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1、1 目的PURPOSE规范888物料、产品的沙门氏菌检验操作，确保检验结果的可靠性。2 范围SCOPE适用于888物料、产品的沙门氏菌检验工作。3 责任RESPONSIBILITY微生物检验员严格执行本规程，品质部负责人监督执行。4 程序PROCEDURE4.1定义和原理沙门氏菌广泛存在于动物的肠道和内脏，以及被粪便污染的水和土壤中，是细菌性食物中毒的主要病因。本方法利用沙门氏菌呈辛酸酯酶阳性，而氧化酶和脂肪酶均呈阴性的特性，对物料、产品进行沙门氏菌检验。4.2材料和设备4.2.1紫外灯：波长366nm，功率不小于6W。4.2.2放大镜：3至4倍。4.2.3毛细滴管。4.2.4 LX-B35L
2、压力蒸汽灭菌锅。4.2.5无菌的培养皿。4.2.6无菌的接种环。4.3培养基和试剂4.3.1 SCDLP液体培养基：按化妆品卫生规范（2007版）或使用商品培养基干粉配制。4.3.2四硫磺酸钠煌绿（TTB）增菌液：按GB4789.42010附录A.5配制或使用商品试剂。4.3.3 SS琼脂培养基（含1%蔗糖）：牛肉浸膏(或牛肉粉)5.0g，蛋白胨5.0g，乳糖10.0g，蔗糖10.0g，胆盐NO.38.5g，柠檬酸钠8.5g，硫代硫酸钠1.0g，柠檬酸铁1.0g，煌绿1.0g，中性红0.025g，琼脂13.5g，蒸馏水1000mL。制订者Prepared By: 88888审核者Reviewe
3、d By: 88888批准者Approved By: 8888888CC: 884.3.4 HE琼脂培养基：按GB4789.42010附录A.5或使用商品培养基干粉配制。 4.3.5玉米油维多利亚蓝琼脂培养基：灭菌后的基础培养基冷却至50左右，边摇边加入玉米油乳化液。倾注平皿，制成平板。基础培养基及玉米油乳化液配方如下：a）基础培养基：蛋白胨5g，酵母浸粉3g，氯化钠5g，琼脂13g，水900mL，pH7.8-8.0。将各成分加入水中，加热溶解。调节pH7.8-8.0，11615min高压灭菌。b）玉米油乳化液：玉米油100mL，0.1%维多利亚蓝水溶液100mL，0.5%琼脂溶液80mL，吐
4、温801mL。玉米油加维多利亚蓝水溶液混合，边振动边在沸水中加热溶化。然后，放入分液漏斗中，弃去蓝色水部分，再将着色的脂肪用水洗1-2次。将着色脂肪20mL加入810mL琼脂溶液中，再加1mL吐温80，11615min高压灭菌。冷却后用超声波乳化。4.3.6 MUCAP试剂：取MUCAP 100mg，加0.2mL纤维溶解剂溶解，再加Triton X-100 1.8mL，贮存于4冰箱。使用时用pH5.0的0.1mol/L醋酸盐缓冲液稀释10倍。4.3.7氧化酶试纸：将甲液与乙液等量混合。取定性滤纸，浸透混合液后，于70-80烘箱烘干，剪成大小适当的纸条，密封于塑料袋或瓶中，贮存于4冰箱备用。甲液
5、：1% -萘酚乙醇液；乙液：1% 二甲基对苯二胺草酸盐水溶液。4.4 检验步骤4.4.1增菌和前增菌取样品按SOP-QM-B017制备1：10稀释的检液。取10mL加到90mLSCDLP液体培养基中，置培养箱361培养18h24h。移取10mL，转接种于100mL四硫酸钠煌绿（TTB）增菌液内，421培养18h24h。4.4.2分离培养4.4.2.1分别用接种环取增菌液1 环，划线接种于一个SS 琼脂平板（含1%蔗糖）和一个HE琼脂平板。SS琼脂平板于36 1 培养2430h，HE平板于36 1 培养4048h。4.4.2.2沙门氏菌菌落特征：a）在SS 琼脂平板上：无色半透明，菌落中心带黑色
6、的菌落；或者菌落为粉红色，中心带黑色，但有时不明显。b）在HE平板上：无色半透明，菌落中心带黑色或几乎全黑色；或者菌落呈粉红色，中心带黑色。4.4.3MUCAP试验4.4.3.1 从培养的分离培养基或显色培养基上挑选疑似沙门氏菌的菌落，尽量选较大、分离较好的单个菌落，用中性笔做好标记并编号。4.4.3.2 用毛细滴管吸取MUCAP试剂，加一滴于编号的菌落上(覆盖整个菌落)。将一个平板的被检可疑菌落全部都滴加试剂后，将平板置于366nm紫外灯下检视10至15分钟。发蓝色荧光的为MUCAP试验阳性，将阳性菌落编号记录下来。4.4.4 氧化酶试验用接种环挑取MUCAP阳性菌落，涂于氧化酶试纸上，观察
7、涂菌点是否变蓝色。在10min内变蓝色为氧化酶试验阳性，不变色为阴性。4.4.5 脂肪酶试验将SS琼脂或HE琼脂上，MUCAP阳性且氧化酶试验阴性的菌落，用接种环挑取划线接种至玉米油维多利亚蓝琼脂培养基平板于36 1 培养4048h。观察长出的菌落，脂肪酶阳性菌菌落呈蓝色；阴性菌菌落则呈无色或粉红色。（注：氧化酶试验和脂肪酶试验顺序可以交换，或同时进行。）4.5记录和检验结果报告4.5.1在检验原始记录上详细记录观察结果。4.5.2菌落的MUCAP试验阳性，且氧化酶试验与脂肪酶试验均为阴性，判定为沙门氏菌，报告沙门氏菌阳性。其它情况均报告阴性。4.5.3检验出阳性结果的培养基平板要保存至少1个月。5 相关文件RELEVANT DOCUMENT编码Code名称Name8888888微生物检验样品制备标准操作规程6 附件ATTACHMENT编码Code名称Name版次Version No.页数Page7 修订历史REVISION HISTORY生效日期Date版次Version No.修订理由Reason for revision修订内容Content相关文件Relevant document2019.04.01A.0N/A新制定文件。N/A