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1、常用的细菌染色方法,革兰染色 抗酸染色 细菌基本形态结构观察,细菌染色意义,由于细菌个体微小，基本上无色透明，故将其用适当染料染色观察，方能显示它的形态、大小、构造及染色特性等，在细菌鉴别上有重要意义。 革兰染色是细菌学中使用最广泛的一种染色方法，籍此染色法，可将所有细菌区分为两大类。,细菌染色方法及原理,常采用美蓝，结晶紫等碱性染料进行染色。多数染料都是中性有机盐。据着色基的不同可分为以下类型： 碱性染料（basic dye）带正电染料。其阳离子部分为发色基团，可与细胞中带负电的组分结合。 酸性染料（Acid dye）带负电染料。其阴离子部分为发色基团，可与细胞中带正电的组分结合。,革兰染色
2、原理,细菌的等电点较低，约在pH 25之间，故在中性、碱性或弱碱性溶液中，菌体蛋白质电离后带负电荷，易与带正电荷的碱性染料如龙胆紫及碱性复红等结合，使细菌被染成紫色或红色。,一、细菌染色标本片的制备,细菌染色检查，首先要进行细菌标本制备。制备细菌标本一般包括涂片、干燥、固定三步。,固定的目的和方法,使细菌的细胞凝固，使菌体与玻片粘得更牢固 可改变菌体对染料的通透性 加热固定可杀死细菌，比较安全 固定的方法将制成的标本匀速通过火焰三次,革兰染色,染色： 初染（结晶紫） 媒染 （碘液） 脱色（酒精） 复染（复红） 滤纸吸干 油镜镜检,safranin,Crystal violet,染色步骤,结晶紫
3、初染 卢戈碘液媒染 乙醇脱色 复红复染,（）,（）,（）,（）,分钟水洗,分钟水洗,秒水洗,秒水洗吸干,Germ is stained violet or red,结晶紫初染分钟 水洗,碘液媒染分钟,水洗,酒精脱色秒,水洗,复红复染秒,水洗,滤纸吸干 油镜镜检,抗酸染色法(acid-fast stain),分枝杆菌属的细菌（包括结核分枝杆菌、麻风分枝杆菌等）为抗酸性细菌，一般染色法不易着色，须用抗酸染色法。 注意事项 涂片要略厚 加温染色或延长染色时间，加温时随时补加染色液 分枝杆菌呈红色(+) 其他细菌和背景为蓝色(-)。,操作过程,取痰液 涂片（略厚）干燥固定 石炭酸复红加温染色810分钟后 用3%的盐酸酒精脱色约12分钟， 脱色时轻摇玻片，直到涂片颜色脱去为止 水洗后，用碱性美蓝复染1分钟水洗， 印干 镜检,形态： 细长，略弯曲的杆菌，多聚集成团。无鞭毛,芽胞。 染色性： 不易着色，抗酸染色阳性。菌体呈红色，背景中其他物质蓝色。,结核分枝杆菌(M.tuberculosis),细菌基本形态结构观察,基本形态 球菌 杆菌 弧菌 特殊结构 芽孢 枯草杆菌，破伤风梭菌 荚膜 肺炎球菌 鞭毛 变形杆菌,葡萄球菌 链球菌 肺炎球菌 脑膜炎球菌,革兰阳性,革兰阴性,肺炎（双）球菌 荚膜,