强力霉素对制动兔骨关节炎模型对侧膝关节早期退变的影响.pdf

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1、2 0 0 9 年4 月 第3 l 卷第2 期 农垦医学 J o u r n a lo fN o n g k e nM e d i c i n e A p r 2 0 0 9 V 0 1 3 lN o 2 论著 强力霉素对制动兔骨关节炎模型对侧膝关节 早期退变的影响 田世坤1张尚普1王维山2董金波2王永明2史晨辉2 + ( 1 石河子大学医学院2 0 0 6 级外科学硕士研究生； 2 石河子大学医学院第一附属医院骨一科，新疆石河子，8 3 2 0 0 8 ) 【摘要】目的：研究1 2 1 服强力霉素对制动兔骨关节炎模型对侧膝关节早期退变的影响及作用机制。方法：3 6 只 新西兰大白兔随机分为空

2、白对照组模型对照4 、8 、1 2 周组给药8 、1 2 周组。模型组与给药组均给予石膏固定左下 肢。石膏同定4 周后给药组给予强力霉素。分别在8 周、1 2 周处死动物，观察指标包括：软骨大体形态、软骨I n a n k i n 评分、软骨型胶原、u P A 、M M P 一1 3 。结果：与模型对照组比较，给药组软骨面光滑，m a n k i n 评分较低，型胶 原含量较高u P A 、M M P 一1 3 活性较低( P 0 0 1 ) 。结论：强力霉素对制动兔骨关节炎模型对侧膝关节软骨早期退 变有缓解作用，作用机制与抑制M M P 一1 3 、u P A 的表达有关。 I 关键词】骨关

3、节炎：强力霉素；I I 型胶原；u P A ；M M P 1 3 中圈分类号：R 一3 3 2 R 6 8 4 3 文献标识码：A T h ee f f e c to fD o x y c y c l i n eo nt h ee a r l yd e g e n e r a t i o no fo p p o s i t ek n e eo f t h eI m m o b i l i z i e dr a b b i tm o d e lo s t e o a r t h r i t i s T i a ns h i k u n ，Z h a n gs h a n g p u ，W a n

4、 gw e i s h a n 。D o n gj i n b o ，W a n gy o n g m i n g ，S h ic h e n h u i ( 1 P o s t g r a d u a t eR e s e a r c hl n s t i t n t e ，S h i h e z iu n i v e r s i t yS c h o o lo fm e d i c i n e ； 2 D e p a r t m e n to fO r t h o p a e d i c ss u r g e r y 。f i r s ta f f i l i a t e dh o s p

5、 i t a lo fS h i h e z iu n i v e r s i t y s c h o o lo fm e d i c i n e X i n j i n gS h i h e z i ，8 3 2 0 0 0 ) 【A b s t r a c t 】O b j e c t i v e ：s t u d yO nT h ee f f e c ta n da c t i o nm e c h a n i s m o fD o x y c y c l i n eo nt h ee a r l yd e g e n e r a t i o no fo p p o s i t e k

6、n e e0 ft h eb r a k i n gr a b b i tm o d e lo s t e o a r t h r i t i s M e t h o d s ：T o t a l l y3 6N e wZ e a l a n dr a b b i t sW e I t ea s s i g n e di n t o6g r o u p s ：b l a n k c o n t r o lg r o u p M o d e l4w e e kg r o u p 。M o d e l8w e e kg r o u p ，M o d e l1 2w e e kg r o u p ，

7、d m i n i s t r a t i o n8w e e kg r o u p ，a d m i n i s t r a t i o n 1 2w e e kg r o u p B o t hM o d e lg r o u pa n da d m i n i s t r a t i o ng r o u p 玳I ts i v al e f tl o w e re x t r e m i t yf i x e db yg y p s u m A f t e r4 w e e k a d - m i n i s t r a t i o ng r o u pw e r eg i v e n

8、D o e x y c y c l i n S i xa n i m a l sw e r es a c r i f i c e di n8a n d1 2w e e k sa f t e rf i x a t i o n T h eo b s e r v e di n d e X e si n c l u d et h ed e g e n e r a t i o no fa r t i c u l a r 叫t i h g e M a n k i nS C O I t 屯，t h ee x p r e s s i o no fC o l l a g e nT y p eI I ，t h e

9、e x p r e s s i o no fC o l h - g e n 。u P A M M P 一1 3 R e s u l t s ：c o m p a r ew i t ht h em o d e lg r o u p 。t h ec a r t i l a g eo fa d m i n i s t r a t i o ng r o u pi ss m o o t h 。M a n k i nS C O r e L o w h i g l lc o n t e n t C o l l a g e n T y p e 。l o wa c t i v i t i e so fu P A

10、 、M M P s 一1 3 ( P O 0 1 ) C o n d u s i o a ：M i t i g a t i v e E f f e c to f D o x y e y c l i n eo nt h ee a r l yd e 铲州玎砒i 咖o fo p p o s i t ek n e eo ft h el m m o b i l i z i e dr a b b i tm o d e lo s t e o a r t h r i f i s T h ea c t i o nm e c h a n i s mW a g p o s i t i v e l yr e l a

11、t e dw i t ht h ee x p r e s s i o no fu P Aa n dM M P s 一1 3 【K e yw o r d s 】o s t e o a r t h r i t i s ：D o x y c y c l i n e ；C o l l a g e nT y p e l l ；u P A ；M M P s 1 3 骨性关节炎( O s t e o a r t h f i t i s 。O A ) 是一种发病率 随年龄明显增加的退行性关节病变。其最基本的病 理变化是由于力学和生物学因素引发关节软骨组织 合成与降解之间的正常关系失衡。关节软骨的损伤 是骨关节

12、炎的首要表现和病理基础，探索保护软骨 细胞和促进受损软骨细胞恢复的措施一直是治疗 O A 的重大课题。近年来，强力霉素( d o x y c y c l i n e ) 的非抗生素作用在O A 治疗中的意义。逐渐得到人 卑通讯作者：史晨辉，男，教授，硕士生导师，从事关节外科学研究。 9 7 万方数据 第2 期农垦医学第3 l 卷 们重视，为骨关节炎的治疗提供了新的思路。在 石膏制动骨关节炎模型中，x , - l 倾q 关节由于压力负荷 的增加也可导致软骨的退变旧J ，强力霉素是否能抑 制这种改变，本文采用兔制动骨关节炎实验模型，检 测给于口服强力霉素后对软骨的影响，并研究这种 影响的作用机制。

13、 1 材料与方法 1 1 动物模型的建立健康成年新西兰大白兔3 6 只，雌雄各半，体重2 5 3 5 公斤( 动物合格证号： 1 6 0 0 3 ) 。随机取出6 只大白兔作空白对照组，余 下动物左后肢膝关节伸直位石膏管型固定，石膏管 型长度为上端接近髋关节，下端至足趾，踝关节背 伸约6 0 0 。4 周后即可得稳定骨关节炎模型。 1 2 主要试剂强力霉素( 盐酸多西环素) 购于常 州制药有限公司，U p a 抗体购于武汉博士德生物工程 有限公司，M M P s 一1 3 购于德国c a l b i o c h e m 公司、二型 胶原抗体购于c h e m i c o n 公司，s P 试剂

14、盒购于北京博 奥森生物技术有限公司，其他试剂为国产分析纯。 1 3 动物分组及处理3 0 只新西兰大白兔石膏固 定4 周后，随机取出6 只新西兰大白兔处死证实造 模成功后，余下动物随即分为4 组：8 周模型对照 组：8 周后处死；8 周给药组：给于灌胃强力霉素直至 8 周，每次2 5 r a g ，2 次日；1 2 周模型对照组：1 2 周后 处死；1 2 周给药组：给于灌胃强力霉素直至1 2 周， 每次2 5 r a g ，2 次日。 1 4 软骨组织取材取材前先暴露股骨内侧髁软 骨行大体观察；再冠状位切取股骨内髁软骨退行性 变区带全层软骨的标本，深达软骨下骨，作相关大体 评分，置于1 0

15、中性甲醛溶液中固定，1 0 E D T A 脱钙后，制成5 l z m 厚切片，留作H E 染色、甲苯氨蓝 染色及免疫组织化学检查。 1 5 O A 的病理学评分软骨退变的严重程度用 M a n k i n 旧1 评分进行评估。M a n k i n 评分系统包括4 项内容：甲苯氨蓝染色的缺失，细胞变化，软骨组织 结构改变及潮线完整性。评分越高，表明软骨退变 越严重。以这些病变的评分总和作为膝关节软骨退 变的指标。 1 6 软骨中型胶原、u P A 、M M P s 一1 3 的免疫组化 s P 法检测 按照试剂盒的使用说明进行操作，每例 切片在1 0 4 0 光镜下随机选择5 个视野，记数视

16、 野中细胞阳性表达率，结果以X s 。 1 7 统计学处理采用S P S S 软件进行统计分析， 两组间均数比较采用t 检验，模型组之间采用方差 分析。 2结果 2 1大体观察对照组无明显关节积液和滑膜增 生，关节面光滑色泽如常。模型组有明显关节积液 和滑膜增生等滑膜炎表现；软骨退行性变主要集中 于股骨内侧髁，色泽灰暗、苍白，少数有溃疡形成。 治疗组关节积液及滑膜增生等滑膜炎表现较轻，软 骨面粗糙，色泽稍暗，少数出现糜烂。 2 2 光镜观察对照组关节面软骨染色均匀，结构 正常，无裂隙，细胞排列整齐。模型组软骨面染色不 均，裂隙多，细胞数减少，排列紊乱。治疗组软骨表 面较规则，染色基本均匀，裂隙

17、几乎没有，可见较多 的增生细胞。 2 3M a n k i n 评分随着固定时间的延长( 4 周、8 周、1 2 周) ，制动关节对侧关节软骨m a n k i n s 的评 分也逐渐增加，表明骨关节软骨退变越来越严重。8 周给药组评分低于8 周模型组，差异有统计学意义 ( P 0 0 5 ) ，1 2 周给药组低于1 2 周模型组，差异有 统计学意义。P 0 0 5 ，见表l 。 表I兔膝关节软骨m a n k i n s 评分结果lx s ) 注：a 与模型g t 2 ：f a l 比较b 与给药组8 周组比较。t = 5 1 2 P 0 0 5 ；另外模型组f H J 比较F = 8 2

18、 3 9 P O 0 5 。 2 4 强力霉素对骨关节炎模型对侧膝关节u P A 、 M M P 1 3 、型胶原的影响空白组、4 周、8 周、1 2 周模型组中u P A 、M M P 一1 3 的表达逐渐增加，型 胶原的表达逐渐降低，且两两比较差异有统计学意 9 8 义( P 0 0 5 ) ，与8 周模型组比较，给药组中u P A 、 M M P 一1 3 的表达降低，差异有统计学意义( P 0 0 5 ) ，型胶原的表达增加，差异有统计学意义( P 0 0 5 ) 。1 2 周给药组中u P A 、M M P 一1 3 的表达明显 万方数据 2 0 0 9 年4 月 第3 l 卷第2

19、期 农垦医学 J o u r n a lo fN o n g k e nM e d i c i n e A p r 2 0 0 9 V 0 1 3 1N o 2 低于8 周给药组，差异有统计学意义，P 0 0 5 ，I I 型表2 4 。 胶原的表达增加，差异有统计学意义，P 0 0 5 ，见 裹2 兔膝关节软骨u P A 检测结果( i 8 ) 模型组阈比较F = 2 9 0 9 8 ，P 0 0 5 。 表4 兔膝关节软骨二型胶原检测结果Ii s ) 模型组间比较F = 1 4 4 2 0 ，P 0 0 5 。 3 讨论 兔膝关节伸直位制动O A 模型能较好地模拟人 O A 的发病过程，与

20、药物注射和手术类O A 模型比 较，可避免人为损伤，更接近自然过程。其原因町能 是制动后关节囊和肌肉挛缩使关节负重面承载加 大，内部磨损加剧，造成软骨破坏。本实验显示，此 模型的软骨病理改变类似于临床且较为稳定。 尽管O A 的病因十分复杂，发病机制未明，目前 普遍认为，多种M M P s 对关节软骨细胞外基质( E C M ) 有降解作用，使关节软骨肿胀，抗外力作用下降，最终 导致关节软骨进行性破坏。对E C M 研究表明。关节 软骨细胞外基质主要成分为型胶原其次为蛋白聚 糖。其中M M P l 和1 3 等可使型胶原变性裂解H j ， 造成关节软细胞外基质合成与降解失衡，从而导致 O A

21、的发生。本实验显示，M M P 一1 3 在正常对照组中 无表达，在模型组中表达较高，在给予强力霉素干预 后，细胞阳性表达下降，表明M M P 一1 3 在软骨退变中 的促进作用，而强力霉素作为抑制基质金属蛋白酶达 到其预想的结果，通过本研究结果证实强力霉素还可 预防软骨退变的发生，因此对其的进一步研究，将有 助于骨性关节炎防治。 u P A 介导的E C M 蛋白裂解作用与骨关节炎的关 节软骨和骨的破坏密切相关”6J 。W a l t e r 【7o 发现u P A 在骨性关节炎关节软骨破坏严重的表浅层强烈表达， 并且u P A 的水平与关节软骨破坏的严莺程度密切相 关，说明u P A 系统

22、在骨性关节炎基质降解中的莺要 作用。本研究结果显示，模型组u P A 随着病程的延 长，其表达逐渐增高，与对照组比较差异有统计学意 义，进一步表明u P A 在骨性关节炎发生发展中的作 用，但是其具体机制有待于更深入的研究。同时本研 究显示，在强力霉素的干预下，u P A 的表达迅速降低， 与模型组差异明显，我们推测u P A 在激活M M P s 后， 后者的生理活性被放大其促进u P A 的大量产生；而 当M M P s 被抑制时，u P A 的表达可能受到影响，但是 其具体机制有待于进一步探讨。 通过本研究发现，强力霉素对早期骨关节炎具有 抑制作用，对关节起到了比较好的保护作用，深入研

23、究强力霉素与u P A 和M M P s 的关系，将有助于临床对 骨关节炎加深认识，并研究防治措施。 参考文献： 1 P e l l e t i e rJP M a r t e l P e l l e t i e rJ D M O A Dd e v e l o p m e n t s ：p r e s e n ta n d 9 9 万方数据 第2 期农垦医学第3 l 卷 f u t u r e 8 a l lm H a pJ tD i s 。2 0 0 7 6 5 ( 3 ) ：2 4 2 - 2 4 8 2 苏海丽，邱平，唐劲松等膝关节负衙改变对关节软骨的影 响中国临床康复2 0 0 5 9

24、 ( 6 ) ：8 4 - 8 5 3 J u b e lA ，A n d e r m a h rJ ，S c h i f f e rG ，e ta 1 T r a n s p l a n t a t i o no fd en O Y O s c a f f o l d f r e ec a r t i l a g ei m p l a n t si n t os h e e pk n e ec h o n d r a ld e f e c t s A mJS p o r t sM e d 2 0 0 8 ，3 6 ( 8 ) ：1 5 5 5 一1 5 6 4 4 】M a r t e l

25、P e l l e t i e rJ ，h j e u r l e eD ，F a h m iH 。e ta 1 N e wt h o u g h t si n t h ep a t h o p h y s i o l o g y0 fo s t e o a r t h f i t i s ：O n em o r es t e pt o w a r dn e w t h e r a p e u t i ct a r g e t s C u r rK h e u m a t o lR e p 2 0 0 6 ，8 ( 1 ) ：3 0 3 6 5 C h uSC ，Y a n gSF ，L u

26、eKH ，e ta 1 U r o k i n a s e t y p ep l a s m i n o g e n a c t i v a t o r 。r e c e p t o r ，a n di n h i b i t o rc o r r e l a t i n gw i t hg e l a t i n a s e B 论著 ( M M P 一9 ) c o n t r i b u t et oi n f l a m m a t i o ni ng o u t ya r t h r i t i so ft h e k n e e JR h e u m a t 0 1 2 0 0 6

27、 3 3 ( 2 ) ：3 1 1 - 3 1 7 6 L a v i g n eP ，B e t x l e r d o u rM ，b 汹I r e eD ，da i s l I b c h o n d m la n dI r a - h e e u l a rb o n em e t a b o l i s mI i e I g t l l a l i o l li ne o n i n ee x p e r i m e n t a lk n e eo s t e - o a r t h r i t i s O s t e o a r t h r i t i sc a n i l a 矽

28、，2 0 0 5 1 3 ( 4 ) ：3 1 0 - 3 1 7 7 W a l t e rH K a w a s h i m aA N e b e l u n gW e ta 1 1 m m u n o h i s t o e h e m i e a l a n a l y s i so fs e v e r a lp r o t e o l y l i ce n z y m e s p a r a m e t e r so fc a r t i l a g e d e g r a d a t i o n P a t h o IR e sP r a t t 1 9 9 8 ；1 9 4 (

29、 2 ) ：7 3 - 8 I 收稿日期：2 0 0 8 1 2 0 3 晚期肿瘤患者外周血淋巴细胞体外药敏试验 与临床疗效的相关性研究 孙凌1王于理1李娜2王振华3郑秋生3巩平2 ( 1 石河子大学医学院2 0 0 6 级肿瘤学硕士研究生， 2 石河子大学医学院第一附属医院肿瘤内科，3 石河子大学药学院，新疆石河子，8 3 2 0 0 2 ) 【摘要】目的：研究晚期肺癌、乳腺癌患者外周血淋巴细胞体外化疗药物敏感性与临床疗效的关系，为临床个体 化化疗提供依据。方法：采用M 1 T r 法测定1 7 例晚期肺癌、1 4 例晚期乳腺癌患者的外周血淋巴细胞对8 种常用化 疗药物的敏感性，并依据药敏结

30、果选择化疗方案，同时选取依照传统经验化疗的晚期肺癌和乳腺癌患者各2 0 例作 为对照组比较两组的临床疗效是否存在统计学差异。结果：1 7 例晚期肺癌患者外周血淋巴细胞对8 种化疗药 物的敏感顺序依次为：顺铂、紫杉醇、吉两他滨、卡铂、长存瑞滨、环磷酰胺、氟尿嘧啶、阿霉素；1 4 例晚期乳腺癌患者 外周血淋巴细胞对8 种化疗药物的敏感顺序依次为：环磷酰胺、阿霉素、氟尿嘧啶、紫杉醇、顺铂、卡铂、吉西他滨、 长春瑞滨。药敏试验敏感并用于临床有效的共2 7 例，有效率为8 7 1 ( 2 7 3 1 ) ，与对照组( 5 5 ) 相比差异具有 统计学意义( P 0 0 1 ) 。结论：恶性肿瘤患者的外周

31、血淋巴细胞可替代肿瘤细胞进行体外药敏试验检测帮助临床 医师制定合理的化疗方案，有助于提高恶性肿瘤患者的临床疗效和远期生存率。 【关键词】肺癌；乳腺癌；淋巴细胞；药敏试验 中图分类号：R 7 3 3文献标识码：A R e s e a r c ho nc o r r e l a t i o nb e t w e e nc h e m o s e n s i t i v i t yo fp e r i p h e r a lb l o o d l y m p h o c y t e si nv i t r oo fa d v a n c e ds t a g et u m o ra n dt h e

32、t h e r a p e u t i ce f f e c t S u nL i n 9 1 ，W a n gY u l i 。，L iN a 2 ，W a n gZ h e nh u a 3 ，Z h e n gQ i o u s h e n 9 3 ，G o n gP i n 9 2 ( 1 G r a d e2 0 0 6g r a d u a t es t u d e n to fd e p a r t m e n to fM e d i c a lO n e o l o g yi nS h i h e z iU n i v e r s i t y ， 2 T h eF i 倦tA

33、f f i l i a t e dH o s p i t a lo fS h i h e z iU n i v e r s i t y 3 P h a r m a c yc o l l e g eo fS h i h e z iU n i v e r s i t y ，X i n g J i a n g ，S h i h e z i8 3 2 0 0 8 ) 【A b s t r a c t 】O b j e c t i v e ：T oi n v e s t i g a t et h er e l a t i o n s h i pb e t w e e nC h e m o e e n s

34、 i t i v i t yo fp e r i p h e r a lb l o o dl y m p h o e y t e si n v i t r oa n dt h et h e r a p e u t i ce f f e c t ，i no r d e rt op r o v i d et h eg u i d a n c ef o ri n d i v i d u a lc h e m o t h e r a p yi np a t i e n t sw i t hl u n gc a n c e ro r 通讯作者：巩平，女，教授，硕士生导师，从事肿瘤化疗及免疫研究。 1 0 0 万方数据