SN-0606-1996.pdf

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1、SN 中华人民共和国进出口商品检验行业标准 s N 0 6 0 6 一 1 9 9 6 出口乳及乳制品中ffs菌灵残留量检验方法 荧 光 分 光 光 度 法 M e t h o d f o r t h e d e t e r mi n a t i o n o f t h i a b e n d a z o l e r e s i d u e s i n m i l k a n d mi l k p r o d u c t s f o r e x p o r t -F l u o r e s c e n c e s p e c t r o p h o t o me t r y 1 9 9 6 一

2、 1 1 一 1 5 发布1 9 9 7 一 0 5 一 0 1 实施 中华人民共和国国家进出口商品检验局发 布 S N 0 6 0 6 一 1 9 9 6 前言 本标准是根据G B / T 1 . 1 -1 9 9 3 ( 标准化工作导则 第1 单元: 标准的起草与表述规则 第1 部分: 标准编写的基本规定 及S N / T 0 0 0 1 -1 9 9 5 出口 商品中 农药、 兽药残留 量及生物毒素检验 方法标准编 写的 基本规定 的要求而进行编写的. 其中测定方法是参考国内 外有关文献， 经研究、 改进和验证后制 定。本标准同时制定了抽样和制样方法。 测定低限是根据国际上对鲜乳中唾菌灵

3、残留量的最高限量和测定方法的灵敏度而制订的。 本标准的附录A为提示的附录。 本标准由中华人民 共和国国家 进出口 商品检验局提出并归口 。 本标准负责起草单 位: 中华人民 共和国 广东进出口 商品 检验局。 本标准主要起草人: 张思群、 李辉、 梁伟大。 本标准系首次发布的行业标准。 中 华人民共和国进出口 商品检验行业标准 出口乳及乳制品中唾菌灵残留量检验方法 荧光分光光度法 s N 0 6 0 6 一1 9 9 6 Me t h o d f o r t h e d e t e r mi n a t io n o f t h i a b e n d a z o l e r e s i d

4、u e s i n mi l k a n d mi l k p r o d u c t s f o r e x p o r t -Fl u o r e s c e n c e s p e c t r o p h o t o me t r y 1 范围 本标准 规定了出口 乳及乳制品中 唾菌灵残留 量检验的抽样、 制样和荧光分光光度测定 方法。 本标准适用于出口鲜乳中唾菌灵残留量的检验。 2 抽样和制样 2 . 1 检验批 以不超过 5 0 0 0 0 瓶为一检验批。 同一检验批的商品应具有相同的特征， 如包装、 标记、 产地、 规格和等级等。 2 . 2 抽样数量 批量， 瓶最低抽样数， 瓶

5、1 0 0 0 0 以下2 1 0 0 0 0 2 0 0 0 0 3 2 0 0 0 1 3 0 0 0 0 4 3 0 0 0 1 - 4 0 0 0 0 5 4 0 0 0 1 5 0 0 0 0 6 2 . 3 抽样方法 按2 . 2 规定的抽样瓶数随机抽取， 在所取的样瓶上标明 记号， 及时送实验室。 2 . 4 试样制备 将所取回的样瓶， 充 分混匀， 分取约2 5 0 m L 作为试样。 装入洁净的 容器内， 密封， 标明标记。 2 . 5 试样保存 将试样于一5 以下保存。 注: 在抽样和制样的操作过程中， 必须防止样品受到污染或发生残留物含量的变化. 3 测定方法 3 门方法

6、提要 用氢氧化钾皂化试样中 的脂肪， 用乙 酸乙 酷提取唾菌 灵， 再用盐酸溶液抽提乙酸乙醋提取液中窿菌 灵。 用荧光分光光度法测定， 标准曲 线法定量。 3 . 2 试剂和材料 除另有规定外， 所用试剂均为分析纯， 水为蒸馏水。 中 华人民共和国国家进出口 商品检验局1 9 9 6 - 1 1 一 1 5 批准 1 9 9 7 一 0 5 一 0 1 实施 I s N 0 6 0 6 一 1 9 9 6 3 . 2 . 1 氢氧化钾溶液: 5 0 0 0 ( m / V ) 水溶液。 3 . 2 . 2 氢氧化钾溶液: 0 . 0 5 0 o ( m/ V) 水溶液。 3 . 2 . 3 盐

7、酸溶液: 。 . 1 m o l / L , 3 . 2 . 4 乙酸乙醋。 3 . 2 . 5 唾菌灵标准品: 纯度)9 9 y o . 3 . 2 . 6 噢菌灵标准溶液: 准确称取适量的 唾菌灵标准品， 用盐酸溶液配成浓度为。 . 1 0 0 m g / m L的标准 贮备液。根据需要再用盐酸溶液稀释成适当浓度的标准工作溶液. 3 . 3 仪器和设备 3 . 3 . 1 荧光分光光度计。 3 . 3 . 2 冷凝管。 3 . 3 . 3 分液 漏斗: 1 2 5 m L , 3 . 3 . 4 锥 形瓶: 1 0 0 m L ， 具磨口。 3 . 3 . 5 电热水浴锅。 3 . 3 .

8、 6 容量瓶: 1 0 m L , 3 . 4 测定步骤 3 . 4 . 1 皂化 称取试样1 0 g ( 精确至0 . 1 g ) 于锥形瓶中， 加入7 m L氢氧化钾溶液( 3 . 2 . 1 ) ， 接上冷凝管， 在沸腾 的 水浴上回 流皂化4 0 m in ， 取下， 充 分冷却。 3 . 4 . 2 提取 将皂化液移 入分液漏斗中， 用1 0 m L 水洗涤锥形瓶， 洗液并人同一分液漏斗。 加入1 5 m L乙酸乙 酷， 轻摇 0 . 5 mi n ， 静止分层。将水层转入另一分液漏斗， 用 1 5 mL乙酸乙酷再提取一次， 剧烈振摇 1 m i n ， 静止 分层。 合并乙酸乙醋

9、提取液。 3 . 4 . 3 净化 用2 0 m L氢氧化钾溶液( 3 . 2 . 幻洗涤乙 酸乙 酷提取液， 剧烈振摇1 m i n ， 分层后， 弃去水层。再加入 2 0 m L氢氧化钾溶液( 3 . 2 . 2 ) 轻 摇洗涤一次， 弃去水层。 用2 X5 m L 盐酸溶液( 0 . 1 m o l / L ) 提取乙酸乙 酷层。合并盐酸提取液于1 0 m L 容量瓶中， 并用盐酸溶液( 0 . 1 m o l / L ) 定容。 供荧光分光光度法测定。 3 . 4 . 4 测定 3 . 4 . 4 . 1 荧光分光光度法测定条件 激发波长: 3 0 7 n m ; 发射波长: 3 5

10、9 n m 。不同型号仪器， 可 根据实际 情况调节， 以获得 最佳激发波长 和发射波长。 3 . 4 - 4 . 2 标准曲线的绘制 分别吸取0 . 2 , 0 . 5 , 1 . 0 , 5 . 。 和1 0 . 0 m l , 标准工作溶液至一组 1 0 m l , 容量瓶中， 用盐酸溶液 ( 0 . 1 m o l / L ) 定容， 于荧光分光光度计上测定各荧光吸光度， 以荧光吸光度对唾菌灵浓度绘制标准曲 线。 标准品的荧光吸光度扫描图见附录A中图A l , 3 . 4 - 4 . 3 样液测定 取3 . 4 . 3 中 定容后的 样液， 于荧光分光光度计上测定样液的荧光强度。 从标

11、准曲线上 查得样液中ps 菌灵浓度。 3 . 4 . 5 空白试验 除不加试样外， 均按上述测定步骤进行。 3 . 5 结果计算和表述 按式( 1 ) 计算试样中噢菌灵的残留含量: X _ c “ V. . . .“ ( 1 ) s N 0 6 0 6 一 1 9 9 6 式中: X 试样中唾菌灵含量, m g / k g ; c 从标准曲 线上查得的样液中唾菌灵的浓度, u g / m L ; V 定容后样液的体积， m L ; ， 试样的重量， 9 。 注: 计算结果需将空白值扣除. 4 测定低限、 回收率 4 . 1 测定低限 本方法的测定低限为。 0 2 m g / k g . 4 .

12、 2 回收率 回收率的实验数据: 唾 菌 灵 的 添 加 浓 度 在。 . 0 2 m g / k g 时， 回 收 率为1 0 2 0 o ; 唾菌灵的添加浓度在。 . 1 0 m g / k g 时， 回 收率为9 6 . 5 0 0 ; 唾菌灵的添加浓度在。5 0 m g / k g 时， 回 收率为9 9 . 6 0 0 . s N 0 6 0 6 一1 9 9 6 附录A ( 提示的附录) 标准品荧光吸光度扫描图 2 8 0 3 5 9 图 A1 唾菌灵标准品荧光吸光度扫描图 S N 0 6 0 6 一1 9 9 6 Fo r e wo r d T h i s s t a n d a

13、 r d w a s d r a f t e d i n a c c o r d a n c e w i t h t h e r e q u i r e me n t s o f GB / T 1 . 1 -1 9 9 3 “ D i r e c t i v e s f o r t h e w o r k o f s t a n d a r d i z a t i o n -Un i t 1 ; D r a f t i n g a n d p r e s e n t a t i o n o f s t a n d a r d s -P a r t ! 1 Ge n e r a l r u l

14、e s f o r d r a f t i n g s t a n d a r d s “ a n d S N / T 0 0 0 1 -1 9 9 5 “ G e n e r a l r u l e s f o r d r a f t i n g t h e s t a n d a r d m e t h o d s f o r t h e d e t e r mi n a t io n o f p e s t i c i d e , v e t e r i n a r y d r u g r e s i d u e s a n d b i o t o x i n s i n c o m m

15、o d i t i e s f o r e x p o r t “ . T h e m e t h o d o f d e t e r m i n a t io n o f t h i s s t a n d a r d w a s d r a f t e d b y r e f e r r i n g t o r e l e v a n t d o me s t ic a n d f o r e i g n li t e r a t u r e s t h r o u g h r e s e a r c h , m o d if i c a t i o n a n d v e r if i

16、c a t i o n . I n a d d i t i o n , me t h o d s o f s a mp l in g a n d s a m - p i e p r e p a r a t i o n a r e a l s o s p e c i f ie d i n t h i s s t a n d a r d . Th e l i mi t o f d e t e r min a t i o n i n t h i s s t a n d a r d is d e f i n e d o n t h e b a s e s o f t h e c u r r e n t

17、 i n t e r n a t io n a l m a x i m u m l i m i t s f o r t h i a b e n d a z o l e r e s i d u e s i n mil k a n d t h e s e n s i t i v i t y o f t h e m e t h o d . An n e x A o f t h i s s t a n d a r d i s a n i n f o r ma t i v e a n n e x . T h i s s t a n d a r d wa s p r o p o s e d b y a n

18、 d i s u n d e r t h e c h a r g e o f t h e S t a t e A d min i s t r a t i o n o f I mp o r t a n d E x p o r t C o mm o d it y I n s p e c t i o n o f t h e P e o p l e s R e p u b l i c o f C h i n a . T h i s s t a n d a r d w a s d r a f t e d b y G u a n g d o n g I mp o r t a n d E x p o r t

19、 C o mm o d it y I n s p e c t i o n B u r e a u o f t h e P e o p l e s R e p u b l i c o f C h i n a . T h e m a i n d r a f t e r s o f t h is s t a n d a r d a r e Z h a n g S i q u n , L i H u i , L i a n g We i d a T h i s s t a n d a r d i s a p r o f e s s i o n a l s t a n d a r d p r o m u

20、 l g a t e d f o r t h e f i r s t t i m e . N o t e ; T h is E n g l is h v e r s io n , a t r a n s l a t io n f r o m t h e C h i n e s e t e x t , is s o l e l y fo r g u i d a n c e . P r o f e s s i o n a l S t a n d a r d o f t h e P e o p l e s R e p u b l ic o f C h i n a f o r I m p o r t

21、a n d E x p o r t C o mm o d i t y I n s p e c t i o n S N 0 6 0 6 一 1 9 9 6 l v ie t noa f or t he ae t erm l nat l on of t nl abenoazol e r e s i d u e s i n mi l k a n d mi l k p r o d u c t s f o r e x p o r t -F l u o r e s c e n c e s p e c t r o p h o t o m e t r y 1 S c o p e T h i s s t a n

22、 d a r d s p e c if i e s t h e me t h o d s o f s a m p l i n g , s a m p l e p r e p a r a t i o n a n d d e t e r m i n a t i o n o f t h i - a b e n d a z o l e r e s i d u e s b y f l u o r e s c e n c e s p e c t r o p h o t o m e t r y i n m i l k a n d m i l k p r o d u c t s . Th i s s t a

23、n d a r d i s a p p l i c a b l e t o t h e d e t e r m i n a t io n o f t h i a b e n d a z o l e r e s i d u e s i n f r e s h mi l k f o r e x - p o r t . 2 S a m p l i n g a n d s a mp l e p r e p a r a t i o n 2 - 1 I n s p e c t io n l o t Th e q u a n t i t y o f a n in s p e c t i o n l o t

24、s h o u l d n o t b e m o r e t h a n 5 0 0 0 0 b o t t l e s T h e c h a r a c t e r i s t i c s o f t h e c a r g o w i t h i n t h e s a m e i n s p e c t i o n l o t , s u c h a s p a c k i n g , ma r k , o r i g in , s p e c i f i c a t i o n , g r a d e e t c . ， s h o u l d b e t h e s a me .

25、 2 . 2 Q u a n t i t y o f s a mp l e t a k e n Nu mb e r o f b o t t l e s i n Min i mu m n u mb e r o f a n i n s p e c t i o n l o t b o t t l e s t o b e t a k e n L e s s t h a n 1 0 0 0 0 2 1 0 0 0 0 - 2 0 0 0 0 3 2 0 0 0 1 - 3 0 0 0 0 4 3 0 0 0 1 - 4 0 0 0 0 5 4 0 0 0 1 - 5 0 0 0 0 6 2 . 3 S

26、a m p l i n g p r o c e d u r e A n u mb e r o f b o t t l e s s p e c if i e d i n 2 . 2 a r e t a k e n a t r a n d o m. T h e s a mp l e s h o u l d b e m a r k e d a n d s e n t t o l a b o r a t o r y i n t i me . 2 . Q P r e p a r a t io n o f t e s t s a mp l e M i x t h e s a m p l e s d r a

27、 w n i n b o t t l e s e v e n l y , a n d t a k e c a 2 5 0 m L a s t h e t e s t s a m p l e , w h i c h i s p l a c e d i n a c l e a n c o n t a i n e r , s e a l e d a n d l a b e l e d . 2 . 5 S t o r a g e o f t e s t s a mp l e T h e t e s t s a m p l e s h o u ld b e s t o r e d b e l o w一5

28、 0C . No t e : I n t h e c o u r s e o f s a mp li n g a n d s a mp l e p r e p a r a t i o n , p r e c a u t io n mu s t b e t a k e n t o a v o i d c o n t a min a t i o n o r a n y f a c t o r s wh ic h ma y c a u s e t h e c h a n g e o f r e s id u e c o n t e n t . A p p r o v e d b y t h e S

29、t a t e A d mi n i s t r a t i o n o f I m p l e me n t e d f r o m Ma y . 1 , 1 9 9 7 I m p o r t a n d E x p o r t C o mm o d i t y I n s p e c t i o n o f t h e P e o p l e s R e p u b l i c o f C h i n a o n N o v . 1 5 , 1 9 9 6 6 S x 0 6 0 6 一1 9 9 6 3 Me t h o d o f d e t e r mi n a t i o n 3

30、 . 1 P r i n c i p l e T h e f a t i n t h e t e s t s a mp l e i s s a p o n i f i e d wi t h p o t a s s i u m h y d r o x id e , t h e t h i a b e n d a z o l e is e x t r a c t e d w i t h e t h y l a c e t a t e . Th e t h i a b e n d a z o l e i n t h e e t h y l a c e t a t e e x t r a c t i

31、s r e - e x t r a c t e d w i t h h y d r o c h l o r ic a c i d s o l u t io n a n d d e t e r m i n e d b y f l u o r e s c e n c e s p e c t r o p h o t o m e t r y , u s i n g s t a n d a r d c u r v e m e t h o d . 3 . 2 R e a g e n t s a n d m a t e r i a l s U n l e s s o t h e r w i s e s p

32、e c i f i e d , t h e r e a g e n t s s h o u l d b e a n a l y t i c a l ly p u r e , “ w a t e r “ is d i s t i l l e d w a t e r . 12 - 1 P o t a s s i u m h y d r o x i d e s o l u t i o n : 5 0 %( m/ V) a q u e o u s s o l u t io n . 3 . 2 . 2 P o t a s s i u m h y d r o x i d e s o l u t i o n

33、 : 0 . 0 5 o o ( m/ V) a q u e o u s s o l u t i o n . 3 . 2 . 3 H y d r o c h l o r i c a c i d s o l u t i o n ; 0 . 1 m o l / L a q u e o u s s o l u t i o n . 12 . 4 E t h y l a c e t a t e . 12 . 5 T h ia b e n d a z o l e s t a n d a r d : P u r it y _9 9 %. 12 . 6 T h ia b e n d a z o l e s t

34、 a n d a r d s o l u t i o n ; A c c u r a t e l y we i g h a n a d e q u a t e a m o u n t o f t h i a b e n d a z o l e s t a n - d a r d , d i s s o l v e i n h y d r o c h l o r i c a c i d s o l u t io n a n d p r e p a r e a s t a n d a r d s t o c k s o l u t i o n o f 0 . 1 0 0 m g / m L i n

35、 c o n c e n t r a t io n . A c c o r d i n g t o t h e r e q u i r e m e n t , d i l u t e t h e s t o c k s o l u t i o n wi t h h y d r o c h l o r i c a c id s o l u t i o n t o a p p r o p r i a t e c o n c e n t r a t i o n a s t h e s t a n d a r d w o r k i n g s o l u t i o n . 3 . 3 A p p

36、a r a t u s a n d e q u ip me n t . I 1 1 F l u o r e s c e n c e s p e c t r o p h o t o m e t e r . 13 . 2 C o n d e n s e r . 3 . 3 . 3 S e p a r a t o r y f u n n e l : 1 2 5 mL . 13 - 4 C o n i c a l f l a s k : 1 0 0 mL , w i t h g r o u n d s t o p p e r . 13 . 5 E l e c t r i c w a t e r - b

37、 a t h . 3 . 3 . 6 V o l u m e t r i c f l a s k : 1 0 m L . 3 . 4 P r o c e d u r e 1 4 . 1 S a p o n i f i c a t i o n We i g h c a 1 0 g o f t h e t e s t s a mp l e ( a c c u r a t e t o 0 . 1 g ) i n t o a c o n i c a l f l a s k . A d d 7 mL o f p o t a s s i u m h y d r o x i d e s o l u t i

38、o n ( 3 . 2 . 1 ) , c o n n e c t w it h c o n d e n s e r . S a p o n i f y b y r e f l u x i n g o n a b o i l i n g w a t e r - b a t h f o r 4 0 m i n . R e m o v e a n d c o o l d o w n c o m p l e t e l y . 3 , 4 . 2 E x t r a c t i o n T r a n s f e r t h e s a p o n if i e d s o l u t io n t

39、 o a 1 2 5 m L s e p a r a t o r y f u n n e l . W a s h t h e c o n i c a l f l a s k w i t h 1 0 m L o f d i s t i l l e d w a t e r a n d c o m b i n e t h e w a s h in g s i n t o t h e s a m e s e p a r a t o r y f u n n e l . A d d 1 5 m L o f e t h y l a c e t a t e a n d s h a k e g e n t l

40、y f o r 0 . 5 mi n . L e t s t a n d t o s e p a r a t e a n d t r a n s f e r t h e a q u e o u s p h a s e t o a n o t h e r s e p a r a t o r y f u n n e l . R e p e a t t h e e x t r a c t i o n w i t h 1 5 m L o f e t h y l a c e t a t e b y s h a k i n g v i g o r o u s l y f o r 1 m i n . L e

41、 t s t a n d t o s e p a r a t e a n d c o m b i n e t h e e t h y l a c e t a t e e x t r a c t s 3 . 4 . 3 C l e a n u p Wa s h t h e e t h y l a c e t a t e l a y e r w i t h 2 0 m L o f p o t a s s i u m h y d r o x i d e s o l u t i o n ( 3 . 2 . 2 ) . S h a k e v i g o r - o u s l y f o r 1 mi

42、n . L e t s t a n d t o s e p a r a t e a n d d i s c a r d t h e a q u e o u s l a y e r . , Ad d a g a i n 2 0 m L o f p o t a s s i u m h y d r o x id e s o l u t i o n ( 3 . 2 . 2 ) , s h a k e g e n t l y a n d d i s c a r d t h e a q u e o u s la y e r . E x t r a c t t h e e t h y l a c e t a

43、 t e l a y - e r w i t h 2 X 5 mL o f 0 . 1 m o l / L h y d r o c h l o r i c a c i d s o l u t i o n , c o mb i n e t h e e x t r a c t s o f h y d r o c h l o r i c a c id s o l u t io n i n a 1 0 mL v o l u me t r i c f l a s k a n d d i l u t e t o m a r k w it h h y d r o c h l o r i c a c i d

44、s o l u t io n . T h e s o l u t i o n i s r e a d y f o r f l u o r e s c e n c e s p e c t r o p h o t o me t r i c d e t e r m i n a t io n . 3 . 4 . 4 D e t e r m i n a t io n s N 060 6一 19 96 14 . 4 . 1 F l u o r e s c e n c e s p e c t r o p h o t o m e t r i c o p e r a t i n g c o n d i t io

45、 n E x c i t a t i o n wa v e l e n g t h : 3 0 7 n m; e m i s s i o n w a v e l e n g t h : 3 5 9 n m. F o r d if f e r e n t t y p e s o f i n s t r u m e n t , a d j u s t m e n t s h o u ld b e m a d e a c c o r d i n g t o d i f f e r e n t c o n d i t i o n s o f t h e i n s t r u m e n t s t

46、o o b t a i n t h e o p t i m u m e x c i t a t i o n a n d e m i s s io n w a v e l e n g t h s . 14 . 4 . 2 P r e p a r a t io n o f s t a n d a r d c u r v e A d d 0 . 2 , 0 . 5 , 1 . 0 , 5 . 0 a n d 1 0 . 0 m L s t a n d a r d w o r k i n g s o l u t i o n t o a s e r ie s o f 1 0 m L v o l u m

47、e t r i c f l a s k , a n d d il u t e t o ma r k w i t h 0 . 1 m o l / L h y d r o c h l o r i c a c i d s o l u t i o n . Me a s u r e t h e a b s o r b a n c e o f e a c h b y t h e f l u o r e s c e n c e s p e c t r o p h o t o me t e r a n d p l o t t h e a b s o r b a n c e s a g a i n s t c

48、o n c e n t r a t i o n s o f t h ia b e n d a - z o le t o p r e p a r e t h e s t a n d a r d c u r v e . F o r t h e s c a n n i n g c u r v e o f f l u o r e s c e n c e a b s o r b a n c e o f t h e s t a n d a r d , s e e f i g u r e A1 i n An n e x A. 14 . 4 - 3 D e t e r m i n a t io n o f s

49、 a m p l e s o l u t i o n Me a s u r e t h e a b s o r b a n c e o f t h e s a m p l e s o lu t i o n o b t a i n e d f r o m 3 . 4 . 3 b y f l u o r e s c e n c e s p e c t r o p h o - t o me t e r . O b t a i n t h e c o n c e n t r a t i o n o f t h ia b e n d a z o l e i n t h e s a m p l e s o l u t i o n f r o m t h e s t a n d a r d c u r v e . 14 . 5 B l a n k t e s t T h e o p e r a t i o n o f t h e b