t e
7、sa tN 3a n di tr e a c h e sm a x i m u ms i z ei nZ 3 ；t h e r e a f t e ri ns u c c e s s i v e s t a g e si tr e d u c e si ns i z ea n db e c o m e sas i n g l es t r u c t u r ei np o s t l a r v a ls t a g e ( P 3 P 4 ) ， n a m e dt h ea n t e r i o rd i v e f l i c u l u mT h el a t e r a lm
8、i d g u tc a e c u mf i r s ta p p e a r sa tN 6s t a g e a n dl e n g t h e n sa l o n gb o t hs i d e so f t h em i d g u ta n dt h e nr a m i f i e st of o r ml o b e sa sl a r v a l d e v e l o p m e n tF i n a l l y ，t h e s e l o b e sb e c o m eac o m p a c ts t r u c t u r e ，t h eh e p a t
9、o p a n c r e a s T h em i d g u tl u m e ni sq u i t ea p p a r e n ti nNs t a g e sa n do n l yb e c o m e sw i d e ri ns u c c e s s i v e s t a g e s ；i t i sw i t h o u tac u t i c l el i n i n ga n dt h e r ei sf l od i f f e r e n c ea m o n ga l li n v e s t i g a t e d s t a g e sT h ef o r
10、 e g u ti nNs t a g e s i sas i m p l et u b ea n dp y l o r i ca n dc a r d i a cc h a m b e r o c c u r si nt h et h i r dm y s i s ( M 3 ) s t a g eI nt h ec a r d i a cc h a m b e ro fp o s t l a r v a ls t a g e s ， f b l d sw e r en o t e da n dn 哪b e ro f t h a ti n c r e a s e dg r a d u a l
11、 l yT h eg a s t r i cm i l li sa b s e n ti n a l li n v e s t i g a t e dl a r v a ls t a g e s ( PJ P t 0 ) T h ep y l o r i cc h a m b e ri ss m a l l e rt h a nt h ec a r d i a c c h a m b e ra n dp o s s e s s e sa # a n df i l t e r ，w h i c hf i r s ta p p e a r si nM 3s t a g ea n df o r m
12、sa m o t ec o m p l e t es h a p ei nf o r t h c o m i n gs t a g e sT h eh i n d g u tg l a n df i r s ta p p e a r si nP 2a n d i ns u c c e s s i v es t a g e si ts h o w sm o r ep r o t u b e r a n c ea n dc o m p l e x i t yT h eh i n d g u to r r e c “t mi sas i m p l et u b eC e l l so f t h
13、ed i g e s t i v es y s t e mi na l lf e e d i n gs t a g e ss h o wt h e p r e s e n c eo fa c i dm u c i n sa n dg e n e r a lp r o t e i n ，w h i l et h ei n n e rm a r g i n so ft h ef o r e g u t a n dc o n n e c t i v e t i s s u e so f t h eg l a n d f i l t e ra r e p o s i t i v e f o r c o
14、 l l e g e n T h eB e T O I l Ss y s t e mp l a y sp i v o t a lr o l ei ne , o o r d i n a t i o no fb o d ya c t i v i t i e sa n d c o p i n gw i t ht h et a s ko f e o n t r o l l i n gt h eb e h a v i o r a la c t i v i t i e sd u r i n gl a r v a ld e v e l o p m e n t I np r e s e n ts t u d
15、y ，w eg i v eab a s i cd e s c r i p t i o ni nt h ee a r l ys t a g em o r p h o l o g y o f n e r v o u s s y s t e mi nLv a n n a m e ib yc l a s s i c a lh i s t o l o g i c a lt e e h n i q , a e s R e s e l l sr e v e a l e dt h a t n e u r o p i lf i r s te m e r g e di nN js t a g ea n dt h
16、ef r o n tp a r to f n e r v o u ss y s t e ms t a r t e dg e t t i n g s t r u c t u r a ls h a p ei nN 3w h e r et h eg a n g l i o n sw e r ec o a l e s c e di nf r o n tp a no f h e a dT h e c o m p l e t e s t r d c t u r eo fc e n t r a ln c i v o u ss y s t e mi n c l u d i n gp r o t o 一，d e
17、 u t o a n d t r i t o e e r e b r u mw 蓝o b s e r v e di nN 6s t a g eT h es t r u c t u r a le x p a n s i o no f B e i v o l Bs y s t e m i ns u c c e s s i v es t a g e sw o sc o n t i n u e da n dp r o t o c e r e b r u md i f f e r e n t i a t e di n t oa n t e r i o ra n d p o s t e r i o rm
18、e d i a np r o t o e e r e b r u ma tZ 3s t a g eT h eo p t i cg a n g l i o n s ，s u b _ e s o p h a g e a l g a n g i i o n sa n dp l e o ng a n g l i o n sw e r ed i v i n e ri n z o e as t a g eF u r t h e r m o r e ，w ed i s c u s s t h er e l a t i v i t yb e t w e e nt h ed e v e l o p m e n
19、to f o l f a c t o r yl o b e sa n dt h ev o h m t a r ym o v e m e n t o f l a l v a I t i sb e l i e v e dt h a th a e m a t o p o i e t i ct i s s u e ( H P T ) i st h es o u r c eo fh a e m o c y t e s p r o d u c t i o n i nc r u s t a c e a n sa n dd e f e n s i v er o l eo fh a e m o c y t e
20、si s p m g r e s s i n gb u t i n v e s t i g a t i o n so ns t r u c t u r eo fH P T a r el i m i t e dh e n c et h i ss t u d yh a sb e e nd e s i g n e di n w h i c hw ei n v e s t i g a t e dt h eg e n e s i sa n dm o r p h o l o g yo fh a e m a t o p o i e t i ct i s s u e ( H P T ) a n dt y p
21、e so fh a e m o c y t eb a s e do i li t s m o r p h o l o g ya n dc y t o c h e m i c a lf e a t u r eu s i n g h i s t o l o g i c a l a n dh i s t o e h e m i s t i c a lm e t h o d sf h er e s u l l sr e v e a l e dt h a tH P Ti nL T 1 v a n n a m e ii sn o tv i s i b l eh i s t o l o g i c a l
22、l yi nm y s i sa n de a r l yt w op o s tl a r v a e ( P I P 2 ) ， a n de m e r g e si nP 3w h i c hl o c a t e si ne p i g a s t f i cr e g i o nT h eH P Ts h o w e dac o n d n u o u s p r o p a g a t i o no fc e i l si ns u c c e s s i v ep o s tl a r v a ls t a g e s F o u rt y p e so fc e l l sC
23、 a l lb e i d e n t i f i e di nt h eH P Tf r o ma d u l ts p e c i m e na n dm i t o t i ca c t i v i t yi sv i s i b l eo no c c a s i o n i nt h eH P TT h eh a e m o c y t e sh a sb e e nd i f f e r e n t i a t e di n t of i v et y p e sa n ds o m eo f t h e s e t y p e sa r ec o - r e l a t e dw
24、 i t ht h eH P T c e l l sT h ec y t o c h e m i c a ls t u d i e ss u g g e s t e dt h a tt y p e Ia n dt y p eI Ic e l l so fh a e m o c y t e sa r cP A Sp o s i t i v ew h i l es c a n t yp r e s e n c eo f p r o p h e n o l o x i d a s ew a so b s e r v e di nt y p e1 c e l l ss i m i l a r l yt
25、 h et y p eIc e l l sa r cS u d a n B l a c kB p o s i t i v ea n dm n o f t h ec e l l ss h o w e dw e a ka c t i v i t ya g a i n s tt h el i p i dd e t e c t i v e s t a i nB e s to fk n o w l e d g et h i si st h ef i r s te f f o r tt o w a r d st h eg e n e s i so fH P Ta n di t s r c l a g o
26、n w i t hc i r c u l a t i n gh a e m o c y t e s i n Lv a n n a m e i T h es e c o n dm no ft h es t u d yf o c u s e st w oi m p o n a mi m m t m er e l a t e dg e n e s C y e h i p h i l i nA a n dP m l i f e r a t i n gc e l ln u c l e a ra n t i g e n ( P C N A ) ；t h eo b t a i n e dr e s u l
27、t sa r e a sb e l o wr e s p e c t i v e l y C y c l o p h i l i n sa l eu b i q u i t o u sp r o t e i n sw i t ha l le n z y m a t i ca c t i v i t yo f p c p t i d y l - p r o l y l c i s t r a i l si s o m e r a s e ( p p l a s e ) ，w h i c hp l a yi m p o r t a n tr o l e si nav a r i e t yo fs
28、 t r e s s r e s p o n s e sI np r e s e n ti n v e s t i g a t i o naC y c l o p h i l i nAg e n eh a sb e e nc l o n e df r o mw h i t e l e gs h r i m p ( L i t o p e n a e u sv a n n a m e Ob yr a p i da m p l i f i c a t i o no fe D N A ( R A C E ) a n d a n c h o r e dP C Rm e t h o dT h ef u
29、l ll e n g t ho ft h es h r i m pLv a n n a m e iC y p Ac D N A ( L v C y p A ) i s8 5 5b p ，c o n t a i n i n g4 9 5b po fo p e nr e a d i n gf r a m e ( O R F ) ，e n c o d i n g1 6 4 a m i n oa c i d sw i t ha ne s t i m a t e dm o l e c u l a rm a s so f1 76k D a T h eL v C y p Ah a sh i g h h o
30、m o l o g yw i t ht h a to f o t h e rk n o w no r g a n i s m sa n d i th a sf o u rB s t r a n d sT h er e a lt i m e P C Ra n a l y s i sr e v e a l e dt h a ti t se x p r e s s i o ni su b i q u i t o u sa n de x p r e s s i o nl e v e li sh i g h e i “ i n m u s c l e ，g i l l ，l y r e p h o i
31、do r g a na n dh e p a t o p a n c r e a s er e s p e c t i v e l y T h et i s s u e s c h a l l e n g e dw i t hV i b r i oa n g u l l a r i u mr e v e a l e dt h a ti nh e p a t o p a n c r e a s ei tw a s t h el o w e s t a t6ha n dh i g h e s ti n4 8hT h er e s u l t sr e v e a l e dt h a tt h e
32、L v C y p Am i g h ti n v o l v ei n p o t e n t i a lr o l eo f i n n a t ei m m u n i t y T h ep r o l i f e r a t i n gc e i ln u c l e a ra n t i g e n ( P C N A ) h a si m p o r t a n tr o l ei nn u c l e i ca c i d m e t a b o l i s ma n di t si m m u n er e s p o n s e sh a v ea l s ob e e nr
33、 e p o r t e d I n p r e s e n t i n v e s t i g a t i o nt h eP C N Aw a Sc l o n e df r o mLv a n n a m e if L v P C N A ) T h ef u l ll e n g t h c D N As e q u e n c eo fL v P C N Ae n c o d e s2 6 1a m i n oa c i d ss h o w i n gh i g hi d e n t i t yw i t h P C N A s r e p o r t e di no t h e
34、rs p e c i e s T i s s u ed i s t r i b u t i o no f t h eL v P C N Ar e v e a l e dt h a ti t s e x p r e s s i o ni so b v i o u si ng i l la n dm u s c l e I no r d e rt ou n d e r s t a n dt h er e s p o n s eo f b a c t e r i a lc h a l l e n g e m R N Al e v e lo f L v P C N Ai nh e p a t o p
35、a n c r e a s e w a sa n a l y z e da f t e r c h a l l e n g e db ypa n g u i l l a m m T h eo b t a i n e de x p r e s s i o np r o f i l eo f L v P C N Ai nt i s s u ei s v a r i a b l ei nd i f f e r e n tt i m ep o i n t T h ed a t ae n h a n c et h ee x i s t i n gk n o w l e d g eo fd e f e n
36、 s e m e c h a n i s m so fs h r i m pa g a i n s t b a c l e f i a K e y w o r d ：O n t o g e n e s i s ，D i g e s t i v es y s t e m ，C e n t r a ln e r v o u ss y s t e m ，h a e m a t o p o i e t i c t i s s u e ，C l o n i n ga n de x p r e s s i o n ，l m m u B er e l a t e dg e n e s ，L i t o p
37、e n a e u sv a n n a m e i 5A i l n $ a n dO b j e c t i v e s C h a p t e r2 O n t o g e n e s i so f d i g e s t i v es y s t e mi nL i t o p e n a e u sv a n n a m e i 2lI n t r o d u c t i o n 22M a t e r i a l sa n dM e t h o d s 23R e s u l t s 2 3IH i s t o l o g i c a lg e n e s i s 2 32H i
38、s t o c h e m i s t r y 2 4D i s e u s a l o n 25C o n c l u s i o n 9 2 0 2 1 ， 2 2 2 2 3 0 3 3 3 6 C h a p t e r 3 E a r l y d e v e l o p m e n to f n e r v o u ss y s t e m i n L i t o p e n a e u sv a n n a m e L 31I n t r o d u c t i o n 32M a t e r i a l sa n dM e t h o d s 3 7 3 8 3 9 33l G
39、e n e s i sa n dd i f f e r e n t i a t i o no f b r a i n3 9 3 32G e n e s i sa n dd i f f e r e n t i a t i o no f o l f a c t o r yl o b e sa n do p t i cg a n g l i o n s3 9 333G e n e s i so f g a n g l i o n 3 4D i s c u s s i o n C h a p t e r4 G e n e s i so f H a e m a t o p o j e 矗ct i s s
40、 u ea n dC y t o c h e m i c a lS t u d yo f H a e m o c y t e si nL i t o p e n a e u sv a n n a m e i 4l I n t r o d u c t i o n 42M a t e r i a lM e t h o d s 4 2 2H i s t o l o g yo f H a e m a t o p o e t i ct i s s u e ( H P D 4 23C y t o c h e m i c a la s s a y so f h a e m o c y t e s 4 231
41、H a e m o c y l eh a r v e s t i n g 4 232 G i e m s a sd y e 4 233 W r i g h t G i e m s 42 34P e r i o d i ca c i dS c h i f 1 2 4 235S u d a nB l a c kB s t a i n i n g 4 236P r o p h e n o l o x i d a s e 43I G e n e s i so f H a e m a t o p o e t i ct i s s u e 4 0 4 3 4 32S t r u c t u r e o f
42、 H P T l nA d u l t 5 1 4 33H a e m o c y t em o r p h o l o g ya n dc y t o c h e m i c a la s s a y 5 2 4 4D i s c u s s i o n 5 8 v 】 i i i 5 26R e a lt i m ea n a l y s i so f L v C y p Am R N A e x p r e s s i o n 一 5 26S t a t i s t i c a l A n a l y s i s 53R e s u l t s 5 31C l o n i n ga n
43、ds e q u e n c ea n a l y s i so f e D N Ae n d o c i n gL v C y p A 5 32P y l o g e n e t i ca n a l y s i so f L v C y p A 5 33T i s s u ed i s t r i b u t i o no f L v C y p Am R N A 5 34E x p r e s s i o nl e v e lo f c o n t r o la n db a c t e r i a lc h a l l e n g e dg r o u p s 5 4D i s c u
44、 s s i o n C h a p t e r6 e D N Ac l o n i n go fP r o l i f e r a t i n go fc e l l n u c l e a ra n t i g e n ( P C N A ) a n d e x p r e s s i o n i nw h i t el e gs h r i m p 幢i t o p e n a e u s ”na f t e rc h a l l e n g ew i t h 1 7 b r l oa n g u i l l a r u m 6II n t r o d u c t i o n 6 2M
45、a t e r i a l sa n dM c t h o d s 6 2lE x p e r i m e n t a lS h r i m p s 7 8 7 9 7 9 舶 研 盯 郇 m m m 弭 7 9 7 9 8 0 8 0 8 5 8 6 8 9 1 1 8 1 2 0 1 2 l 舯 舯 C h a p t e r 1I n t r o d u c t i o n T h eo c e a r lp o s s e s s e sv a r i e t yo f f o o dr e s o u r c e ss u c ha s ( s e a w e e d s ，m o
46、l l u s c s ，f i s h a n dc r u s t a c e a n s ) T h ep r o d u c t i o no f g l o b a lc a p t u r e df i s h e r i e sa n da q u a c u l t u r ed u r i n g 2 0 0 9p r o v i d e d1 4 5m i l l i o nt o r m e sa m o n gw h i c h4 51 m i l l i o nt o n n e sw a ss h a r e db y i n l a n df i s h e r
47、i e sr e S o u r c e sw h i l er e s to f i te x p l o i t e df r o mm a r i n ew a t e r s ( F A O ，2 0 1 0 ) A b o u to n eh u n d r e dt w e n t ym i l l i o nt o n n e sw e r eu t i l i z e df o rh u m a nc o n s u m p t i o na n d 2 73m i l l i o nt o n n e sw e r eu t i l i z e df o rn o n f o
48、 o dU S e SF i l l i n gu pt h eg r o w i n gd e m a n do f h u m a nc o n s u m p t i o n ，t h ea q u a c u l t u r eh a sa ni m p o r i a n tc o n t r i b u t i o n N u m b e r so f c o m m e r c i a l l yi m p o r t a n tm a r i n ea n df r e s hw a t e rs p e c i e sa r eb e i n gc u l t u r e d
49、a l la r o u n d t h ew o r l di n c l u d i n gC h i n am a i nl a n d E m p l o y m e n ti nF i s h e r i e ss e c t o r B ya g e st h ee x p l o i t a t i o no fm a r i n er e s o u r c er e m a i n e dt h es o u r c eo fi n c o m ea n d b a s i s o f l i v i n g f o r m i l l i o n so f p e o p l eD a t a f r o mF A O ，2 0 1 0s u g g e s t e d t h a tu n t