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1、Part 薄层色谱分析的主要影响薄层色谱分析的主要影响 因素因素 一、样品的预处理及供试液的制备 一捻金中人参二醇和人参三醇的鉴别 左：稀酸水解后氯仿萃取，受大黄中成分的干扰，无法辨认 人参二醇和人参三醇。 右：过氧化铝小柱 八珍丸中甘草的鉴别 左：未处理 右：过硅烷化硅胶小柱 1.脱脂后甲醇提取，直接 点样。 2.正丁醇萃取 3.过氧化铝小柱（40甲 醇洗脱）后，正丁醇萃 取，提取液蒸干，甲醇溶 解 4.人参对照药材 5.甘草对照药材 参苓白术散中人参和甘草的鉴别 样品供试液净化的方法 w单一溶剂萃取法 w分段萃取法 w液液萃取法 w固液萃取法 氧化铝小柱、聚酰胺小柱、硅烷化硅胶小柱 等 二
2、、薄层色谱的上样技术 w要求原点3mm，否则分离数SN太大。 w溶解样品的溶剂具有洗脱能力，样品在原点 位置环形展开“上样环形色谱效应” w供试液溶剂在原点的残留改变展开的选 择性 w上样时对薄层板的机械损坏 三、吸附剂活性与相对湿度对薄层色 谱的影响 厚朴中厚朴酚及和厚朴酚的鉴别 不同湿度下赤芍和白芍的鉴别 左图：湿度32，右图：70 相对湿度的控制方法 w有的种类要求不严格：3070即可。但 为了实验具有良好的重现性，应记录实验时 的相对湿度。 w控制方法：将双层展开槽中的一侧加入一定 浓度的硫酸，将点好样的薄层板放入另一侧 槽中，密闭1530分钟后，再加入展开剂展 开。 湿度与硫酸浓度关
3、系 不同湿度对苍术正己烷提取物薄层行为的影响 四、溶剂蒸气在薄层色谱中的作用 薄层色谱与柱色谱的区别之一就是溶剂 的蒸气相在展开箱中也参与色谱展开而形成 三维的层析过程。展开箱的气体空间在层析 过程中起着重要的作用。 通常所谓的“展开箱饱和”应该严格区分以 下几种情况： (1)展开箱饱和；是指展开前及展开中溶剂系统中所有 组分在展开箱的整个气体空间达到平衡，即达到饱 和状态；但在日常的实践中较少需要在“饱和”状 态下展开，而只需用展开剂(或规定的溶剂)的蒸气 在展开箱中预平衡一定的时间，即 “预平衡”。 (2)预吸附：通常是指薄层板的干燥板面(即未被溶剂 湿润的部分)对展开箱率问气体分子的任何
4、程度的吸 附，即通常所谓的“顶饱和”。 (3)吸附饱和：是指薄层板的未被溶剂湿润的部分与 展开箱的饱和气体空间达到平衡状态，即“完全饱 和”，这是预吸附的极限状态。 (4)毛细管饱和：是指薄层板所有的自由空隙借毛细 管的作用被溶剂充满的过程，即相当于展外完成后 的状态。 w饱和的情况与展开箱的类型有关，常规的平底展开 箱在展开前较难达到展开箱饱和，所以普通的做法 是在内壁加贴与之等宽等高的用溶剂湿润的滤 纸有助于达到饱和。用双槽展开箱在其一侧槽中 加溶剂可以较容易地达到吸附饱和及展开箱饱和。 如用夹心式展开箱，由于箱内空间间很小，展开前 因为空间没有溶剂分子、而且很难有空间扩散，所 以实际上是
5、非饱和的。在这种非饱和的夹心式展开 箱中薄层板不产生预吸附现象。通常误认为夹心式 展开槽空间小很容易饱和，其实只有在展开完成后 才达到饱和，但这时对层析过程已不起作用。 w在常规薄层色谱分析中，预吸附和吸附饱和对 层析过秤有很大的影响。吸附剂表面的空间是很有 限的 当用多组分溶剂展升时，不同溶剂分子在 吸附区相互竞争，发生“取代效应”，尤其薄层板的 下部，一个组分的等温吸附线会受到另外组分的性 质和相对饱和程度的影响，硅胶是亲水性吸附 剂它首先对溶剂组分中的极性分子有更大的亲合 力，所以在吸附平衡的过程中，被吸附的各组分的 浓度比与气体空间的很不相同，与溶剂的液相组成 差别更大。可以想象在不加
6、控制的情况下情况是很 复杂的。简言之，薄层板在没有预吸附时混合溶 剂系统中的一部分溶剂分子有选择地被吸附在薄层 板面上而形成固定相，同时在板上形成溶剂梯度从 而直接影响层析过程，溶剂的蒸气相、液相和固定 相起构成了个作用机制复杂的三维层析过程。 黄连中生物碱的薄层鉴别 w展开剂：苯醋酸乙酯甲醇异丙醇浓 氨溶液 浓氨溶液的作用：氨作为蒸气相参加预饱 和；水为展开剂的组成成分。 左图：高浓度浓氨溶液预平衡 右图：低浓度氨溶液预平衡 黄连中生物碱的薄层鉴别 人参及西洋参的薄层鉴别 五、关于薄层色谱的优化 及溶剂系统(展开剂)的选择 w依靠色谱分离混合物质需要解决的主要问题有 两个： (1)相邻物质对
7、的分离； (2)在一个宽极性范围内的多组分混合物的分离。 目前主要方法： w三角形法 w单纯形优选法 w溶剂强度法 w均匀设计法等 但均不完美。 实验中应多做比 较。 单一溶剂极性顺序 应注意含水乙醚与无水乙醚的极性差异 左图：正丁醇冰醋酸水（7：2：1） 右图：正丁醇氯仿丙酮冰醋酸水（7：5：4：1：1） 黄连中生物碱的薄层鉴别 不同展开剂对人参皂苷的分离效果 六、温度对薄层色谱的影响 w在相对湿度恒定的情况下，一般在较高温度 展开时，Rf值较高；反之, Rf值降低；但一般 来说温度变化在5， Rf值变化一般不会 超过0.02。 w温度首先影响各有机溶剂的蒸发程度，影响 了展开槽中各蒸气比例，故影响到被分离物 质的层析行为。 w其次，温度的变化影响了含水展开剂两相的 溶解度，改变了溶剂的比例。 不同温度下人参中人参皂苷的薄层层 析行为（氯仿- 甲醇- 水65：35：10， 下层溶液） 2610 三七总皂苷的薄层鉴别 常温展开三七皂苷R1与 人参皂苷分不开 低于10展开三七皂苷R1与 人参皂苷可以分开 七、影响蒲层色谱的其他因素 w操作者的熟练程度； w溶剂的质量等 不合格的手铺自制板 新鲜溶剂与多次开瓶使用后的溶剂 参考书目 w薄层层离在中草药分析中的应用 w中华人民共和国药典中药薄层色谱彩色图集 THANKS！