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1、SN 中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 S N / T 1 0 8 5 -2 0 0 2 副结核病补体结合试验操作规程 P r o c e d u r e o f c o m p l e me n t f i x a t i o n t e s t f o r p a r a t u b e r c u l o s i s 2 0 0 2 一 0 3 一 1 5 发布 2 0 0 2 一 0 9 一 0 1实施 中华人民共和匡 国家 质 量 监 督检 验 检 疫 总 层 s N/ T 1 0 8 5 -2 0 0 2 前言 本标准是按照G B / T 1 . 1 -1 9 9 3 标准化工
2、作导则 第1 单元: 标准的起草与表述规则 第1 部分: 标准编写的基本规定 的要求编写的。 本标准参考了国内外有关资料和我国 在这方面的经验， 制定了适合我国出人境动物检验检疫的操 作方法。 本标准的附录A、 附录B为标准的附录。 本标准由中华人民共和国国家认证认可监督管理委员会提出并归口。 本标准起草单位: 中华人民共和国天津出入境检验检疫局。 本标准起草人: 曹燮 政、 范华炜、 王玉 玲。 本标准系首次发布的检验检疫行业标准。 中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 副结核病补体结合试验操作规程 S N/ T 1 0 8 5 -2 0 0 2 P r o c e d u r e o f
3、c o m p l e me n t f i x a t i o n t e s t f o r p a r a t u b e r c u l o s i s 范 围 本标准规定了副结核病补体结合试验的操作规范。 本标准适用于牛、 绵羊、 山羊副结核病的检验， 其他哺乳动物可以参照。 引用标准 下列标准所包含的条文， 通过在本标准中引用而构成为本标准的条文。本标准出版时， 所示版本均 为有效。所有标准都会被修订， 使用本标准的各方应探讨使用下列标准最新版本的可能性. G B / T 6 6 8 2 -1 9 9 2 分析实验室用水规格和试验方法 3 器材和试荆 3 . 1 器材 3 . 1
4、. 1 玻璃试管: 1 0 m m X 7 5 mm， 圆底， 洁净， 同质。 3 . 1 . 2 试管架。 3 . 1 . 3 加样器: 可调式或定量式， 。 . 0 5 m L -1 . 0 m L , 3 . 1 . 4 离心机: 低速， 使用水平转子。 I， ， 5 水浴锅: 3 7 0C, 3 . 1 . 6 水浴锅: 使用时参照附录B调节水温。 3 . 1 . 7 吸管: 1 m L , 2 m L , 5 m L , 1 0 m L o 3 . 2 试剂 3 . 2 . 1 试验用蒸馏水为 G B / T 6 6 8 2中的三级水。 3 . 2 . 2 溶血素: 冻干品， 使用时
5、按说明用蒸馏水溶解。 3 . 2 . 3 抗原: 冻干品， 使用时按说明用蒸馏水溶解。 3 . 2 . 4 补体: 冻干品， 使用时按说明用蒸馏水溶解。 3 . 2 . 5 红细胞悬液: 采健康成年绵羊血， 以1 : 1 . 2 的比 例与A l s e v e r 氏液混匀， 在4 保存5 d 后使 用。 使用前摇匀后取出 需量， 用2 0 倍量生理盐水洗涤3 次， 每次 用离心机以2 0 0 0 r / m i n 离心5 m i n , 最 后一次 1 0 mi n 。取沉淀的红细胞用生理盐水配制成 3 %悬液( V/ V ) , 3 . 2 . 6 标准阳 性血清: 冻干品， 使用时按
6、说明用蒸馏水溶解， 并用生理盐水作 1 : 1 0 稀释后5 6 水浴 灭能3 0 m i n , 3 , 2 - 7 标准阴性血清: 冻干品， 使用时按说明用蒸馏水溶解， 并作 1， 1 0稀释后按附录 B水浴灭能 3 0 mi n . 3 . 2 . 8 被检血清: 从被检动物静脉采血， 分离血清， 不能产生溶血， 4 保存。采血应与皮内变态反应同 天进行， 若需重复采血， 则第二次采血应在皮试后3 d内进行。 使用前用生理盐水作 1: 1 0 稀释后， 按附 中华人民共和国国家质f监督检验检疫总局 2 0 0 2 - 0 3 - 1 5 批准2 0 0 2 - 0 9 - 0 1 实施
7、1 S N/ T 1 0 8 5 -2 0 0 2 录B用水浴锅灭能3 0 m i n , 4 预备试验 4 . 1 配制标准溶血管( 见附录A) 4 - 2 溶血素效价测定 4 . 2 . 1 稀释: 取溶血素原液0 . 2 m L加生理盐水9 . 8 m L混匀， 制成1 0 0 倍稀释的 溶血素， 再按表1 稀 释成不同倍数。 表 1 溶血素稀释表 ，犷 飞i5t44 123456789 1 0 0 02 0 0 03 0 0 04 0 0 05 0 0 06 0 0 07 0 0 08 0 0 09 0 0 0 生理盐水/ m L 912345678 1, 1 0 0 溶血家/ m L
8、 1 1 : 1 0 0 0溶血素/ mL 11111111 4 . 2 . 2按表 2建立试验， 先将溶血素与红细胞混匀， 然后加人其他成分。 表 2 溶血素效价测定表 4 . 2 . 3 判定: 对比标准溶血管( 见附录A) 进行。 42 . 3 . 1 表 2中“ 一” 为1 0 0 %溶血， “ + ， 为7 5 溶血， “ + + ” 为5 0 %溶血， “ 柑” 为2 5 0/ n 溶血， “ 洲” 为 。 % 溶血。 4 . 2 . 3 . 2 对照管出现如下结果时试验及判定结果成立: 第 1 0 管溶血素对照 。 %溶血， 第 1 1 管补体对 照0 肠溶血， 第 1 2 管生
9、理盐水对照 。 %溶血。 42 . 3 . 3 以 1 0 0 %溶血的溶血素最高稀释倍数为溶血素的效价。 0 . 2 5 mL该稀释度的溶血素为一个溶 血单位。表 2 所列结果( 例) ， 溶血素效价为 1: 4 0 0 0 ， 即0 . 2 5 mL 1: 4 0 0 0 稀释的溶血素含一个溶血 单位。 4 . 2 - 3 - 4 溶血素工作液配制: 本试验使用 2 个溶血单位， 溶血素工作液稀释度按溶血素效价的 2 倍 计算。 根据表2 结果( 例) ， 用生理盐水将溶血素作1 : 2 0 0 0 稀释， 即为 溶血素工作液。 4 . 2 - 3 . 5 致敏红细胞配制: 将等量红细胞悬
10、液与溶血素工作液混匀， 3 7 水浴 1 5 mi n e 4 . 3 补体效价测定 4 . 3 . 1 用生理盐水将补体作 1: 2 0 稀释。 4 . 3 . 2 用生理盐水将抗原作 1: 1 0 0 稀释。 4 . 3 . 3 按表 3 建立试验。 s N / T 1 0 8 5 -2 0 0 2 表 3 补体效价侧定表 c5 1 23 4567 对 照 1 : 2 0补体/ . L 0 . 0 5 0 . 0 80 .1 10 .1 40 . 1 7 0 . 2 0 0 . 2 30 生理盐水/ mL 0 . 2 00 . 1 70 . 1 40 .1 10 .0 80 . 0 50
11、. 0 20 . 2 5 1: 1 0 0 抗原/ -L公 . 2 S0 . 2 50 . 2 5 0 . 2 5 0 . 2 50 . 2 50 . 2 50 . 2 5 生理盐水/ mL 0 . 2 50 . 2 50 . 2 50 . 2 50 . 2 50 . 2 50 . 2 50 . 2 5 混匀， 3 7 C 水浴 6 0 m i n 致敏红细胞/ .L 0 . 50 .5 0 . 50 . 50. 50 . 5 混 匀 3 7 水浴2 0 m in , 2 0 0 0 r / m i n 离心5 m i n 结果( 例)洲洲 十 一 姗 4 . 3 . 4 4 . 3 - 4
12、. 1 溶血 。 4 . 3 . 4 . 2 4 . 3 . 4 . 3 4 . 3 . 4 . 4 判定: 对比 标准溶血 管( 见附录A ) 进行。 表 3 中“ 一” 为 1 0 0 %溶血， “ 十” 为7 5 %溶血， “ 千 +为5 0 %溶血， “ 柑” 为 2 5 %溶血， “ 姗” 为 0 % 当对照管出现 。 %溶血时判定结果。 以 1 0 0 %溶血的最小补体量为一个补体单位， 表 2 结果( 例) 为 。 . 1 7 ml . 补体工作液配制: 先根据式( 1 ) 算出补体工作液的稀释倍数。 2 0 补体。 K 一 碧 x 0 . 2 5 ， ， 一 ( 工 ) 式中:
13、 K补体使用稀释倍数; V 补体用量。 按表 3中第 5 管为例 补体使用稀释倍数 = 0 . 1 7x 0 . 2 5=2 9 . 4 使用时用生理盐水将补体作1 : 2 9 稀释， 用量为0 . 2 5 m L a 4 . 4 抗 原效价的确认或测定: 根据供应单位的抗原说明 书来决定是否 需要进行抗原 效价的测定。如不 需测定， 则在确认抗原效价后按说明稀释使用; 如需测定， 则按下列步骤进行。 4 4用生理盐水 将抗原依次作1 ; 5 0 , 1 : 1 0 0 , 1 : 2 0 0 , 1 : 4 0 0 稀释。 用生 理盐水将阳性血清依次再作1 : 2 0 , 1 : 4 0 ,
14、 1 : S O 稀释。 标准阴性血清不再稀释。 按表 4 建立试验。 判定 对比标准溶血管( 见附录 A) 进行 表5 中 “ 一” 为1 0 0 %溶血， “ + 伪 7 5 0 o 溶血， “ + 十 ， 为5 0 % 溶血， “ 册” 为2 5 溶血， “ 湘” 为。 % 当血清对照管、 抗原对照管、 补体对照管出现 1 0 0 %溶血， 而红细胞对照管出现 。 %溶血时判 口ICJL 2345505. 车车4.4.本血4. 车4.4.本4.溶车 定抗原效价 。 表 4 副结核抗原测定表 了 履 4%f 拼7 5 %抑制溶血， 即 7 5 %结合; + + 5 0 %抑制溶血， 即 5
15、 0 %结合; +2 5 %抑制溶血， 即 2 5 %结合; 一 1 0 0 0 0 溶血， 即。 %结合。 5 . 2 . 2 判定标准: 被检血清1， 1 0 稀释时小于 5 0 0 o 结合为阴性。 1 ) 有的双边条救规定被检血清 1 “ 8或I r 5 稀释时小于5 0 %结合为阴性。 此时在试验中被检血清和标准血清的稀 释度应作相应的改变。 S N / r 1 0 8 5 -2 0 0 2 附录A ( 标准的附录) 标准溶血管配制 取沉淀红细胞。 . 1 5 m L ， 加人8 . 8 5 m L蒸馏水， 混匀， 使红细胞完全溶血后， 再 加人8 . 5 %氯化钠 溶 液 1 mL
16、 ， 即成 1 . 5 %生理盐水溶血液. 取沉淀红细胞0 . 1 5 m L ， 加人9 . 8 5 m L 生理盐水， 混匀， 即成1 . 5 %细胞悬液。 按表A l 配制不同 溶血度的标准溶血管。 表 Al 标准溶血管配制表 飞 卜 1G1 II 0 1 02 0304 05 06 07 08 09 01 0 0 生理盐水/ m L 0 . 7 50 . 7 50. 750 .7 50. 750 . 7 50 . 7 50 . 7 50 . 7 50 . 7 50 . 7 5 1 . 5 纬生理盐水溶血液/ mL 00 . 0 50 . 10 .1 50 . 20 . 2 50 . 3
17、0 . 3 50 . 40 . 4 50 . 5 1 . 5 %红细胞悬液/ .L 0 . 50 . 4 50 . 40 . 3 50 . 30 . 2 50 . 20 . 1 50 . 10 . 0 50 轻摇混匀后静置， 待红细胞部分或全部沉淀于管底或 2 0 0 0 r / mi n离心 5 mi n 后使用。 附录B ( 标准的附录) 几种动物血清的灭能温度 牛 绵羊、 山羊 骆驼 鹿 5 6 一 5 7 C 5 8 C 一 5 9 C 5 4 C 6 3 0C *草庐一苇草庐一苇*提供优质文档， 如果 你下载的文档有缺页、 模糊等现象或 者遇到找不到的稀缺文件， 请发站内 信和我联系！我一定帮你解决！ 提供优质文档， 如果 你下载的文档有缺页、 模糊等现象或 者遇到找不到的稀缺文件， 请发站内 信和我联系！我一定帮你解决！ 本人有各种国内外标准 20 余万个， 包括全系 列 GB 国标国标及国内行业行业及部门标准部门标准，全系列 BSI EN DIN JIS NF AS NZS GOST ASTM ISO ASME SSPC ANSI IEC IEEE ANSI UL AASHTO ABS ACI AREMA AWS ML NACE GM FAA TBR RCC 各国船级 社 船级 社 等大量其他国际标准。豆丁下载网址：豆丁下载网址： http:/