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1、!“# 及 $%“?） 分别再刺激 % !?;6?:5=?56 “ A?:9=7 （$%“DE?5: 58 9!5!5=?= 58 9E?F97; ?GD69?:B I?7C?DG DH7CED65=?= 9:?B7: “#$ %）RK85* )556785(9(:/+;R?LJ,LT6N U8= ! #$+ ?S,MJPS） !蚌埠医学院免疫学教研室， 蚌埠 “#$# “安徽医科大学病原生物学教研室， 合肥 “#$#“ 作者简介： 梅传忠 （1EI“ 年 ） ， 男， 硕士， 讲师； 通讯作者： 李柏青 （1E2$ 年 ） ， 男， 博士， 教授， 主要从事细胞凋亡方 面研究， (L8?：
2、?8_ SLMJJV PJ。 ! ! 近年来， 许多学者在研究中逐渐发现， #$+ 细胞 在抗结核杆菌 （%SPJLP01 （ 公司产品） ； 淋巴细 胞分离液 （中国医学科学院血液所产品） ； 新生牛血 清 （?32）（杭州四季青生物公司产品） ； 9.*;01 培养液制备细胞悬液 : U:1;VNI W:， 加入 V NI W: 的细胞悬液； 再加入 9.* 孔培养板一块， 分成 Z 个实验组即对照组 （仅为细胞悬液） 、 1 分钟后， 除对照组及 1S 1 #,% NI） : 年第 “#$ “#$%! A AD8E9+8 均显 著抑制 “#$%! A BC8+6=+ 实验组与对照组相比，
3、 在凋 亡细胞比例方面无显著性差异 （! 6=+ 能够几乎完全阻断 “#$%! A AD8E9+8 部分阻断 “#$% J85 +8(*95 ?* J*5 ?8( 65 +?5 E J*5 =8+5 *885 ? J*5 E*5 8 *+5 +?85 9 J5 *+5 66+5 89 J85 6995 98*） 8+5 +?+5 J85 96+5 E65 99 J85 *8）95 *） K/#H： *）L/:IMGHN O0#P + ! :; G/3I，! 4 +5 +6；8）L/:IMGHN O0#P *+5 + ! :; G/3I，! 4+5 +6Q 表 %$ ()*+, 处理不同时间诱导
4、 !“- 细胞凋亡 细胞百分 率 （.） ， ! /“， # 0 ()*+, 1( 5 6? J*5 68( ?*5 =? J*5 6+5 6?995 8* J85 ?95 +*） ?+5 6+ J85 ?+5 ?=965 *9 J85 +?95 *8*） *8?*5 9 J*5 =+5 ?+95 66 J*5 E995 9*） 896E5 8 J85 88+5 66*5 ? J*5 8）95 *） K/#H： *）L/:IMGHN O0#P + P G/3I，! 4 +5 +6；8）L/:IMGHN O0#P P G/3I，! 4+5 +6Q 表 , B7(2 7;27)7(5?6 58 6
5、7,;1:7;, 5:39=:3 5; (23 (23 1454(5676 58 !“- 93:6 7; ?36(7=1:(7;, B72 ()*+, 43?93;(1,3 58 93:6 （.） ， ! / “，# 0） R“BS （,） BC8+6=+ （!:/;! A） AD8E9+8 （!:/;! A） F* GH0/23(?85 9E J*5 8(E5 8 J85 ?9( 85 +,R“BS(85 +(?85 6 J85 ?8+5 +*=5 6? J85 96( *+5 + ! :; “#$%! A BC*+5 +(8+(6=5 E9 J85 8+5 8E5 6? J85 +8）*5
6、 86 =+5 + !:/;! A BC*+5 +(=+(?85 6 J85 96+5 +*5 8 J85 995 ?*） *+5 + !:/;! A AD*+5 +(*+?85 9+ J85 ?=+5 +*5 89 J*5 =98）*5 EE*） 6+5 + !:/;! A AD*+5 +(6+665 *E J*5 E6+5 ?6+5 =? J85 +68）+5 + K/#H： *）L/:IMGHN O0#P *+5 + ! :; “#$% G/3I，! 4+5 +6Q 6+8梅传忠等- I= 及 .UV 在结核杆菌抗原再刺激诱导人 “#7 细胞凋亡信号转导中的作用- 第 期 图 !“ 信号
7、分子阻断剂预处理对 #$%9/ 26 $8/ $8/ 5323$21+1 2. !“) 0/991 +6“ 讨论 由于 !“! 细胞在人外周血中比例甚低， 仅占外 周血 ! 细胞的 “#左右， 分离纯化较难， 为了进一步 研究 !“! 细胞活化及凋亡机制， 探讨其生物学功 能， 就需要获取足量 !“! 细胞。本文参照文献 “ ， 采用外周血单个核细胞经过 $%? ;?A:B :B22 B=%C，(6DE） ， 即 F=G0 F=G7 相互作用触发的凋亡 5。(6DE 对 ! 细胞向不同方 向分化以及调节 ! 细胞免疫应答起重要作用， 在 (6DE 过程中， 激活 ! 细胞合成的 F=G7 与带
8、有 F=G 的靶细胞作用， 再通过依次激活 F=G 相关死亡分子 （F=G =GG:;=%B B=%C 1=;?，F(EE） 、 :=GH=GB 5 及 其他 下 游 :=GH=GB （ 包 括 :=GH=GB -、 :=GH=GB 4 和 :=GH=GB “ 等） ， 最终可使细胞发生凋亡； 大部分增殖 的外周血 ! 细胞都以凋亡的方式被清除 I。以上 的研究结果都是基于对 !“! 细胞的研究而提出来 的， 作为一种特殊的 ! 细胞亚群的 !“! 细胞对抗原 的反应会如何？我们的研究结果证实， 在 $%)B? =:%; %B;? K;?=GB， $(LM） 途径是淋巴细胞中的主要信号转 导途
9、径之一， 参与细胞的发育、 增殖、 活化和促进 67- 基因转录等多种作用 +。$(LM 为丝0 苏氨酸激酶， 分为 N8M、 H45 和 O(P 等亚家族成员。QR-.45“. 是 H45 途径的特异性抑制剂 +-， 本实验先用 QR-.45“. 处理 !“! 细胞， 然后再用 $%,; /?0( % ( A-， !)!； )D （)） ： !$D% $ 细胞凋亡发生机制 涉及 N#O 途径。至于 KL9,= 再刺激诱导 “#; 细胞 凋亡发生机制是否涉及 K,58 途径中的 H78 和 (, 等亚家族成员， 以及 N#O 途径在 KL9,= 再刺激 诱导 “#; 细胞凋亡发生机制中的地位与
10、具体作用， 还有待于进一步研究阐明。 5B#8 是 ; 细胞内重要的信号转导分子， 其在 ;A7 AS# 活化信号、 BU9! BU9!7 信号、 8 细胞活化 信号的转导中均起一定的作用， 另外亦证实 5B#8 在 AS!O 介导的 “#; 细胞活化信号的转导中起着十分 重要的作用 #， *。5B#8 由一个催化亚基 （5)） 和 一个调节亚基 （5O“） 构成。5) 与蛋白激酶同源， 可催化肌醇环上 # 位羟基生成 #， * 二磷酸磷脂酰肌 醇 （5B9#， *95!） 和#， *， “ 三磷酸磷脂酰肌醇 （5B9#， *， “95#） ， 它们均可作为第二信使在 “#; 细胞活化中 传递
11、信号 “。UZ!D*)! 是 5B#8 的特异性抑制剂， 它通过竞争性拮抗 ,;5 与 5) 的结合使 5B#8 失去 活性而阻断 5B#8 活化途径 +。为了探讨 KL9,= 诱 导 “#; 细胞凋亡是否与 5B#8 有关， 我们用 UZ!D*)! 处理 “#; 细胞， 然后再给予 KL9,= 刺激， 结果发现 ) ) $J- U UZ!D*)! 部分阻断 KL9,= 再刺激诱导 “#; 细胞的凋亡 （凋亡抑制率为 *# _） 。因此我们 推测 KL9,= 再刺激诱导 “#; 细胞凋亡发生机制涉 及 5B#8。但有关 5B#8 在 KL9,= 再刺激诱导 “#; 细胞凋亡信号转导中的具体作用
12、， 还有待于进一步 研究阐明。 !“ 参考文献 G.-/( % B1R.G B61， DD*； +! （!） ： “9“O% !9G.- /6L/./ .2 LE a0/ 012 =301WE. 4 L6 JR ;a90-N?0( % ( U.6MJG 4 RJ3 G0/N0/.9O aUBAH ?. ?. a0/9J 4 JR ?. a0/ a0/ -?V0E ? JR KEGJL0G.3?. -J/ JR =2; G.-/ V30G.-6-03 /.2 MJ=.190G.2 N3J.?V0E 2./ AS* C.3/6/ ASO -.1 ?. ?E6/( % ( B61J-， DDD； +
13、# （!） ： $“9$!% ! 8，A062.- H T，: JR K88! H78 L6 1J N#O M?V0E( % ( B61J-， !)； +* （!） ： +!*9+!“% #& H2.02 A H，50.- Z B，FJ3 N3J9 .J39%4 LE AS!O /? N?J/N?0J- #9M-.E U A% 5?J/N?J ?. /?. 00-03=. JR 30N0EG?. N?J/9 N?JJ3/，VJ30111 012 UZ!D*)!( % HK4c (， DD+； “： “!“+9“!+$% 收稿 !)“9)$9!D& 修回 !)“99! （编辑& 许四平） !王育文等& BU9# 及其变异体真核表达载体的构建表达与亚细胞定位& 第 # 期