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1、文章编号: 1 001 一 5 9 4 9 ( 2 008 ) 0 5 一 0 3 9 6 一 0 3 论著 复方丹参片对糖尿病大鼠体内氧化应激的影响 吴 莉 ， 杨桂珍， ， 黄科军 2 ， 陈 健茂 ， 【 摘要 目的 观察复方丹参片对糖尿病( D M ) 大鼠 体内氧化应激水平的影响。方法 以腹腔注射链脉佐 菌素( S T z ) 60m 了 k g 制备S D大鼠 糖尿病模型， 随机分为D M模型对照组， 复方丹参片大、 中、 小3 个剂量组 1 . 以、 208、 4 . 13 ( k g d) ， 并作正常对照。 4 周后测定各组大鼠血清、 心肌、 坐骨神经超氧化物岐化酶( S O
2、 D ) 活性、 过 氧化脂质( 廿0 ) 、 丙二醛( M D A)含量及坐骨神经山梨醇、 红细胞山梨醇含量。结果复方丹参片能降低糖尿病大 鼠廿0、 M D A 、 坐骨神经、 红细胞山梨醇含量， 使S O D水平升高。结论 复方丹参片可减轻糖尿病大鼠 组织的氧化 应激， 具有抗氧化作用。 【 关键词 复方丹参片; 糖尿病， 实 验性; 大鼠; 氧化应激; 超氧化物岐化酶 【 中图分类号I R一 3 32 文献标识码 A E n 笼 c tsofcom pou n dR ed一 roo t ed syl讨 a ta bl e tson th e 耐dsU ves t r . 治ind ia
3、be血 rats W 刀 石， etaL ( POlyt e c h n i c sc h ool ofN in 罗 i a M e d i c alC o l l e 罗， Y i n c h u an7 5 (X)2 1 ， C h i n a ) A bs t r a 改 TOObse rv e t h e e ffec tsofc o m peu n d R ed一 代 旧 t e d s y l v i a ( R R Y ) tabl ets o n the ox i d at i v e s tres s i n d i a b e t i c r a t s . Me th o
4、dD i a b e t i cM i l l e t u s( D M)rat m ode l t i o 几A n i m a 1 s wererand o m 1 y di v i d e d i n t o fi v e gr o u p s was i n d u c ed wi t hst ro Pt o zo tu c i n( 5 兀 6()m 岁k g )t h rough i n t r a pe ri to ne ali nj e c - ac c o rd i n g toth e l e ve l offast i n g bl .扣 dgl u c o s e (
5、F B G ) and 脚u p s ofD Mcont rol， R R S h i gh( 4 . 1 3 k 合 d 一 ) ， m e d i wee k s ， th e c ont e ntofs u 伴 roxi ded i s m u ta s e ( S O D ) ， 廿0 ， u m ( 2 . 0 5 k g d 一 ) ， l owd ose( 1 . 以 岁 k g a 一 ) ana h 记 y weigh t ， whic h were n o n 刀 al c ont rol . A ft er 4 m al e i C d ialde h y d e ( M
6、 D A ) i n se ru m ， m y OC ardi u m u re d ， 助d th e c o n c e n t r a t i o n Ofso r b 1 t ali n s c i at i c n erve and e ryth rocy t e werem e as u red. R 璐 u l ts C o m 即u nd andsci atic n e r v ew e re r n e as- R e d 一 r o o t ed s y lv 运c ouldre - d u c e th e l e v e l ofL P O ， M D Aa n ds
7、 o th i to l i ns c i at i c n erve a n d e ry t h rocyte. Itc oul di n c re ase th e l e v e l ofS O D . C ond usi o n C o m p o u n d R e d 一 m O t ed S y I v i a t a b 1 ets c an azne l io r a t e o x i d at i ves tres s i nth e t i s s u e ofd i abet i c ra t s . I t h 朗th e e ffec t ofa n t i 一
8、 oxl d a t i o 几 【 K eyw o r d s con ， 浏 川 耐Red 一 roote d 勿 1 必似 b 玩; D 她 be tes;nellitus ， 。 甲 e ri me瓜 al ; 五 。 韶 ; ox面 阮 名 沁: :ress ; S oD 由自由基介导的脂质过氧化作用可导致体内多 种脏器氧化损伤， 而活性氧自由基损伤在糖尿病并 发 症 发生 发展中的 作用也得到 普遍 认同 周 。 报道 称复方丹参片可提高血清和红细胞超氧化物歧化酶 ( S O D ) 活性， 并且能显著改善糖尿病患者心、 脑血管 及 神 经 系 统 并 发 症的 症状 及 体 征
9、川 。 为 探 讨 其作 用机制， 我们观察了复方丹参片对链脉佐菌素 ( st re Pt oz o to ci n ， S T Z ) 糖尿病大鼠坐骨神经、 红细胞 山梨醇含量及LPO 、 M D A 、 S O D 水平等指标的影响。 1 材料与方法 1 . 1 实验材料 1 . 1 . 1 药品 及试剂: 复 方丹参片( 由 丹参浸膏、 三七、 冰片组成) 由宁夏启元药业有限责任公司提供( 每片 含丹参酮n AO . 46mg， 丹参酚酸 BS， o mg) ， 批号 肠10 3 8 ， 应用时剥去糖衣粉碎研细， 过80 目 筛， 溶解 于新鲜蒸馏水中， 配成适当浓度贮存于4 冰箱中备
10、用; 5 兀、 山梨醇为美国si gn l a 公司产品; S O D 、 LPO 、 M D A试剂盒由 南京建成生物工程研究所提供。 1 . 1 . 2 实验仪器: D U一 翻0紫夕 材可见分光光度计 ( 美国贝克曼公司生产) ， 大白鼠恒温手术台( 南京生 产) ， 稳豪型全微量血糖检测仪( 美国罗氏公司生产) ， B L 一 4 20四 道生物机能实验系统( 成都泰孟科技有限 公司生产) ， H e rn ilZ W一 3 23H低温超速离心机( 德国 生产) ， D Y 89一 1 型电动玻璃匀浆机( 宁波生产) 。 基金项目 宁夏自 治区卫生厅重点科研计划项目( WZ仪 琅) 1
11、 0) 作者单位 1 . 宁夏医 学院高职学院， 宁 夏银川75加2 1 2 . 宁夏医学院， 宁夏银川75( x 兀 峙 作者简介 吴莉， 女( 1 9 63一 ) ， 副教授， 学士学位， 主要从事生物学 教学及遗传学研究。 1 . 2 实验方法 1 . 2 . 1 动物模型建立与分组: 8 周龄S D ( S p r a gy e一 D o w l e g ) 清洁级健康雄性大鼠( 2 5 0 土 2 0 ) 9 5 8 只， 由 宁夏医学院实验动物中心提供， 合格证号 S C X K ( 宁) 2 006 一 0018。自由进食饮水， 适应性观察 1 周 后按体重随机分为正常对照组ro
12、只， 造模组48只。 造模组大鼠于禁食14小时后用新鲜灭菌的0 . l m o F L 构椽酸缓冲液( p H4。 5)将5 化 配成1 %的浓度， 按 6 0 m 酬 k g 体重腹腔一次性注射。 7 2 小时后由 尾静脉 采血测血糖， 取血糖值 16 m m 0 F L 大鼠随机平行分 为4 组， 即阳性对照组及大、 中、 小剂量实验组。 1 . 2 . 2 给药方法: 造模后， 复方丹参片按生药量计 万方数据 3 9 7 算， 以 临 床常用剂量折成大鼠近似等效剂量， 大剂量苯巴比 妥麻醉后， 俯卧 位固 定， 分离并取出双侧坐骨 组灌胃4 . 13 k g ， 中 剂量组灌胃2 . 0
13、8岁 k g ， 小剂量组神经， 用生理盐水洗净血液， 加4 %预冷过氯酸 灌胃1 . 以 k g 3， 4 ; 正 常 对 照 组 和 阳 性 对照 组 灌胃 相1 . s ml匀 浆， 3 000r/ m in离 心， 10秒 钟， 3 次， 取 上 清 同 体积的蒸馏水， 5 组均灌胃1 次/ 天。以上处理方法液测定。 结果以m 0 F g 组织表示。 每2 周根据体重变化随时调整。 饲养期间饮水和饲1 . 4 统计学处理: 数据用S PSS n . 5 统计学软件处 料不加限制， 连续给药4 周。 末次给药后禁食12小理， 各样本均数比 较采用单因素方差分析。 时， 苯巴比妥腹腔注射麻
14、醉， 心腔取血检测相应指标。2 结果 1 . 3 组织匀桨制备及指标测定2 . 1 复方丹参片对S Tz 大鼠血糖、 体重及一般状态 1 . 3 . 1组 织 匀 浆制 备 参 照 文 献51方 法 进 行: 苯巴比的 影 响: 与 正 常 对 照 组 相比 ， 阳 性对照 组 大鼠 血糖明 妥钠麻醉， 心腔内取血后处死， 取心肌组织， 用4 预显升高， 体重明显减轻( 尸 0 . 05) 。除正常对照组， 其它 钟， 3 次; 制备20%匀浆， 4 00O r/ 分钟离心10分钟，各组大鼠 一般状态诸如多饮、 多尿、 毛发蓬松稀疏、 取上清液4 保存待测。用同样方法制备坐骨神经生长缓慢及活动
15、均减少。治疗4周后， 阳性对照组 匀浆， 一 20保存待测。血清、 心肌及坐骨神经S O D大鼠一般状态整体变化不明显， 各实验组大鼠均有 活性用黄嚷岭氧化酶法， 廿0用八木纸改良 法， M D A所好转。 含量用硫代巴比妥酸法， 严格按照试剂盒说明书操2 . 2 复方丹参片对S T Z大鼠血清、 心肌、 坐骨神经 作检测。以考马斯亮蓝法测定蛋白含量。廿0 、 M D A含量比较: 与正常对照组相比， 阳性对照 1 . 3 ， 2 红细胞、 坐骨神经山梨醇含量测定参照文组大鼠血清、 心肌、 坐骨神经 L P O 、 M D A含量明显升 献【 6 ，v方 法， 采 用 化 学 法 测 定: (
16、 1)红 细 胞样品 处 理。高。 治 疗4 周 后， 实 验组 大鼠 各 组 织中廿0 、 M D A 水 肝素抗凝血， 3 ( X X ) r/ 而n 离心巧分钟， 弃血浆， 留取平较阳 性对照组下降( 尸 0 . 05， 见表1 ) 。 红细胞用10倍体积生理盐水洗涤3 次， 压积红细胞2 . 3 复方丹参片对S T Z大鼠血清、 心肌、 坐骨神经 用生理盐水 1: 3 稀释， 取0 . s d红细胞稀释液， 加S O D水平的影响: 与正常对照组相比， 阳性对照组大 等量双蒸水破膜， 然后加2 . 3 耐预冷6 %过氯酸沉淀鼠血清、 心肌、 坐骨神经S O D水平明显降低。治疗4 蛋白
17、， 4 000 r/ m in离心5 分钟， 取上清液测定。结果周后， 各实验组大鼠 血清、 坐骨神经S O D水平较阳 性 以m o F g 组织表示， 血红蛋白定量采用氰化高铁血对照组升高( 尸 0 . 05) ， 心肌S O D水平与阳性对照 红蛋白法。( 2 ) 坐骨神经样品处理。大鼠腹腔注射组比 较无统计学意义( P= 0 . 05， 见表2 ) 。 表1 复方丹参片对糖尿病大鼠血清、 心肌、 坐骨神经L P O 、 M D A含t的影响( 云 士 ， 组别 M D A C/( mol 9 ) 血清 L P O C/( mol 心肌 9 ) 坐骨神经心肌坐骨神经 00011nll J
18、.工困.工，且通111 正常对照组 阳性对照组 大剂量组 中剂量组 小剂量组 1 . 2 4土0 . 1 8 2 . 1 4土 0 . 1 6 1 . 4 3土 0 . 1 6 1 手 1 . 64 士 0 . 1 5 3 奋 1 . 8 6士 0 1 5 # 1 . 3 8土0 . 09 8 2 . 1 1 土 0 . 1 4 1 . 4 2土 0 . 1 1 . 1 . 5 7土 0 . 1 0 俘 1 . 7 1 土 0 . 093 介 1 . 3 9士 0 . 1 2 2 . 44 士 0 . 1 5 6 1 . 5 5土 0 . 1 0 二 1 . 6 5土 0 . 1 5 0 .
19、母 1 . 7 5土 0 . 1 5 9 二 血清 1 . 乃 土 0. 2 . 1 8 土 0 . 1 3 1 . 4 2士 0 . 1 6 2 . 价 1 . 6 2 9土 0.1 47# 1 . 8 2 3士 0 . 1 66毋 1 . 3 7土0 . 1 0 2 . 1 5土 0 . 1 3 1 . 4 1 士 0 . 1 0 俘 1 . 5 6土 01 3 。 1 . 6 9土 01 2 . 1 . 3 8士0 . 1 1 2 . 4 3 土 0 . 1 5 1 . 5 4土 0 . 1 2 . 1 . 6 7士 0 . 1 4 . 1 . 7 2士 0 . 1 6 . 注: 与正常
20、对照组比较， .P 0 . 05， 尸 001; 与阳性对照组比较， # 尸 005 表2 复方丹参片对糖尿病大鼠血清、 心肌、 坐骨神经S O D水平的影响 组别n 剂量 ( 留k g ) 血清 ( 云 土 5 ， U / L ) 心肌 ( 无 土 5 ， U / L ) 坐骨神经 ( 元 土 5 ， U/L ) 00UC0 ，且弓.几.且.二旧.卫 正常对照组 模型对照组 大剂量组 中剂量组 小剂量组 4 . 1 3 2 . 0 8 1 . 04 5 3 6 . 0 1 土 闷 4 . 4 3 4 2 8 . 9 2土 4 7 . 5 4 5 04. 00 土 45. 94行 4 84.
21、8 1 土 46. 6 2 # 4 4 03 6士 5 0 . 1 4. 4 1 7 . 5 8土7 2 . 3 7 3 46. 5 1 土 3 8 . 02 . 3 7 4 . 8 1土 5 73 6 3 6 9 . 5 7土 3 2 . 以 . 3 6 7 . 4 9士3 9 . 06 . 4 5 7 . 5 0士 4() . 5 8 3 9(). 3 2土 3 7 . 5 2 . 4 3 8 . 5 3士 4 3 . 9 7 口 4 2 8 . 7 7土 科 . 肠 4 0 石 . 7 5土 4 7 . 46 注: 与正常对照组比 较， 。 p 。 . 05， p 0 . 01; 与阳
22、性对照组比 较， # p 0 . 05 2 . 4 复方丹参片对5 1 艺大鼠红细胞、 坐骨神经山梨 醇含量的影响: 阳 性对照组大鼠 红细胞、 坐骨神经山 梨醇含量与正常对照组相比明显升高( P 0 . 05) ， 治疗4 周后， 实验组红细胞、 坐骨神经山梨醇含量明 万方数据 显低于阳 性对照组( 尸 0 . 05， 见表3 ) 。 表3 复方丹参片对糖尿病大鼠红细胞、 坐骨神经山梨醇含t的影响【 无 土 。 ) 组别n 红细胞 坐骨神经 C/ ( 9 )林 m ol 正常对照 阳性对照 大剂量 中剂量 小剂量 0 . 4 3土 0 . 0 7 0 . 9 7土 0 . 抖 * 0 . 6
23、 2土 0 . 05. 0 . 65 士 0 . 07 . 0 . 6 6士 0 . 05 * 1 . 2 6土 0 . 29 2 . 3 1 土 0 . 3 3* 1 . 5 8士 0 . 1 0 . 1 . 60 土 0 . 00 . 16 5土 0 . 1 2* 00000 ，且J.且.几1.1 注: ，与正常对照组比较， 尸 0 . 05; 与阳性对照组比较， P 0 ， 0 5 改善糖尿病心、 脑血管及神经系统并发症的 症状及体 征闭。 本实验结果显示， 阳 性对照组大鼠 血清、 心 肌、 坐骨神经S O D活性明显低于正常对照组大鼠， 廿0 、 M D A 含量显著升高， 提示D
24、M大鼠 体内 组织器 官脂质过氧化反应增强。经复方丹参片治疗后大鼠 血清、 心肌、 坐骨神经M D A 、 廿0 含量明 显降低， S O D 活性( 血清、 坐骨神经) 明显升高， 提示复方丹参片能 在一定程度上通过提高S O D活性来加速氧自由基的 清除， 从而增强组织的抗氧化能力， 减弱5 花 对胰岛 日 细胞的损伤， 或改善受损伤的p 细胞的 功能。 但心 肌S O D活性升高 并不明 显， 这与文献6， ， 。 报道一 致， 反映出不同组织的氧化损伤是有差别的。 同时， 实验结果也发现复方丹参片能明显降低糖 尿病大鼠红细胞及坐骨神经山梨醇含量， 改善神经传 导速度， 而且对坐骨神经S
25、 O D活性升高明显， 但并不 明显降低血糖水平。表明复方丹参片对糖尿病大鼠 周围神经损伤有防治作用， 但不是通过降低血糖实现 的， 可能与直接增强酶( S O D ) 活性和抑制多元醇代谢 通路机能亢进有关， 有关研究正在进一步进行。 参考文献 刘彤云， 舒思洁， 舒惠， 等. 雷竹笋汁对糖尿病大鼠组织过氧化 损伤的 影响仁 J . 浙江中 西医 结 合杂志， 2 仪 ”， 1 4 ( 4): 2 25一 2 肠 . 李晓林， 李晓梅， 陆艳娟， 等. 成年糖尿病大鼠重要器官组织 soD 、 M DA 含量变化【 J J .中国老年学杂志， 2 (X5 ， 2(25) : 4 12 一4 1
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29、( 1 2 ) : Mg 一 652 . 【 收稿日 期 2 (X)7 一 10 28【 责任编辑 马 兴忠 ，J气esJ ，几，扮 尸月.r. 户.J，JfJ 丹J4咤 rJ加L尸1.J 卜一一lesJ 6，. r 3 讨论 D M是多种因素引起的以血糖升高为特征的代 谢紊乱性疾病， 控制血糖是防 止D M慢性并发症的重 要手段， 但单纯控制血糖并不能完全阻断其发生和发 展。这是由于在高血糖状态下， 不仅多元醇代谢通路 活性增强， 使大量山梨醇堆积在神经细胞内， 造成细 胞水肿、 坏死， 功能损伤; 而且由 血糖介导的糖自 身氧 化和蛋白糖基化， 可引起氧自由基生成增多， 干扰一 氧化氮合成
30、， 引起神经组织“ 伪缺氧” ， 血管和神经细 胞功能障碍及组织结构改变。同时， 多价不饱和 脂肪 酸也在氧自由基攻击下发生脂质过氧化反应， 生成大 量的L P O及其代谢产物M D A ， 后者可与线粒体膜、 膜 蛋白发生交联反应， 干扰其电子传递和磷酸化过程， 使A 开 合成减少， 蛋白降解， D N A结构损伤， 功能障 碍; 另一方面， 过多的氧自由基能糖基化3 一 磷酸甘 油醛脱氢酶( G A P D H ) ， 使糖分解代谢受阻， 诱导组织 因子、 血栓调节素、 内皮素一 1 等促凝血因子过度表 达， 产生明显的氧化应激反应。而清除氧自由基的 S O D 也因 非酶 性 糖 基 化
31、 反 应 而 活 性 降 低 。 另外， 一氧化氮合成减少， 使L P O与蛋白 非酶糖 基化终产物( ad v a n c e dgl y c o s y l a t io ne n d p redu c ts， A G Es) 产生协同作用， 不仅使组织细胞应激氧化， 血 管内皮细胞膜和基膜受损、 微血管收缩、 神经营养性 血流减少， 并能抑制前列环素( PG) 合成酶， 使PG1 2 合成减少， TxA : 产生增多， P GIZ / T X A : 平衡失调， 血 小板发生聚集而致血栓形成， 从而促进D M神经病变 并 发 症 的 发 生 与 发 展 。 抗氧化剂在抑制糖基化终产物形成、 脂质氧化过 程、 减轻外周神经病变、 降低血小板高凝状态及稳定 血管内 皮细胞功能等方面对控制糖尿病慢性并发症 发 挥 着 明 显 的 作 用 ” 1 。 报 道 称 ” ， 丹 参 与 三 七 合 用 能 共同 降 低 脂质过氧 化物( 廿0 ) 含量， 也能 使P GI Z 合成增加， 提高P GIZ / T X A : 比 值， 从而扩张微血管， 改善血流阻断， 防止糖尿病微血管病变的发生， 也可 1 1 万方数据