壳寡糖单体的制备及表征.pdf

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1、壳寡糖单体的制备及表征 摘要 壳寡糖是壳聚糖水解产物，水溶性好，具有广泛的生理学功能，在抗肿瘤， 抑菌，抗氧化，调节血糖，降低血脂及生物材料中具有重要的应用价值。 本研究利用实验室自制壳聚糖酶水解高脱乙酰度壳聚糖制备壳寡糖，T L C ， M A L D I - T O F - M S 分析制各壳寡糖的组成。自制寡糖聚合度主要分布在2 - 6 ，并 含有少量更高分子量的壳寡糖。通过T L C ，H P L C ，M A L D I T O F M S ，简单分析 了壳聚糖酶水解作用模式。结果表明，该酶的酶切位点为G l e N O l c N 糖苷键， 而不能作用于G I c N A c G

2、l e N A c 位点。壳聚糖酶不能水解壳二糖，壳三糖和壳四 糖，对壳五糖水解速率缓慢，可将其水解为壳二糖和壳三耱，对壳六糖可水解为 壳三糖因此控制酶水解底物的脱乙酰度和时间，可制备不同系列的聚合度高的 壳寡糖。 壳寡糖在抗肿瘤，抑菌方面的研究文献中多有报道。但关于壳寡糖单体的理 论及应用研究报道较少。这主要局限于壳寡糖单体的分离较为复杂，壳寡糖单体 标准品价格昂贵。本文采用离子变换层析进行壳寡糖单体分离制备。选取具有离 子交换和分子筛双重功能的大孔强酸性聚苯乙烯离子交换树脂作为分离介质柱 体积为6 0 0 m L ，洗脱体积为柱体积2 0 倍，洗脱梯度为0 6 m o l L l2 m o

3、 l ，L ，流速 为3 0 0 m L h ，每1 5 0 m L 收集一瓶。可以分离出壳二糖至壳六糖。采用T L C 法， H P L C 法，M A L D I T O F M S 法分析壳寡糖单体，结果表明自制壳二糖。壳三 糖，壳四糖，壳五糖纯度较高，在9 5 以上。壳六糖纯度稍低，在8 5 左右。 研究了壳四耱壳五糖，壳六糖对人肝癌细胞H e P G 一2 、人肺癌细胞 N C I H 4 6 0 、人胃癌细胞M G C 8 0 3 、人结肠癌细胞L O V O 体外增殖实验的影响。 结果表明，三种壳寡糖在高浓度时，对肿瘤细胞均有一定的抑制作用。壳寡糖对 肿瘤细胞的抑制与其聚合度有一

4、定的关系。壳寡糖对肝癌细胞H e P G 2 的抑制作 用随着聚合度的增加而增强，对人胃癌细胞M G C 一8 0 3 的抑制作用随着聚台度增 加而降低。这可能与肿瘤细胞表面受体订，乏，具体的作用机理，需要进步研究。 采用琼脂平板扩散法探讨了氨基葡萄糖，先二糖，壳二耱，壳四糖，壳矗糖 壳六枯对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、鳗弧卣、嗜水气单胜苗州种细茼体外抑苗 试验。结果表明，壳二糖时大肠杆菌、金黄色借萄球菌、嗜水气雌胞菌有较强抑 9 制作用。壳三糖对大肠杆菌，嗜水气单胞菌有抑制作用。壳五糖对嗜水气单胞菌 有一定的抑制作用。其中壳二糖抑菌活性最强。壳寡糖单体的抑菌性是随着分子 量的降低而增强，这或许

5、是分子量越小，越容易进入细胞壁的空隙结构内，干扰 细胞的新陈代谢，以达到杀死细菌的目的。 关键词：壳寡糖单体：离子交换层析；抗肿瘤；抑菌 P r e p a r a t i o na n dc h a r a c t e r i z a t i o no fc h i t o o l i g o s a c c h a r i d e m o n o m e r s A b s t r a c t C h i t o o l i g o s a c c h a r i d e ( C O S ) w i t ht h ea d v a n a g eo fh i g hw a t e rs o

6、 l u b i l i t y i st h e h y d r o l y s i sp r o d u c t so f e h i t o s a n ，i th a se x t e n s i v ep h y s i o l o g i c a lf u n c t i o n sw h i c hp l a ya l l i m p o r V m tr o l ei na n t i t u m o r ，a n t i m i c r o b i a l ，a n t i o x i d a n t ，r e g u l a t i n gb l o o ds u g a

7、r ， d e c r e a s i n gb l o o dl i p i da n db i o m a t e r i a la n ds oo n C h i t o s a nw i t hh i g hd e g r e eo f d e a c e t y l a t i o nc o u l db eh y d r o l y z e db yc h i t o s a n a s e w h i c hw a sp r e p a r e di no u rl a bt oC O S ，w h i c hw a sa n a l y s e db yT L C ，M A L

8、 D I - T O F M ST h eh y d r o l y s i sp r o d u c tc o n s i s t e do fC O Sw i t hd e g r e eo f p o l y m e r i z a t i o n ( D P ) 2 - 6 m a i n l ya n das p o to fC O Sw i t hh i g h e rD RH y d r o l y t i cm o d e lo fc h i t o s a n a s ew a s a n a l y s e ds i m p l y b yT L C ，H P L C ，M

9、 A L D I 一_ r O F - M S C h i t o b i o s e ，c h i t o t r i o s e ，c h i t o t e t r a o s ec o u l dn o tb eh y d r o l y z e db yc h i t o s a n a s e ，c h i t o p e n t o s ew a sh y d r o l y z e ds l o w l y i n t oc h i t o b i o s ea n dc h i t o t r i o s ea n dc h i t o h e x a o s ew e r

10、eh y d r o l y z e dt oe h i t o t r i o s e A s u c c e s s i o no f C O Sc o u l db ep r e p a r e db yc o n t o r l l i n g s u b s t r a t ew i t hd i f f e r e n td e g r e e s o f a c e t y l a t i o n ( D A ) a n dr e a c t i o nt i m e A p p l i c a t i o n so f C O Si na n t i - t u m o ra

11、n da n t i m i c r o b i a lh a db e e nr e p o o e d ，b u tt h e r e s e a r c ho ft h e o r ya n d a p p l i c a t i o na g o u lC O Sm o n o m e r sr e p o s e dr a r e l yT h i s c o a d i t i o nw a so a n f i n e dt ot h ec m p t e xp r o c e s so fC O Sm 。m “ss e p a r a t i o na n d t h e i

12、re x p e n s i v ep r i c eI nt h i ss t u d y ，C O Sm o n o m e r sw e r es e p a r a t e db yi o ne x c h a n g e c h r o m a t o g r a p h yS t r o n g l ya c i d i cm a c r o p o r o u sp o l y s t y r e n ec a t i o ne x c h a n g er e s i n sw a s s e l e c t e da s s e p a r a t i n gm e d i

13、u m ，w h i c hh a st h e f u n c t i o n sw i t hi o ne x c h a n g ea n d m u l e c u a rs i e v eT h es e p a r a t i n ge f f e c tw a sp e r f e c ti nt h ec o n d i t i o n sC o l u m n v o I u m e ：6 0 0 mL = e l u t i o nv o l u m e ：1 2 L ；g r a d i e n ta l u t i o n ：06 m o l L - l2 m o l

14、L 1 l o wv e l o c i t y ： 3 0 0 m L h ；p a c k e dv o l u m e ：l5 0 m LP u r i t yq u o t i e n to f C O S m o n o m e r s w a sa n a l y s e db y T LC t I P C M A L D I - T O F - M SR e s u l t si n d i c a t e dt h a tt h e p u r i t yq u o t i e n t s o fC h i t o b i o s ec h d o t r i o s ec h

15、 i t o t e t r a o s ea n dc h i t u p e n t o s ew e r eu pt o9 5 ，c h i t o b e x a o s e c o n t a i n e di m p u r i l y b u th ep u r i t yq u o t i e n tw a sa l s ou pI O8 5 T h ea c t i v i t yo fc h i t o l e t r a o s e c h i t o p e n l o s e c h i t o h e x a o s ea g a n i s tb e m a nh

16、 c p a t o m a c a r c i n o m ac e l l s ( 1 - l e P G - 2 ) ，H u m a n l u n g c a r c i n o m a c e l l s ( N C I - H 4 6 0 ) ，h u m a ng a s t r i c c a r c i n o m a c e l l s ( M G C 一8 0 3 ) ，h u m a n c o l o r e c t a l c a r c i n o m a c e l l s ( L O V O ) w e r e i n v e s t i g a t e d

17、i n t h i ss t u d yR e s u l t si n d i c a t e dt h a tt h r e ek i n d so fC O Si n h i g h c o n c e n t r a t i o nc o u l di n h i b i tt u m o rc e l l ，w h i c hh a ds o m ec o n n e c t i o nw i t hd e g r e eo f p o l y m e r i z a t i o nT h ei n h i b i t i o nr a t e so fc e l lr e p r

18、o d u c t i o no i lH e P G 一2i n c r e a s e dw i t h t h ei n c r e a s eo f d e g r e eo f p o l y m e r i z a t i o n ，b u tt h er a t e so nM G C 一8 0 3d e c l i n e dw i t ht h e i n c r e a s eo f D R T h a t m i g h tb e i nc o n n e c t i o n w i t h t h er e c e p t o r o f t u m o rc e l

19、l s T h ea g a rd i f f i a s i o nm e t h o dW a Su s e dt om e a s u r et h ez o n eo fi n h i b i t i o no f g l u c o s a r n i n e ，c h i t o b i o s e ，c h i t o t r i o s e ，c h i t o t e t r a o s e ，c h i t o p e n t o s e a n dc h i t o h e x a o s e a g a i n s tC o l i b a c i l l u s ，S

20、 t a p h y l o c o c c u sa u r e u s ，H b r i oa n g u i l l a r u ma n dA e r o m o n a s h y d r o p h i l aT h er e s u l t ss h o w e dt h a tc h i t o b i o s eh a ds t r o n ga n t i b a t e r i a le f f e c ta g a i n s t C o l i b a c H l u s ，S t a p h y l o c o c c u sa u r e u s a n dA e

21、 r o m o n a sh y d r o p h i l aC h i t o t f i o s eh a d a n t i b a t e r i a le f f e c ta g a i n s tC o l i b a c i l l u sa n dA e r o m o r t a sh y d r o p h i l a C h i t o p e n t o s eh a d l i t t l ea n t i b a t e r i a le f f e c ta g a i n s tA e r o m o n a sh y d r o p h i l aA m

22、 o n gt h eg r o u p so fC O S m o n o m e r s c h i t o b i o s eh a dt h eI n t e n s e s ta n t i h a t e r i a 】e f f e c tw j t hi n c r e a s eo fD E a n t i b a t e r i a le f f e c to fC O Sm o n o m e r sd e l i n e dT h er e a s o nm l g h tb et h a tt h ei n t e r s t i c eo f c y t o d e

23、 r mw a se n t e r e de a s i l yb yC O Sw i t hl o wm o l e c u l a rw e i g h tT h em e t a b o l i s mo f c e l lw a si n t e r f e r e db yC O St h a te n t e r e di n t oc e l l s K e yw o r d ：c h i t o o b g o s a c c h a r i d em o n o m e r ；i o n e x c h a n g e c o l u m nc h r o m a t o

24、g r a p h y ； a n t i t l l f f l o r ；a n t i b i c t e r i a 】 日录 第一章前言 1 l _ 1 引言 1 12 壳寡糖的制备 1 】2l 化学降解法 1 l22 物理降解法 2 1 2 3 酶法制各壳寡糖 2 l 3 竞寡糖的应用， 3 13 1 壳寡糖在医药方面的应用 3 132 壳寡糖在农业方面的应用 6 l3 3 壳寡糖在食品方面的应用 7 14 壳寡糖衍生物的研究进展 8 1 5 壳寡糖的仪器分析方法 一 l o 15 1 薄层色谱 1 0 】52 高效液相色谱 ，1 1 I 53 I “A L D I T O FM

25、S 1 2 1 6 壳寡糖单体的研究进展 1 3 l 7 离子交换色谱简介 1 4 17 1 离子交换剂的种类 1 5 172 大孔离予交换树脂 1 5 第二章壳寡糖的制各及壳聚糖酶水解作用分析1 6 2l 材料 1 6 2li 材料与试剂 1 6 21 2 仪器与设备 1 6 22 赛验部分 1 7 22l 实验方法 1 7 22l l 电位滴定法测壳聚糖脱乙酰度1 7 22 1 2 薄层层析 1 7 22l 3 高效渡相色谱条件 1 7 222 实验内容 17 222 】高脱乙酰度壳聚糖的制备 1 7 22 22 电位滴定法测定壳聚糖脱乙酰度 1 8 222 3 壳寡糖的制备 1 8 22

26、24 壳聚糖酶水解作用模式 】8 23 结果与分析 i 9 2 3l 高脱乙酰度壳聚糖和壳寡糖的制备 1 9 2 32 壳聚糖酶水解作用模式分析 2 0 2 3 2 l 壳寡糖酶A 对币l - J 脱乙酰度壳聚糖酶水解产物的分析 2 0 2 3 2 2 壳聚糖酶 对不州聚合度壳寡糖单体的酶解活性2 2 24 结论 第三章壳寡糖单体的制各及表征 3 】材料与方法 311 材料与试剂 3l2 仪器与设备 32 实验方法 32 l 壳寡糖样品的前处理 322 壳寡糖单体的分离 322l 离子交换树脂的前处理 3 2 22 装柱 3223 壳寡糖溶液的配制及上样 3 224 洗脱 3 ，225 收集

27、3 23 收集液的T L C 分析 324 溶液合并，后处理 325 壳寡糖单体的分析与表征 3251T L C 法分析壳寡糖单体 33 结果与分析 331 展开体系的优化 3 32 壳寡糖单体的分离 332l 洗脱液的浓度选择 3322 工艺参数的确定 3 323 收集液的舍并及后处理 3 33 壳寡糖单体的T L C 法分析、 334 壳寡糖单体的H P L C 法分析 3 35 壳寡糖单体的M A L O Ir 0 F 一惦分析 34 结论 第四章三种壳寡糖单体体外抑肿瘤活性研究 4I 试剂与仪器 ， 42 实验方法 42 】细胞培养相关溶渣的配制， 422 细胞培养 4 2 3M T

28、T 法检测细胞抑制率细胞消化 42d 数据处理 一 43 实验结果 44 结论 第五章壳寡糖单体抑菌试验 51 材料 j2 实验方法 52 、l 溶液配制 522 抑荫| 摆I 的测定 船M弘驰拍拍船弱踮船拍弱拍蚰拍号盯盯凹船孔孔弛站卯弛昀蛐仰蚰蚰吼引郇叭引 523 最低抻菌浓度 524 晶低杀菌浓度 53 结果分析 5 31 壳寡糖样品的抑菌作用 532 最低抑苗浓度 5 33 最低杀菌浓度 54 结果讨论 总结 不足之处及待续工作 参考文献 致谢 肌跎。豫肌拈弱盯 鼹 的 ：8 壳寡糖单体的制备女 第一章前言 1 1 引言 自1 8 5 9 年，法国人R 0 “g d 首先浓碱中处理甲壳素

29、得到壳聚糖后，这种自然界 唯一碱性高分子多糖的生物相容性、安全性、微生物降解性等优良性能被各行各 业广泛关注。壳聚糖由甲壳素慨乙酰化制成。甲壳素是地球上储量仅次于纤 维素的第二丈可再生的有机资源，利用虾蟹壳等水产加工废弃物进行壳聚糖的工 业化生产具有丰富的原材料优势。 壳寡糖( C h i t o - o l i g o s a c e h a f d e ，C O S ) 是壳聚糖( C h i t o s a n ，C T S ) 的降解 产物，是由2 1 0 f 氨基葡萄糖通过B - 1 ，4 - 糖苷键连接而成。壳聚糖因分子量 大，不溶于水溶液仅溶于某些酸性介质，应用受到了一定限制。而

30、壳寡糖具有 良好的水溶性及多种生理功能，使其在医药，农业，食品，化妆品等领域I - 6 得 到广泛的发展。 壳寡搪的功能研究，般都是在混台物的基础上。但有研究表明，壳寡糖单 体之间功能性存在差异，不同聚合度的壳寡糖单体在抑制肿瘤等方面，有显著的 不同。 1 2 壳寡糖的制备 目前，壳寡糖制各方法主要有化学降解法，物理降解法和酶法制备。 12 1 化学降解法 化学法制各主要包括酸降解和氧化降解。酸性溶液使壳聚糖糖苷键断裂，形 成聚台度不同的片段，因此，酸降解是制各壳寡糖较早使用的方法。上世纪5 0 到6 0 年代，就出现了用盐水水解法制备壳寡糖的报道I ”。此工艺简单易行，但反 应条件难控制，得

31、到的寡糖聚合度较低，且对环境造成严重影响。此后研究人 员希望通过控制反应条件或反m 体系来控制反应进程，以制得特定聚合度的壳 寡糖。L e eM o o Y e a l 等吲铀盐酸体系r f 】通过控制反应温度和时间制得聚合度 5 7 的壳寡祧。用这利，方法降解壳聚糖减少对环境的污染。然而，产品聚合 物寡糖含量根少产品相对分r 质量分却忧均一性差。8 e i i c h iT o k u r a “ I 和 K r i s t o f e r I 1 采；I 己酸亚6 l j 酸钠体系，水斛壳浆糖。反应条件温和，速率快，产率 壳寡耱单体的制各及表征 高，但在亚硝酸降解过程中使与壳募糖诸多生理活

32、性相关的氨基有一定程度的 损失，且制备过程中时环境造成的污染也很严重。 氧化降解是化学降解法中，较为常用的一种。尤其是过氧化氢氧化降解法。 不仅降解反应的速度快，产率高，而且该法反应物是无毒的，过氧化氢在反应后 变成水和氧气，没有残留，使降解产物的后期处理非常方便，对环境的污染小， 是一种比较理想的化学降解方法。刘琳等【川通过控制料液比，反应温度，时间， 过氧化氢浓度等，制各了聚合度6 - 8 的壳寡糖。 122 物理降解法 物理降解法主要包括微波降解法，超声波降解法和辐射降解法。 刘松I ”1 等研究了在不同酸性介质中，采用微波辐射对壳聚糖进行均相降解 反应，制备出不同分子量的壳聚糖。探讨反

33、应介质、过氧化氢与壳聚糖配比、微 波辐射功率和辐射时间对降解反应的影响。 王伟等【”用超声波降解壳聚糖，速度快，成本低，方法简单且此法不 破坏氨基含量。韩松涛 ”1 等研究了超声波对壳聚糖在乙酸溶液中降解的强化作 用证明超声波能显著促进壳聚糖的降解。 李治等m 恫Y 射线照射壳聚糖使之发生辐射降解，主要研究了以下三方面的 内容：降解反应的动力学；大分子链的断链机理：辐射对壳聚糖脱乙酰化度的影 响。结果表明，在T 射线照射下，壳聚糖遵循无规降解动力学规律发生辐射降解， 降解过程中壳聚糖的脱乙酰化度略有升高。 123 酶法制各壳寡糖 化学法国其效率低，产物聚合度不可控，产物难于分离，且污染环境，逐

34、渐 被舍弃。物理方法也因无法控制产物聚合度，且制备的产物聚合度较高而少有运 用于壳寡糖的大规模生产。因此条件温和，副反应少，反应较容易控制，壳寡耱 的分子量较均匀的酶法制备壳寡糖是当前研究的主要方向。 专一性酶降解法：专一性酶主要包括甲壳索酶壳聚糖酶和溶菌酶。甲壳素 酶和壳聚耱酶主要存在1 。细菌和真菌细胞t h 溶茁酶足上要存在于人的唾液和眼 泪，以段鸡赞的蛋自之中的种酶，能够降解一些微k 物细胞壁。S h a i l e s h 从 地衣芽孢丰T 茼分离出种新型构耐热住甲壳索酶，丑适温度为5 5 ，可以将甲壳 素水解成加甲兜壳二糖。瞬小娥等l ”1 从撵c J 2 2 3 2 6 发胖培养

35、澉中分离纯化得到 壳寡糖* 体的制各投表 2 种壳聚糖酶组分( C h i A C h i B ) ，酶C h i A 是一种外切氪基葡萄糖苷酶，主要从壳 聚糖分子或甲壳低聚糖分子一端依次切下氨基葡萄糖残基酶C h i B 是一种内切壳 聚糖酶，以随机进攻方式作用于壳聚糖分子链内部。杜昱光等人【”l 对溶菌酶， 壳聚糖酶以及其他一些酶分别降解壳聚糖的特性进行了比较分析，发现溶菌酶的 降解效率不如壳聚糖酶。 非专性酶降解法；非专一性酶主要包括纤维素酶，脂肪酶和蛋白酶。高维 等1 ”利用青霉来源的纤维素酶水解壳聚糖，由黏度变化的对比图可以看出，该 酶对壳聚糖具有较强的水解活力。陈季旺等1 2 0

36、I 采用超滤、制各电泳对木瓜蛋白 酶进行分离纯化，通过S D S P A G E 和H P L C 对此纯化酶组分进行纯度鉴定结果 显示为单一条带和单一峰，说明木瓜蛋白酶中存在具有水解壳聚糖活力的酶组 分。 1 3 壳寡糖的应用 131 壳寡糖在医药方面的应用 壳寡糖具有提高机体免疫力，抑制肿瘤细胞，强化肝脾功能，降低血脂，调 节胆固酵，降低血压，调节血糖，排出体内毒素及重金属，改善肠道微生态环境， 增殖有益菌群等多种功能。 壳寡糖的抑制肿瘤作用的研究是近些年的热点。O a c h i T 1 2 1 1 等研究发现3 个 壳募猎通过六亚甲基空间通道与5 一氟屎磕啶【5 F U ) 共扼结合后

37、，其抗肿瘤作用相 比于5 F u 得到增强，如果将菇轭复合物腹腔注射于P “ 8 淋巴细胞白血病小鼠中， 小鼠的生存时间延长；通过皮下注射应用于M e T H - A 纤维肉瘤或M H l 3 4 肝细胞 癌小鼠，发现其对肿瘤的生长存在抑制作用。而且此复合物不引起小鼠急性中毒 和体重的迅速下降。J 0 c n 等”恫不同相对分子质量的甲壳低聚糖对鼠S l 肿瘤 生长抑制情况进行了研究，结果表明分子量在5 x 1 0 3 I x l 0 4 壳寡糖有晟高的抗肿 瘤活力，抑制率达6 13 7 ，壳寡糖( M w lx 1 0 4 ) 。因此，甲壳低聚糖在体内的吸收情况及分子链睦度与其抗肿瘤活性相关

38、。 壳寡糖( 5 x 1 0 3 壳五糖 壳四糖。 表d _ 壳嘉糖A 、B 、C n 癌胞N C I H 4 6 0 体* 镕殖日 T a b 4 A n t l 。e ra c t l v i t yo f c h l t o o l i g o s a c c h a 6 d e s A , B dC 8 9 a l n s t N C I H 4 6 0o f H u m l u n g “c i n o m a M e a n S Dn = 5 + P 00 1v sN e g a t i v eC o n t r o l G r o u p O DI n h i b i t i v

39、 eR a t e N e g a t i v eC o n t r o l P o s i t i v eC o n t r o l 78 1 2 5 p g m L 56 2 5 p g m L 3 12 5 p g m L 6 25 p g m L 7 83 2 59 4 58 4 33 7 咄 瞄 一 =竺篡。 川 嘶 。 i 寡糖单件的制备女 M e a n S Dn = 5 “ P O0 1 坩N e g a t i v eC o n tr o l M e a n S Dn = 5 “P 0O ，v sN e g a t i v e C o n t r o l 壳寡藉4 # 制备丑

40、表征 一 囤4 - 2 壳寡暗A 、B 、C 对人肺癌自胞N C I - H 4 6 0 体外增殖影响 F J g4 - 2 A n t i c ra c t I V l 口o f c h h o o l i g “c c h 扪d A , 8 d C 日刖N C H 4 6 0 。r H 啪m l u n g 曲T c m o m a 壳寡糖对人肺癌细胞N C I H 4 6 0 体外增殖的影响也随着浓度的升高而加强。低浓度是， 抑制作用不明显高浓度时，有一定的抑制作用。昂太抑制率分别为l8 5 1 ，2 17 8 ，2 7 7 1 。 壳六糖抑制作用最大。 4 - 5 壳靠糖A 、B 、c

41、 对 肯癌细胞M G C 8 0 3 体外增殖的# 响 T a b4 5 A n t i r M l i v i l y o f c h h o o l i g o s a c c h a r i d c s A , B d Ca g a i n s t M G C - 8 0 3o f h u m m 蛐cc 眦i n o m a N e g a t i v eC o n t r o l P o s i t i v eC o n t r o l 78 1 2 5 p g m L 1 56 2 5 9 9 m L 3 12 5 9 9 m L A6 25 p g m L 1 2 5 9 9 m

42、 L 2 5 0 9 9 m L 5 0 9 p g m L 1 0 0 0 p g m L 2 0 0 0 I J g l m L 00 7 2 00 0 3 09 4 3 _ + 00 1 09 3 8 O0 1 09 0 2 00 1 3 + 08 9 7 _ + 00 1 6 9 25 2 19 8 24 9 62 4 63 4 壳寡耱4 # M & 4 0 0 0 p g l m L 07 4 1 O0 1 2 ”2 29 7 M e a n S Dn = 5 。P ( 00 1 惦N e g a t i v eC o n t - o l M e a n S Dn = 5 P t O

43、0 5 , “P c o0 v sN e g a t i v e C o n t r o l G r o u p O DI n h i b i t i v eR a t e N e g a t i v eC o n t r o l P o s i t i v eC o n t r o I 78 1 2 5 p g l m L 1 56 2 5 p g m L 3 12 5 p g m L C 6 25 P g ，m L 1 2 5 p g m L 2 5 0 p g m L 5 0 0 p g m L 09 5 4 00 1 1 09 4 8 00 2 9 24 2 O9 3 13 5 15

44、6 18 7 18 7 27 0 壳寡糖单体的制丑女征 M e a n S Dn - 5 1 P 00 1v N e g a l i v e C o n t r o l 目4 - 3 壳寡塘A 、B C 对 胃癌胞M G C 9 0 3 体外镕镕影响 F i g4 - 3A m p c 曲c e t i v i t yo r “l 啪1 1 9 嘞c c n d A B d CB g m n n M G C 8 0 3o f h 岫自a s cc a r c l n o m a 壳寡糖对人胃癌细胞M G C 一8 0 3 最大抑制率分别为2 29 7 ，2 1 ，184 8 。 抑制率随着分子

45、量的增加而降低。 表4 - 6 亮寡糖A ，B 、C 对人结肪癌目胞L O V O 体外增殖的蟛响 T a b 4 A n t i 一ra c t i v l t yo f c h l 【o o l j g o s a c c h 帆d B d C m 姐L O V O N e g a t i v eC o n t r o l 78 1 2 5 p g m t 1 56 2 5 p g m L 3 12 5 p g m L 6 25 p g m L A 1 2 5 p g m L 2 5 0 p g m L 02 0 2 00 1 08 0 2 00 0 7 07 9 3 00 2 1 7 5

46、0 3 08 7 19 8 27 2 40 8 45 7 壳寡糖单体的制备表征 M e a n S On = 5 * P O O l 惦N e g a t i v | E 。C o n t r o l M e a n S On = 5 “P O O t 雌N e g a t i v e C o n t r o l G r o u p g oI n h i b i t i v eR a t e N e g a t i v eC o n t r o l 7 , 8 1 2 5 p g m L 1 56 2 5 p g m L 3 12 5 p g m L 6 25 p g m L C 1 2 5

47、p g m L 2 5 0 l J g m L 5 0 0 p g m L 0 1 8 2 + _ 00 1 9 07 5 7 _ + 00 1 4 + 7 74 5 28 5 7 1 9 62 0 7 1 9 9 1 7 85 5 壳寡糖单体制备表征 M e a n S Dn = 5 P 00 & “P 0 0 1v sN e g a t i v eC o n t r o l 目4 - 4 壳寡塘A 、B 、c 结腑癌细胞L O V O # * 增殖的# 响 髓4 4A n “自a c t i v i t yo f n l 姗嘶s a c c h 帅d c s B d ca g m n s l L O V O 壳六糖在浓度较低时，表现出不错的抑制作用，但随着浓度的增加抑制作用 增加不明显。壳四糖在高浓度时，抑制作用最强。 4 4 结论 三种壳寡糖单体对H e p G - 2 、N C I H 4 6 0 、M G C 一8 0 3 和L O V O 体外增殖具有 一定的抑制作用。但仅在高浓