斑马鱼补体调节因子RCA group 2基因簇与CD59基因的鉴定、表达和功能研究.pdf

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1、日“ # ，目，R c g r o u p2 $ B I # 与( 聊# 鼯2 4 n 自 R 斑马鱼补体调节因子R C Ag r o u p2 基因簇与c D 卯基因的鉴 定、表达和功能研究 摘要 补体是先天性免疫系统重要的组成部分，它的激活受体内一系列补体调节因 子精密的调控，咀防补体的过度激活埘机体细胞造成损伤，同时也避免补体成分 的浪费。补体的调控主要集中在c 3 转化酶的形成、稳定和攻膜复台体形成的关 键步骤上。在人中，调节c 3 转化酶的补体调节因子的基因都紧密连锁在1 号染 色体的长臂上( 1 q 3 2 ) ，称为补体激活调节因子R C A 基因簇，这个基因簇可以分 为g r

2、o u p1 和g r o u p2 ：而调节攻膜复合体形成的关键补体调节因子是C D 5 9 。虽 近在斑马鱼中己经有R C A g r o u p1 基因簇的相关报道，而其他的补体调节因子尚 无报道。为了完善对斑马鱼补体调节机制的了解，本文对斑马鱼R C A g r o u p2 基 园簇和C D 5 9 基因开展了研究。我们发现并克隆出了R C Ag r o u p2 基因簇的两个 基因( Z R C I 和Z R C 2 ) 和C D 5 9 基因，它们具有与高等动物相关基因相似的基因 和蛋白特征，且它们呈母源性表达，尤其是Z R C I ，可能在胚胎发育的早期通过 母源传递来起保护作

3、用。 斑马鱼R C Ag r o u p 2 基因簇的两个基因Z R C I 和Z R C 2 相邻，并与P F K F B l 基 因紧密连锁，而位于p F K F B 2 基因下游I7 M k b 处，这与蛙、鸡和人的R C Ag r o u p 2 基因簇稍有不同。但是，R C Ag r o u p2 基因相对于P F K F B 2 基因的方向和斑马 鱼R C Ag r o u p2 基因编码蛋白的顺序与蛙，鸡和人的相一致。Z R C l 和Z R C 2 彼 此之间具有7 11 的一致性，说明它们是在鱼类从与哺乳动物共同的祖先中分化 出来之后通过基因复制产生的。Z R C l 和朋印

4、分别编码一个l 型膜蛋白和可溶 性蛋白，两者具有不同的表达谱，这说明它们可能已经发生了功能性的分化。此 外，L P S 能够显著的上调z R c 2 基因的表达，说明z R 可能与急性时相反应有 关。 斑马鱼C D 5 9 基因所编码的蛋白由N 一端2 5 个氨基酸组成的信号肚、c 一端2 1 个氧基酸组成的G P I 锚定区域和中问的L U 结构域组成。成熟的斑马鱼C D 5 9 蛋 白具有保守的1 0 个半胱氨酸残基，使得斑马鱼C D 5 9 具有与人C D 5 9 相似的三 维结构，对功能的埕挥非常重要。唯一与哺乳动物不同的是斑马鱼C D 5 9 它没有 m 9 鱼朴体调目子R C Ag

5、 r o u p2 幕月薜# 删g 目鉴定、表达功“ R N 糖基化位点，这与其他鱼类C D 5 9 情况一致，推测N 一糖基化修饰对硬骨鱼C D 5 9 功能的发挥n J 能并怍必须的。直线同源分析显示斑马鱼C D 5 9 基因与F B X 0 3 基 因紧密连锁，且细胞定位分析显示斑马鱼6 7 ) 5 9 基因编码的蛋白主要以膜蛋白的 形式在细胞膜J ：表达，这些都与再他高等物种相似。不过与高等动物不同的是， 斑马鱼C D 5 9 在m R N A 水平和蛋白水平在脑中表达量都异常的高。我们还拉现 体外表达的斑马鱼C D 5 9 能够识别细菌并在浓度高时具有一定的杀菌作用，表明 除了具有经

6、典的补体调节功能外，C D 5 9 可能还可咀通过对病原苗的识别及直接 杀菌作用而对鱼类重要的器官脑的保护起重要作用。 总而言之，本文第一次报道了斑马鱼R C Ag r o u p2 基因簇和终米裂解途径的 补体调节蛋白的存在，表明鱼类具有一套较为完整的补体调节系统，为人们理解 低等物种的防御机制提供了新的信息。 关键词：斑马鱼，补体，R C Ag r o u p2 基因簇，C D 5 9 马鱼朴# * 目fR C A # ，o u p2 # I g 麟oC D 5 9 基8 自、4 H 功“ 凭 I d e n t i f i c a t i o n ，e x p r e s s i o n

7、a n df u n c t i o n a lc h a r a c t e r i z a t i o no f r e g u l a t o ro f c o m p l e m e n ta c t i v a t i o n ( R C A ) g r o u p2g e n e c l u s t e ra n dC D 5 9g e n ei nz e b r a f i s h A b s t r a c t C o m p l e m e n ti sac e n t r a lc o m p o n e n to fi n n a t ei m m u n i t yT

8、op r e v e n ta u t o l o g o u s t i s s u ed a m a g ea n dt oa v o i dw a s t e l h c o n s u m p t i o no fc o m p o n e n t s ，a c t i v a t i o no ft h e c o m p l e m e n ts y s l e m i s t J g h l l yr e g u l a I e db yag r o u po f c o m p l e m e n tr e g u l a t o r yp r o t e i n s ， w

9、h i c hp r i m a r i l yr e g u l a t et h ef o r m a t i o na n ds t a b i l i t yo fC 3c o n v e r t a s e sa n dt h e f o r m a t i o no fM A C ( m e m b r 8 1 1 ea l l a e kc o m p l e x ) I nh u m a n s ，t h ec o m p l e m e n t r e g u l a t o r yp r o t e i n sw h i c ha c tt or e g u l a t e

10、C 3c o n v e r t a s e sa r ec l u s t e r e do l lt h el o n g a m lo f c h r o m o s o m e1 ( I q3 2 ) ，a n dd e s i g n a t e dt h er e g u l a t o ro fc o m p l e m e n ta c t i v a t i o n ( R C A ) g e n el o c u sT h eR C Ag e n e sc a nb ec a t e g o r i z e di n t ot w og r o u p s ：g r o u

11、 pI a n d g r o u p2T h ec o m p l e m e n tr e g u l a t o r yp r o t e i n ，w h i c hr e g u l a t e st h ef o r m a t i o no f M A C ， i sC D 5 9R e c e n t l y , R C A g r o u pI c l u s t e rh a sb e e nr e p o r t e di nz e b r a f i s h ，b u tt h es t u d y o no t h e rc o m p l e m e n tr e

12、g u l a t o r yp r o t e i n sr e m a i nl a c k i n gT ob e t t e ro n ru n d e r s t a n d i n g o fz e b r a f i s hc o m p l e m e n tr e g u l a t o r ym e c h a n i s m ，h e r ew ei d e n t i f i e da n dc l o n e dt w o R C A g r o u p2g e n e s ( Z R C a n dZ R C 2 ) ，a n dC D 5 9g e n eT h

13、e yh a v ea l lt h ef e a m r e s c h a r a c t e r i s t i co fc o r r e s p o n d i n gg e n e sI nh i g h e ra n i m a l sM o r e o v e r , t h e yO r ea m a t e m a l l y - t r a n s f e r r e df a c t o r s ，e s p e c i a l l yZ R C I ，w h i c hs e e m st r a n s f e r r e df r o mm o t h e r t

14、 oo f f s p r i n ga n dp o s s i b l yi si n v o l v e di nt h ep r o t e c t i n ge m b r y oa g a i n s tp o t e n t i a l p a t h o g e n s T h et w og e n e so fz e b r a f l s hR C A g r o u p2c l u s t e r s ，Z R C Ia n dZ R C 2 ，w e r ec l o s e l y l i n k e dM o r e o v e r , t h e yw e r

15、ec l o s e l yl i n k e dt ot h eP F 心B lg e n ea n dl o c a t e d1 7M k b d o w n s t e a mo ft h eP F K F B 2g e n e ，w h i c hi ss l i g h t l yd i f f e r e n tf r o mt h o s eo ff r o g ， c h i c k e na n dh u m a nH o w e v e r , b o t ht h ed i r e c t i o no fR C Ag e n e sr e l a t i v et o

16、P F K F B 2 a n d l h eo r d e ro f R C A g r o u p2g e n e - e n c o d e dp r o t e i n s i nz e b r a f i s hw e r ec o m p a r a b l e t o t h o s ei nf l o g c h i c k e na n dh u m a nZ R C Ia n dZ R C 2s h a r e d7 11 i d e n t i t yt oe a c h o t h e ri m p l i c a t i n gt h a tt h e ym i g

17、h th a v eo r i g i n a t e db yg e n ed u p l i c a t i o na f t e rt h es p l i to f 自j n ”# H 目，R C Ag r o l l p2 # _ 目箍定、女4 # 功研究 f i s h m a m m a l i a nc o m m o na n c e r t O F M o r e o v e r Z R C Ia n dZ R C 2e n c o d e dat y p e I m e m b r a n ep r o t e i na n das o l u b l ep r o t

18、e i n r e s p e c l i v e l y a n dd i s p l a y e d d i f f e r e n t e x p r e s s i o np a t t e r n ss u g g e s t i n g t h a tf u n c t i o n a ld i v e r g e n c eh a sa l r e a d yo c c u r r e d F u r t h e r m o r erI P Sc a nu p r e g u l a t et h ee x p r e s s i o no fz e b r a f i s hZ

19、 R C 2g e n eo b v i o u s l y , s u g g e s t i n gt h a tZ R C 2g o n em a yb er e s p o n s i b l ef o ra c u l ep h a s er e s p o n s e si nz e b r a f i s h f h ep r o t e i ne n c o d e db yz e b r a f l s hC D 5 9g e n ei sc o m p o s e do fap u t a t i v e2 5 - a n N H 2 - s i g n a lp e p

20、t i d e ，a2 1 一a aG P Ia n c h o r i n gr e g i o na n daL Ud o m a i n T h em a t u r e p e p t i d eo fz e b r a f i s hC D 5 9h a s t h ec o n s e r v e d1 0 一c y s t e i n es k e l e t o n ，m a k i n g t h e t h r e e d i m e n s i o n a ls t r u c t u r eo f z e b r a f i s hC D 5 9s i m i l a

21、r t o t h a to fh u m a n ，w h i c hp l a y s a ni m p o r t a n tr o l ei ni t sc o m p l e m e n tr e g u l a t o r ya c t i v i t yN op u t a t i v eg l y c o s l a t i o ns i t e W a Sf o u n di nz e b r a t i s hC D 5 9m a O , l l e p r o t e i n w h i c hi ss i g n i f i c a n td i f f e r e n

22、 tf r o m m m m a l i a nH o w e v e r , o t h e rt e l e o s tC D 5 9a l s oh a v en og l y c o s l a t i o ns i t ei ni t s d e d u c e da m i n oa c i d s e q u e n c e ，s u g g e s t i n g t h a tt h e p r e s e n c e o fg l y c o s l a t i o n m o d i f i c a t i o nm a yn o tb en e c e s s a r

23、 yf u rf u n c t i o no fC D 5 9i nt e l e o s tT h eA n a l y s i so f t h eg e n e sf l a n k i n gC D 5 9r e v e a l e dt h a tz e b r a g s hC D 5 9g o n ew a sc l o s e l yl i n k e dt o F B X 0 3g o n eM o r e o v e r ，t h ec e l l u a rl o c a l i z a t i o na n a l y s i ss h o w e dt h a tC

24、 D 5 9p r o t e i ni s m a i n l ye x p r e s s e di nt h ec e l lm e m b m n ei nt h ef o r mo fm e m b r a n ep r o t e i n ，s i m i l a rt o o t h e rh i g h e rs p e c i e sH o w e v e r , d i f f e r e n tt Oh i g h c rs p e c i e s ，t h ee x p r e s s i o nl e v e lo f z e b r a f i s hC D 5 9

25、i ss i g n i f i c a n th i g hi nb r a i nn om a l t e ri nm R N Al e v e lo rp r o t e i nl e v e l T h r o u g ht h er e c o m b i n a n te x p r e s s i o n i nEc o l i ，w ef o u n dz e b r a f i s hC D 5 9c o u l d r e c o g n i z es o m ep a t h o g e na n dh a dab a c t e r i c i d a la c t i

26、 v i t yw h e nt h ec o n c e n t r a t i o no f C D 5 9w a sh i g h ，i m p l i c a t i n gt h a te x c e p tf u r t h ec l a s s i c a lc o m p l e m e n tr e g u l a t o r y a c t i v i t y ，C D 5 9m i 曲p l a ya l li m p o r t a n tr o l e i np r o t e c t i n gf i s hb r a i nt h r o u g h p a t

27、h o g e nr e e o g n i z a t i o na n dd i r e c ta n t i s e p t i cf u n c t i o n T h i s i s t h e f i r s tr e p o r ts h o w i n g t h ep r e s e n c eo f t h eR C A g r o u p2c l u s t e ra s w e l la s C D i 9w h i c ha c ti nt h et e r m i n a lc o m p l e m e n tp a t h w a yi nz e b r a f

28、 i s h ，i m p l i c a t i n gt h a t z e b r a f l s hp o s s e s s e saw e l ld e v e l o p e dc o m p l e m e n tr e g u l a t o r ym e c h a n i s mI tp r o v i d e s ab e t t e ru n d e r s t a n d i n go f t h ed e f e n s em e c h a n i s mi nl o w e rs p e c i e s K e y w o r d s ：Z e b r a f

29、 i s h ，C o m p l e m e n t ，R e g u l a t o ro fc o m p l e m e n ta c t i v a t i o n ( R C A ) g r o u p2g e n ec l u s t e r C D 5 9 l V m 马鱼补体调目子R C Ag r o t l p2 基田簇m 日捧目的鉴定、表达U a 研究 缩略语 A m p ( A m p i c i l l i n ) K a n ( k a n a m y c i n ) L P S ( 1 1 p o P o I y s a c c h a r I d e s ) L

30、 T A ( 1 i p o t e i c b o i ca c i d ) P B SO h o s p h a t e b u f f e r e ds a l i n e ) B S Af B o v i n es e n m la l b u m i n l c D N A ( C o m p l e m e n t a r yD N A ) D A B ( d i a m i n o b e n z i d i n e ) D E P C ( D i e t h y lp y r o c a r b o n a l e ) D I G ( D i g o x i g e n i n

31、 ) d N T P ( D e o x y n b o n u c I e o s j d eg i p h o s p h a t e ) D T Tr D i t h i o t h r e i t o l l K c o l i ( E s c h e r i c h i ac o l O sa l l F e I d s ( S t o p 崎l O C O C ： U Sa u r e u s ) H R P ( h o r s e r a d i s hp e r o x i d a s e ) E D T A ( T h y l e n ed i a m i n e t e t

32、 r a a c e l i ea c i d ) G S H ( r e d u c e dg l u t a t h i o n e ) G S S G ( o x i d i z e dg l u t a t h i o n e ) H R P ( h o r s e r a d i s hp e r o x i d a s e ) I P T G ( i s o p r o p y l t h i o n - 口D g a l a c l o s i d e ) m R N A ( M e s s e n g e rR N A ) O R F ( O p e nr e a d i n

33、gf r a m e ) P A G E0 0 l y a c r y l a m i d eg e le l e c t r o p h o r e s i s ) P C R ( P o l y m e r a s ec h a i nr e a c t i o n ) R T - P C R ( r e v e r s et r a n s c r i p t i o nP C R ) S D S ( S o d i u md o d e c y ls u l f a t e ) T E M E D ( N ，N ，N N 1 。t e t r a m e t h y l e t h y

34、 l e n ) P B S ( P h o s p h a t eb u f f e r e ds a l i n e ) T r i s ( T r i s - ( h y d r o x y m e t h y l ) - a n f i n o m e t h a n e ) b p ( B a s ep a i r ) k b ( K i l o b a s e ) k D a ( K i l o d a h o n l 氢卞青霉豪 卡那霉素 脂多糖 脂磷壁酸 磷酸盐缓冲溶液 牛血清白蛋白 互补D N A 二氨基联苯胺 焦碳酸二乙酯 地高辛 脱氧核糖核苷三磷酸 二硫苏糖醇 大肠杆菌

35、金黄色葡萄球菌 辣根过氧化物酶 乙二胺四乙酸 还原型谷胱苷肽 氧化型型谷胱苷肽 辣根过氧化物酶 异丙基硫代半乳糖苷 信使R N A 开放阅读框 聚丙烯酰胺凝胶电泳 多聚酶链式反应 反转录多聚酶链式反应 十二烷基硫酸钠 N , 5 1 - N N 一四甲基乙二胺 磷酸盐缓冲液 三( 羟甲基) 氮基甲烷 碱基对 干碱基对 干道尔顿 ! ! ! ! 塑! ! ! 坠! ! 竺! ! 堕堡。i 堕! 型! ! ! ：! ! ! ! 塑! S ( s e c o n d ) H ( h o u r ) r p m ( r e v o l u t i o np e rm i n u t e ) V ( V

36、 o l l a g e ) 秽 小时 每分钟转数 电压 m q l # 目训目fR C Ag T o u p2 日麓与0 ) 5 9 摹目箍、遮# 功能* 究 第瘁文献综述 目录 l 免疫学研究的新模式生物一斑马鱼 l1 斑马协牲木特征 12 斑马鱼。o 免疫学研究 2 补体系统概述 2l 补体的定义与发现 22 朴体系统的命名 23 脊椎动物补体系统概述 3R c A 的研究概况。， 31R C A 蛋白的结构域特征 32 眦A 蛋白特征 33R C A 蛋白的补体调节机制 3 4R C A 在各物种中的研究进展 4 补体调节蛋白C D 5 9 的研究概况 qlC D 5 9 的发现 42

37、C D 5 9 的蛋白特征 4 3C D 5 9 与L y6 蛋白超家旅 44C D 5 9 的功能 4 5C D 5 9 在各物种中的研究进展 5 研究目的与技术路线 jI 研究R 的 1 7 52 技术路线 1 8 第二章斑马鱼R C g r o u p2 基因簇的鉴定、表达与进化2 0 l 前言 2 材料与方法 21 实验材料 22 实验方法 22l 斑马鱼肝脏总R N A 的提取与c D N A 模板的制备 2 22 斑马鱼R C Ag r o u p2 基因Z R C l 和劂的克隆 2 23 序列L L X , 与系统进化分析 224R e a lt i m eP C R 技术检测

38、斑马鱼Z R C I 和? 开馏基园表达谱 3 结果 2卫07 o舟挖他他H H “ ” 加 控挫站引弘 m 马鱼补体* 崮子R C Ag r o u p2 擘目辕bc 础# W ，女让和功能研R 3 】斑马鱼R C Ag r o u p2 基因Z I t C I 和Z R C 2 的克降 川 32 斑马鱼Z R C I 和Z R C 2 基因的序列分析 3 1 ：j3Z R 6 7 和侧的基因结构分析 3 7 3 4Z R C 和删的连锁与进化 3 8 35ZRCI和ZRC2的SCR的关系4】 36 斑马鱼Z R C I 和侧? 基因的表达模式 4 j 36I 础在不同组织中的表达 4 3

39、362Z R C s 在不同发育时期中的表达模式 4 d 36 3R e a l t i m eP C R 技术检测L P S 和I T A 处理对斑马鱼Z R C s 表达 的影响 4 6 4 讨论 第三章斑马鱼C 9 5 9 基因的鉴定、表达及功能研究 4 7 5 1 1 前言5 l 2 材料与方法 2I 实验材料 22 实验方法 22l 斑马鱼总R N A 的提取与c D N A 模板的制各 222 斑马鱼C D 5 9 基因开放阅读框的克隆 223 序列比对与系统进化分析 224R e a l t i f i l eP C R 技术检测斑马鱼C D 5 9 基因的表达情况 225 斑马

40、鱼C D 5 9 蛋白的原核重组表达 226 斑马鱼C D 5 9 蛋白的细胞定位研究 227 重组蛋白H 1sC D 5 9 功能研究 3 结果8 0 3l 斑马鱼0 D 5 9 基因O R F 片段的克隆8 0 32 斑马鱼C D 5 9 基因的生物信息学分析一一8 1 32l 斑马鱼C D 5 9 基因及编码蛋白的序列分析8 1 322 斑马鱼C D 5 9 基因的直线同源分析8 d 323 斑马鱼C D 5 9 基因结构分析8 4 324 斑马鱼C D 5 9 蛋白的氨基酸多序列比对分析8 6 325 斑马鱼C I ) 5 9 蛋白的系统进化分析8 8 33 斑马鱼C D 5 9 基因

41、的表达模式8 9 331R e a lt i m eP C R 技术检测斑马鱼C D 5 9 基因在不同组织中的表 达模式 8 9 332R e a l t i m eP C R 技术检测斑马鱼C D 5 9 基因在不同发育时期中 的表达模式 9 0 34 斑马鱼C D 5 9 重组蛋白的原桉表达9 1 34l 重组质粒p E T 一2 8 a C D 5 9 的构建 9 】 3 42 重组p E T 一2 8 a 删p 质粒表达菌种的构建9 3 H引黯别鄹耵“ ! ! ! ! ! 墅! ! ! ! 竺! ! ! 壁。! 丝! ! 坐! 、i ! ! ! ! 型 3 43 斑马鱼重组蛋白H i

42、s - C D 5 9 在大肠杆菌中融合表达与纯化 344 重组蛋白ls - C D 5 9 的鉴定 345 重组蛋白 l lsC D 5 9 的复性 3j 斑马鱼C D 5 9 蛋白的细胞定位 35l 斑马鱼重组蛋白H isC D 5 9 制各的多克隆抗体的检测 3 52W e a r e r nb l o t 技术检测斑马鱼C D 5 9 蛋白的细胞定位 36 重组蛋白H 1s C D 5 9 功能初探 361 重组蛋白H is - C D 5 9 与细菌的结合 362 重组蛋白H isC D 5 9 与L P S L T A 的结台 363 重组蛋白H i sC D 5 9 的杀菌活性

43、4 讨论 结论1 0 3 参考文献- - 1 0 5 附录- - 1 1 1 致谢- - - 1 1 4 作者简介 1 1 5 发表的学术论文- - 1 1 6 ”L蔷s；昕蛐g； W 马鱼补体目节吲干虻 g r o u p2 基因族与佃“ 基目的鉴定、& 选和功能院 第一章文献综述 l 免疫学研究的新模式生物斑马鱼 1l 斑马鱼基本特征 斑马鱼( D a n i or e r l o ) ，又名蓝条鱼，花条鱼，斑马担尼鱼困其体侧有像斑 马一样暗蓝与银色相问的纵条纹而得名，它属于硬骨鱼纲( O s t e i c h t h y e s u ) 辐鳍 亚纲( A c t i n o p t e

44、 r y g i i ) 鲤形目( C y p r i n i f o r m e s ) 鲣科( C y p r i n i d a e ) 短担尼鱼属 ( D a n i o ) 原产自印度东部、盂加拉国、缅甸和巴基斯坦1 1 , 2 1 o 斑马鱼是一种常见的热带鱼，生存能力强，对水质要求不高；物种稳定，个 体差异小，体型纤细，成鱼体长约3 “ - 4 厘米，体型呈纺锤形尾部微尖，尾鳍长 而成叉形：其背部为橄榄色，体侧从鳃盖后延伸至尾有像斑马一样的数条银蓝色 纵纹，臀鳍部也有与体侧相似的条纹。斑马鱼的雌雄较易鉴别，雄鱼体型修长 鳍大，蓝色条纹偏黄，臀鳍呈棕黄色：雌鱼体型肥大，尤其性成熟时

45、鱼体腹部膨 大，体色较淡，蓝色条纹偏蓝且鲜艳，臀鲭呈淡黄色【】l 。 斑马鱼生长发育较快且繁殖能力强。斑马鱼孵出后约3 个月便可达到性成熟， 性成熟的鱼每隔几天便可以产卵次，每次可产约2 0 0 颗以上的卵，卵子体外受 精，体外发育，胚胎发育速度同步，每次产卵能够牧获大量胚胎。胚胎通体透明， 易于活体观察1 2 I 。 12 斑马鱼与免疫学研究 人们对斑马鱼的研究最初是在6 0 年代末7 0 年代初，斑马鱼主要被用来在遗 传学和发育生物学领域进行研究。随着人们对斑马鱼认识的越来越深入，发现斑 马鱼也是个免疫学研究很好的模式生物口】。 与其他模式生物比，斑马鱼具备多个优点。它饲养容易，发育较快，

46、性成熟 周期短，主要的组织器官原基在2 4 小时便可形成，而且繁殖能力强，体外受精 和发育，易于观察和操作；胚胎通体透明，在普通显微镜下便可观察到它的发育 状态等，正是基于咀上诸多优点，使得斑马鱼成为近几年生命科学研究中最为重 要的模式脊椎动物之一I d J 。 多项研究发现斑马鱼的免疫系统已发育的较为完善。主要组织相容复台体 M H Cl 、M H CI I 在斑马鱼中都存在且在染色体上呈不连锁分布，同时在斑马 斑马鱼补体谢日子R “mo u p2 * 氤簇与翻“ 基因的鉴定、女选H 功能研究 鱼体内也发现了M H C I I l 基冈蔟。斑马鱼还可能具有与高等脊椎动物相似的细胞 园子或趋化

47、闻子。另外，斑- 5 亿体内还发现了和人白细胞受体簇( L e u k o c y l e 陀c e D t o rcJ u s t e r ，L R C ) 同源的雎闪序列。一般认为鱼类是撮早的具有获得性免 疫的纲，这使得对斑马鱼免疫系统的研究成为获得性免疫系统和先天性免疫系统 的进化起源、功能及相互关系研究的重要工具”J 。 2 补体系统概述 脊椎动物免疫系统非常的复杂和高效，它可以迅速地区分自体和异己，以保 护机体免受细菌、病毒和真核病原体等的侵害，同时免疫系统还能够清除掏亡或 坏死的细胞以及癌细胞等危险的信号，起到维持自身稳定和免疫监视的作用I ，q 。 脊椎动物免疫系统是由两个互相联系的亚系统组成，分别为先天性免疫和获得性 免症n 获得性免疫大约4 5 0 0 0 万年前软骨鱼和硬骨鱼中出现的它通过产生记忆细 胞及特异性的可溶的和膜相关的受体，如免疫球蛋白( k ) 和T 细胞受体( T C R ) ， 来保护机体免受周期性的感染。但是，获得性免疫系统的存在并没有使得先天性 免疫废弃。相反，先天性免疫反应作为机体防御的第一道防线，在获得性免疫发 挥作用前，可以保护机体免受许多微生物的攻击n 补体系统是先天性免疫系 统非