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1、微生物菌种的保藏方法 微生物菌种的保藏方法是小柯论文网通过网络搜集，并由本站工作人员整理后发布的，微生物菌种的保藏方法是篇质量较高的学术论文，供本站访问者学习和学术交流参考之用，不可用于其他商业目的，微生物菌种的保藏方法的论文版权归原作者所有，因网络整理，有些文章作者不详，敬请谅解，如需转摘，请注明出处小柯论文网，如果此论文无法满足您的论文要求，您可以申请本站帮您代写论文，以下是正文。 摘要 介绍了常用的微生物菌种保藏方法，包括斜面低温保藏法、液体石蜡保藏法、沙土管保藏法、生理盐水保藏法、冷冻真空干燥保藏法、液氮冷冻保藏法，并比较了它们的优缺点，旨在为微生物菌种的保藏提供参考。关键词 微生物菌
2、种；原理；保藏方法菌种资源是我国丰富的自然资源宝库的重要组成部分，随着生物学技术的不断发展，种质资源的利用对生命科学的研究起着越来越重要的作用，对菌种保藏技术也提出了越来越高的要求1。为了使自然界分离得到的野生型菌种和人工选育得到的用于科学研究和工业生产等方面的优良菌种、菌株尽可能长时间地在生产上发挥作用，需采用各种适宜的方法妥善保存以保证菌种成活，更重要的是保证菌种的遗传性状，使之不发生或尽可能少发生变异。因此，菌种保藏是一项重要的基础工作1-3。1微生物菌种保藏的基本原理菌种的保藏方法有很多，其原理主要是根据微生物的生理、生化特点，人为创造低温、干燥或缺氧条件，抑制微生物的代谢作用，使其生
3、命活动降至最低程度或处于休眠状态，使菌株很少发生突变，以达到保持纯种的目的2，4。2微生物菌种的保藏方法2.1斜面低温保藏法将要保藏的菌种接种在适宜的斜面培养基上培养，当菌体长满斜面后，把试管的棉塞换成无菌橡皮塞，并用蜡烛封好后置于04的冰箱中保藏，每隔24个月移植转管1次3-5。但要注意菌种的保藏时间及温度因微生物的种类不同而不同，如霉菌、放线菌等保藏24个月需移种1次，细菌最好每月移种1次，而有些食用菌如草菇、姬松茸等高温菌种，其菌丝在5以下易死亡，因此适宜的保藏温度为1012。此法是国内外常用的保存方法之一，简单易行，便于观察，但经常转代接种易发生变异、污染杂菌、发生差错。因此，每个菌株
4、常保存相继的3代培养物，便于对照2，6。2.2液体石蜡保藏法此法亦称矿物油保藏法。先将化学纯石蜡油（无色、透明的黏稠液体）装于三角瓶中，塞上棉塞并用牛皮纸包裹，放入高压锅中，在1.5kg/cm2的压力下灭菌30min，然后将三角瓶置于40的恒温箱中，让其中的水分蒸发至完全透明后备用，使用前先将石蜡油做无菌检查。在无菌条件下，用无菌吸管将无菌石蜡油注入已长好的斜面试管中，用量以高出斜面顶端1cm为宜，使菌种与空气隔绝，然后在棉塞外包上塑料纸或牛皮纸，将试管直立置于04的冰箱中保藏或低温干燥处保藏。保藏期间应定期检查，若培养基露出液面，应及时补充无菌石蜡油，使培养基始终处于液面下2，5，7。此法制
5、作简单，不需经常移种，但保藏时必须直立放置，所占空间较大，也不便于携带。且接种后，接种环在火焰上灼烧时，培养物容易与残留的液体石蜡一起飞溅2，8。2.3沙土管保藏法取河沙过40目筛去粗粒后，用10%盐酸浸泡24h以除去有机质，倒去酸水后用自来水冲洗至中性，烘干备用。另取非耕作层的不含腐殖质的瘦黄土或红土，用自来水浸泡使其呈中性，然后烘干、碾碎过100目筛。将处理好的沙与土以241的比例混匀，分装于小试管内，每管装1g左右，塞上棉塞，用牛皮纸包好后于高压锅内在1.5kg/cm2的压力下灭菌3045min。灭菌后进行无菌检验，合格后使用。将培养成熟的优良菌种（一般指孢子层生长丰满的菌种）用无菌水洗
6、下制成孢子悬液，每支沙土管用无菌吸管加入悬液0.5mL（一般以使沙土刚刚润湿为宜），塞好棉塞放入盛有干燥剂的真空干燥器内，用真空泵抽干水分。抽真空时间越短越好，以免孢子萌发。抽干的沙土管用无菌勺子捣松并每个种抽取1支回接于斜面培养基上，进行培养，观察生长情况和有无杂菌生长。若经检查没有问题，则将制备好的沙土管用石蜡封口放入冰箱或室内干燥处保藏2，7。此法多用于能产孢子的微生物，且保藏时间较长，但用于营养细胞效果不佳2。2.4生理盐水保藏法将菌种接入马铃薯葡萄糖培养液中，振荡培养57d后，将形成的菌丝球移入装有5mL无菌生理盐水的试管中，每管接45个菌丝球，塞上橡皮塞并用蜡封好，置于冰箱里保藏。
7、由于食盐溶液具有高渗透性，对杂菌孢子的萌发有较强的抑制和杀灭作用，从而能够减少或避免保藏期间菌种被污染8-10。此方法操作简便，不需特殊设备，适合于液体深层培养菌株的保存。2.5冷冻真空干燥保藏法将安瓿瓶用2%的盐酸浸泡1012h，用自来水冲洗干净后再用蒸馏水浸泡至pH值呈中性，干燥后置于高压锅内，在1.5kg/cm2的压力下灭菌3045min备用。将已生长好的菌体或孢子悬浮于灭菌的血清、卵白、脱脂奶及海藻糖等保护剂中制成浓菌液，将菌液无菌操作分装于准备好的安瓿瓶中，每支安瓿瓶分装0.2mL。分装好的安瓿瓶放入低温冰箱中冷冻，然后将冷冻后的安瓿瓶置于冷冻干燥箱内，冷冻干燥820h后用真空泵抽真
8、空，并在真空状态下熔封安瓿瓶，在-20下保藏2，4。该方法保藏的微生物菌株有分发时不用事先开启，便于包装，降低运输过程泄漏的危险等优点，但操作复杂，设备昂贵11。2.6液氮冷冻保藏法先将菌种制成悬液备用，然后清洗安瓿瓶并烘干，再往安瓿瓶中注入冷冻保护剂。保护剂应根据被保藏微生物的类别选择，一般每瓶注入10%20%的甘油0.8mL，塞上棉塞，放入高压锅内在1.5kg/cm2的压力下灭菌3045min，检查无菌后接入菌种，火焰熔封瓶口。将封好口的安瓿瓶放在冻结器内，冷冻速度以1min下降1为好，使其冻结至-35。然后将冻好的安瓿瓶立即放入-150-196的液氮罐中保藏2，10。此法除适宜于一般微生
9、物的保藏外，对一些用冷冻干燥法难以保存的微生物如支原体、衣原体，以及难以形成孢子的霉菌、噬菌体和动物细胞均可长期保藏，且性状不变异，但设备昂贵2。除上述方法外，还有蒸馏水保藏法、自然基质保藏法等，以上各法可根据实验室具体条件与需要及菌种特性选用，最好是每株菌种都采用2种以上的保藏方法，并根据菌种特性定期对保藏菌种进行复活检验。3参考文献1 蔡令仪，谭琦，曹晖，等.不同菌种保藏方法对香菇产量的影响J.食用菌学报，2003，10（1）：52-54.2 吕线红，郭利美.工业微生物菌种的保藏方法J.山东轻工业学院学报，2007，21（1）：52-55.3 刘萍，姜晓坤.食用菌菌种的保藏方法J.现代种业
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