乙型肝炎病毒基因型分布及临床意义.pdf

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1、中华肝脏病杂志2 0 0 5 年1 月第1 3 卷第1 期C h i n J H e p a t o l , J a n u a r y 2 0 0 5 , V o l 1 3 , N o . I 甘油三醋、载脂蛋白A 1 、载脂蛋白B 、低密度脂蛋白、H C V R N A , B M I , F A T 和WH R 为自 变 量进行多 元线 性逐步回 归 分 析， 结果B MI 人选， A L T 与B MI 正相关 行=0 . 4 1 0 , P 9 4 c m，女性8 0 c m) ， 升高的瘦素水平与 B MI 、血清胆固醇、低密度脂蛋白、甘油三醋水平相关， 提示 瘦素与脂代谢和肝脏

2、的脂肪变性关系密切。 S c h e t t l e r 等 用肝素 诱导的体外低密度脂蛋白沉淀法 ( 一种能有效地去除含载脂蛋 白B 的脂蛋白的血脂净化系统) 对经抗病毒治疗后无应答的慢 性H C V感染者进行试验性治疗， 结果证实H C V R N A水平下 降， 提示H C V与载脂蛋白B 之间存在某种联系， HC V感染可 以影响到机体的脂肪代谢。 本研究也发现， 慢性H C V 感染者升 高的血清瘦素水平与机体的F A T 和载脂蛋白B 均有相关性， 而 且大部分 ( 7 1 . 4 3 % ) 慢性H C V感染者腹围增加。这些结果进 一步提示慢性H C V感染与脂代谢有密切联系。

3、 J漫 性丙型肝炎患者的血清瘦素水平升高与肝功能损害程度 无相关性， 这与Wi d j a j a 等5 l的报道一致。 但是， 我们的结果同 时发现， 慢性HC V感染者的A L T与载脂蛋白B和B MI 有相关 性; 对A L T 进行多元回归分析显示， A L T 与B M I 密切相关。 这 与H i c k m a n 等6 对慢性丙型肝炎肝脏组织学发生1 级以上脂肪变 性的患者进行控制饮食疗法后，A L T随着体重下降而好转的研 究结果相符。 提示脂代谢在一定程度上影响了A L T的水平。 本研究中HC V相关肝硬化和肝癌组的瘦素水平与正常对 照组差异无统计学意义， 且H C V

4、相关肝硬化患者的瘦素水平性 别间差异无统计学意义。这可能与肝硬化、特别是男性肝硬化 患者性激素代谢异常， 雌激素水平增加， 翠酮水平降低， 影响 瘦素分泌以及肝硬化患者营养不良 等因素有关。 参考文献 1 C h i n e s e S o c i e t y o f I n f e c t i o u s D i s e a s e s a n d P a r a s i t o l o g y a n d C h i n e s e S o c i e t y o f H e p a t o l o g y o f C h i n e s e Me d i c a l A s s o c

5、i a t i o n . T h e p r o g a mm e o f p r e v e n t i o n a n d c u r e f o r v i r a l h e p a t i t i s . Z h o n g h u a G a n z a n g b i n g Z a z h i , 2 0 0 0 , 8 : 3 2 4 - 3 2 9 中华医学会传染病与寄生虫病学分会、肝病学分会. 病毒性 肝炎防治方案.中华肝脏病杂志，2 0 0 0 , 8 : 3 2 4 - 3 2 9 . 2 R o m e r o - G o m e z M, C a s t e l

6、 l a n o - Me g i a s V M, G r a n d e L , e t a l . S e r u m l e p t i n l e v e l s c o r r e l a t e w i t h h e p a t i c s t e a t o s i s i n c h r o n i c h e p a t i t i s C . A m J G a s t r o e n t e r o l , 2 0 0 3 , 9 8 : 1 1 3 5 - 1 1 4 1 . 3 G i a n n i n i E , B o t t a F , C a t a l

7、 d i A , e t a l . L e p t i n l e v e l s i n n o n a l c o h o l i c s t e a t o h e p a t i t i s a n d c h r o n i c h e p a t i t i s C . H e p a t o g a s t r o e n t e r o l o g y , 1 9 9 9 , 4 6 : 2 4 2 2 - 2 4 2 5 . 4 S c h e t t l e r V , Mo n a z a h i a n M, Wi e l a n d E , e t a l . R

8、e d u c t i o n o f h e p a t i t i s C v i r u s l o a d b y H .E .L .P . - L D L a p h e r e s i s . E u r J C l i n I n v e s t , 2 0 0 1 , 3 1 : 1 5 4 - 1 5 5 . 5 Wi d j a j a A , W e d e m e y e r H , T i l l m a n n H L , e t a l . H e p a t i t i s C a n d t h e l e p t i n s y s t e m : b o

9、u n d l e p t i n l e v e l s a r e e l e v a t e d i n p a t i e n t s w i t h h e p a - t i t i s C a n d d e c r e a s e d u r i n g a n t i v i r a l t h e r a p y . S c a n d J G a s t r o e n t e r o l , 2 0 0 1 , 3 6 : 4 2 6 - 4 3 1 6 H i c k m a n I J , C l o u s t o n A D , Ma c d o n a l d

10、 G A , e t a l . E f f e c t o f w e i g h t r e d u c t i o n o n l i v e r h i s t o l o g y a n d b i o c h e m i s t ry i n p a t i e n t s w i t h c h r o n i c h e p a t i t i s C . G u t , 2 0 0 2 , 5 1 : 8 9 - 9 4 . ( 收稿日 期: 2 0 0 4 - 0 1 - 0 4 ) ( 本文编辑:谢娜) 乙型肝炎病毒基因型分布及临床意义 董梅张跃新 【 关链词】肝炎病毒，

11、乙型; 基因型; 聚合酶链反应; 核酸杂 交; 酶联免疫吸附测定 D i s t r i b u t i o n o f h e p a t i t i s B v i r u s g e n o t y p e s a n d i t s c l i n i c a l s i g - n i f i c a n c e DO NG Me i , Z H A N G Y u e - x i n K e y w o r d s H e p a t i t i s B v i r u s ; G e n o t y p e ; P o l y m e r a s e c h a i n r e

12、a c t i o n ; N u c l e i c a c i d h y b r i d i z a t i o n ; E n z y m e - l i n k e d i m m u n o s o r b e n t a s s a y F i r s t a u t h o r s a d d r e s s D e p a r t m e n t o f I n f e c t i o u s D i s e a s e s , t h e H o s p i t a l o f P o l i c e s A r m y U n i t o f X i n j i a n

13、g , W u l u m u q i 8 3 0 0 9 1 , C h i n a E - m a i l : m r s m e i d o n g d o n g s h o u . c o m 作者单位: 8 3 0 0 9 1 乌鲁木齐，武警新疆总队医院感染科 ( 董 梅) ;新疆医科大学附属第一医院肝病中心 ( 张跃新) 董梅， E - m a i l : m r s m e i d o n g d o n g s h o u . c o m 乙型肝炎病毒 ( H B V)基因型呈一定的地理区域性分布， 但是由于分析的标本有限，其结果并不完全一致。各地区优势 基因型不同， 故预后

14、也不相同I 。 因此， 本研究应用聚合酶链反 应 ( P C R ) 微板核酸杂交一 酶联免疫吸附 ( E L I S A ) 技术2 1 ， 调 查了新疆地区H B V基因型的分布及其临床意义。 一、资料与方法 1 .病例资料: ( 1 ) 病例来源:1 0 0 例H B V D N A阳性乙型 肝炎患者均为新疆医科大学附属第一医院2 0 0 2 年1 1 月至2 0 0 3 年3 月的门诊和住院患者。 ( 2 ) 一般情况: 男6 7 例， 8 . 5 6 岁， 女 3 3 例， 6 一 4 8 岁。 汉族8 0 例， 少数民族2 0 例 ( 维吾尔族1 3 例， 回族5 例， 哈萨克族2

15、 例) o ( 3 ) rib 床分型: 无症状乙型肝炎表面抗 中 华肝脏病杂志2 0 0 5 年1 月第1 3 卷第1 期C h i n J H e p a t o l , J a n u a r y 2 0 0 5 , V o l 1 3 , N o . 1 原携带者 ( A S C ) 3 0 例， 慢性乙型肝炎 ( C H B ) 患者7 0 例。 患 者均排除甲、丙、丁、戊型肝炎病毒感染及其它能导致肝脏病 变的疾病。 诊断均符合2 0 0 0 年修订的病毒性肝炎防治方案3 1 。 采 集H B V D N A阳性患者的外周血， 分离血清0 . 5 m l 存于一 3 0 1C 备用。

16、 2 . 方法: ( 1 ) 血清病毒学标记物检测:乙型肝炎表面抗原， 乙型肝炎e 抗原 ( H B e A g ) ， 抗一 H B e ， 抗一 H B c ， 抗一 H A V , 抗一 H C V ， 抗一 H E V , H D A g ， 抗一 H D 检测应用E L I S A 法， 按 试剂盒 ( 中山医科大学达安基因 诊断中心提供) 说明进行操作。 ( 2 ) 血清H B V D N A检测: 应用荧光定量P C R， 按试剂盒说明 进行操作。 ( 3 ) P C R产物测序鉴定:由上海博亚生物技术有限公 司完成。 ( 4 ) 试剂和仪器: H B V基因分型P C R微板核

17、酸杂交一 E L I S A试剂盒由南方医科大学基础部生物医学研究中 心提供。 5 5 0 型酶标仪及基因 扩增仪均为美国B i o - R a d 公司产品。 ( 5 ) 统计 学方法: 用二 2 检验和秩和检验，以a=0 . 0 5 为检验水准。 二、结果 1 . H B V 基因型检测结果: 1 0 0 例标本中 有8 2 例标本分型， 1 8 例标本未能分型， 检出 率8 2 % , B 型1 1 例( A S C 组8 例， C H B 组3 例， 其中少数民族有5 例) 、 C 型3 8 例 ( A S C 组6 例， C H B 组3 2 例， 其中 少数民族有5 例) 、 D

18、型1 4 例 ( A S C 组1 例， C H B 组1 3 例， 其中 少数民族有3 例) ， 混合型1 9 例 ( B , C 型8 例， C , D型4 例， B , D型6 例， D , F 型1 例， 少数民族有3 例) 。 未发现A , E 型。 2 . A S C 和C H B 两组病例在年龄、 性别、 e 系统及民 族中 的分布差异无统计学意义， 在B , C 型及在B , D型分布中差 异有统计学意义， 在C , D 型分布中差异无统计学意义。 C H B 组中， C 型构成比高于B 型( 9 1 . 4 3 % 与8 . 5 7 % ) , D 型构成比高 于B 型 (

19、8 1 . 2 5 %与1 8 . 7 5 % ) , A S C 组中， B 型构成比 高于C 型 ( 5 7 . 1 4 % 与4 2 . 8 6 % ) . B 型构成比高于D 型( 8 8 . 8 9 %与1 1 . 1 1 % ) , 3 . 不同 基因型在民族、 年龄、 性别、 e 系统中的分布差异 无统计学意义。 4 . 不同基数水平的H B V D N A拷贝数在B , C , D 型的分 布中差异无统计学意义。 5 . P C R扩增产物基因测序验证基因分型结果: 标本1 - 4 所测得核昔酸同源性分别为: 9 9 . 7 6 % , 9 9 . 6 7 % , 9 9 .

20、1 1 % , 9 6. 2 5 %0 三、讨论 本研究应用一种准确、 快速、 简便的新方法一 P C R核酸微 板杂交一 E L I S A， 调查了来自 新疆各地及乌鲁木齐地区的8 2 例 H B V感染者基因型分布，并随机抽取4 例已分型的H B V感染 者的P C R 扩增产物基因测序， 验证了分型结果。 发现8 2 例测得 基因型结果中以C型( 3 8 例，占4 6 . 3 4 % ) 为主， 其次为D型( 1 4 例，占1 7 . 0 7 % ) , B型 ( 1 1 例，占1 3 . 4 1 % ) ， 这与O r i t o 等a 报 道的东亚某些地区基因型分布一致， 且与阎丽

21、等s 报道的D 型一 般见于西藏、 新疆、 宁夏少数民 族地区 一致。 并发现1 例D , F 混合型， F 型在我国非常少见，主要分布在美国等地区，大陆 偶见报道。 A , E 型未发现。 本实验不同基因型在不同民族的分 布差异无统计学意义， 优势基因型以C型为主。进一步说明 H B V 基因 型呈一定的 地理区 域性分布。 虽然近年来有少数研究探讨了H B V 基因型对肝脏疾病和病 毒复制的影响， 但由于样本数少和方法不同，并没有得出一致 的结论。本实验中， 进一步对不同基因型的临床特征进行了比 较和分析， 得出A S C 和C H B 两组在不同基因型的分布差异有 统计学意义， C H

22、B 组中C 型构成比高于B 型， D 型构成比 高于 B 型， 在A S C 组中， B型构成比高于C型、 D型， 进一步证实 在排除其它影响因素下，C型、D型和B型相比易引起较重肝 脏损伤。 T h a k u r 等 “ 报道在印 度地区， 以A , D 型乙型肝炎为 主， D型与严重肝病、年轻人肝癌有关， 从而验证不同基因型 有致病性差异的结论。至于C 型和D型之间的致病性差异需进 一步研究。 分析比较了B 型和C 型、 D 型在不同疾病状态下的临 床资料， 测得的基因型、 H B e A g 阳 性率和抗一 H B e 阳 性率分布 差异无统计学意义， 与O r i t o 等 得出结

23、论不同。 本实验中， H B V D N A不同复制水平在B , C , D 型中的分布差异无统计学意义， 但P 值接近0 . 0 5 。 可能因样本数量较少故未得出文献【 7 报道的 C 型血清H B V D N A复制水平明显高于B 型的 结论。 参考文献 1 C h a n H L , T s a n g S W, L i e w C T , e t a l . V i r a l g e n o t y p e a n d h e p a t i t i s B v i r u s D N A l e v e l s a r e c o r r e l a t e d w i t h

24、h i s t o l o g i c a l l i v e r d a m a g e i n H B e Ag - n e g a t i v e c h r o n i c h e p a t i t i s B v i r u s i n f e c t i o n . A m J G a s t r o e n t e r o l , 2 0 0 2 , 9 7 : 4 0 6 - 4 1 2 . 2 Wa n g H , Wa n C S , Wa n g S L , e t a l . S t u d y o n g e n o t y p e s o f H B V D N

25、A u s i n g P C R m i c r o p l a t e h y b r i d i z a t i o n E L I S A. Z h o n g h u a We i s h e n g w u x u e H e Mi a n y i x u e Z a z h i , 2 0 0 1 , 2 1 : 2 3 4 - 2 3 6 . 王虹，万成松，王省良 ，等.采用P C R微板核酸杂交一 E L I S A 技术进行H B V D N A基因 分型的 研究. 中 华微生物学和免疫学 杂志，2 0 0 1 , 2 1 : 2 3 4 - 2 3 6 . 3 C h i

26、 n e s e S o c i e ty o f I n f e c t i o u s D i s e a s e s a n d P a r a s i t o l o g y a n d C h i n e s e S o c i e t y o f H e p a t o l o g y o f C h i n e s e Me d i c a l A s s o c i a t i o n . T h e p r o g a m m e o f p r e v e n t i o n a n d c u r e f o r v i r a l h e p a t i t i s .

27、 Z h o n g h u a G a n z a n g b i n g Z a z h i , 2 0 0 0 , 8 : 3 2 4 - 3 2 9 . 中华医学会传染病与寄生虫病学分会、肝病学分会. 病毒性肝 炎防 治方案.中 华肝脏病杂志，2 0 0 0 , 8 : 3 2 4 - 3 2 9 . 4 O r i t o E , I c h i d a T , S a k u g a w a H , e t a l . G e o g r a p h i c d i s t r i b u t i o n o f h e p a t i t i s B v i r u s ( H

28、B V ) g e n o t y p e i n p a t i e n t s w i t h c h r o n i c H B V i n f e c t i o n i n J a p a n . H e p a t o l o g y , 2 0 0 1 , 3 4 : 5 9 0 - 5 9 4 . 5 Y a n L , H o u J L , Wa n g Z H , e t a l . T h e d i s t r i b u t i o n o f h e p a t i t i s B v i rus g e n o t y p e s i n N i n g x i

29、 a a r e a o f C h i n a . J i e f a n g j u n Y i x u e Z a z h i , 2 0 0 0 , 2 5 : 4 - 7 . 阎丽，侯金林，王战会，等.宁夏地区乙型肝炎病毒基因分布 及D基因型的测序鉴定.解放军医学杂志，2 0 0 0 , 2 5 : 4 - 7 . 6 T h a k u r V , G u p t a n R C , K a z i m S N , e t a l . P r o f i l e , s p e c t ru m a n d s i g - n i f i c a n c e o f H B V g

30、 e n o t y p e s i n c h r o n i c l i v e r d i s e a s e p a t i e n t s i n t h e I n d i a n s u b c o n t i n e n t . J G a s t r o e n t e r o l H e p a t o l , 2 0 0 2 , 1 7 : 1 6 5 - 1 7 0 . 7 O r i t o E , Mi z o k a m i M, S a k u g a w a H , e t a l . A c a s e - c o u n t r o l s t u d y

31、 f o r c l i n i c a l a n d m o l e c u l a r b i o l o g i c a l d i f f e r e n c e s b e t w e e n h e p a t i t i s B v i rus e s o f g e n o t y p e s B a n d C . J a p a n H B V G e n e o t y p e R e s e a r c h G r o u p . H e p a t o l o g y , 2 0 0 1 , 3 3 : 2 1 8 - 2 2 3 . ( 收稿日 期: 2 0 0 3 - 1 1 - 2 0 ) ( 本文编辑: 谢娜)